趋化因子受体CXCR4小分子干扰RNA表达载体的构建及表达

doi:吉林省科技厅科研基金资助课题（吉科合字第

趋化因子受体CXCR4小分子干扰RNA表达载体的构建及表达

刘艳¹，王珑²，张大维³，赵德明¹

（1．中国农业大学动物医学院，北京 100039；2．北京市实验动物研究中心，北京 100012；3. 吉林大学基础医学院实验动物中心，吉林长春 130021）

收稿日期:2007-03-28 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-11-28 发布日期:2007-11-28
通讯作者: 赵德明

Construction and expression of small interfering RNA expression vector of CXCR4

IU Yan¹,WANG Long²,ZHANG Da-wei³,ZHAO De-ming¹

(1. College of Animal Medicine,China Agriculture University,Beijing 100039,China;2. Beijing Laboratory Animal Science Center,Beijing 100012,China；3．Center of Laboratory Animal Science,School of Basic Medical Sciences,Jilin University,Changchun 130021,China)

Received:2007-03-28 Revised:1900-01-01 Online:2007-11-28 Published:2007-11-28
Contact: ZHAO De-ming

摘要/Abstract

摘要： 目的：构建趋化因子受体CXCR4小分子干扰RNA（siRNA）表达载体，研究其对CXCR4基因表达的沉默效果，探索抗人免疫缺陷病毒-1 （HIV-1）治疗的新途径。方法：根据软件设计针对CXCR4基因的siRNA序列，经退火成互补双链，克隆到Psilencer^M3.1-H1 neo载体中，经测序鉴定插入序列的正确性。转染MT₄细胞后，采用RT-PCR及流式细胞仪方法检测转染siRNA质粒的实验组、转染空载体的阴性对照组和空白细胞对照组间抑制基因表达情况。结果： PCR及琼脂糖凝胶电泳检测重组质粒Psilencer^M 3.1-H1- siRNA neo，有正确的特异性片段，DNA测序也证明具有正确序列；该载体转染MT₄细胞48 h后，能明显抑制CXCR4基因表达，其表达抑制率为70%，与空白对照组和阴性组比较差异有显著性（P<0.05）。结论：成功构建趋化因子受体CXCR4的siRNA表达载体。

关键词: 趋化因子, 人免疫缺陷病毒1型, RNA干扰, 小分子RNA

Abstract: To construct the recombinant plasmid carrying small interfering RNA(siRNA) to CXCR4 and observe dumbness effect of chemokine receptor gene CXCR4 suppression by RNA interference(RNAi),and explore the new method of more efficacious therapeutic possibilities for HIV-1. Methods Small interfering RNAs targeting CXCR4 gene were designed by using software.The complement form was obtained by annealing and interted into vector Psilencer3.1-H1neo.After sequencing,MT₄ cells were transfected using the plasmid vector.RT-PCR and flow cytometry detection were used to evaluate the suppression of CXCX4 expression in different groups.ResultsThe recombinant plasmid had the correct special fragments and DNA sequence detected by PCR,electrophoresis and DNA sequencing;The siRNA obviously suppressed the expression of CXCR4.When transfected with plasmid vector for 48 h,the inhibitory rate was 70%,compared with control and negative groups,there were significant differences （P<0.05）. Conclusion The siRNA expression vector of CXCR4 is constructed successfully.

Key words: chemokine, HIV-1, RNA interference, small interfering RNA

中图分类号:

刘艳，王珑，张大维，赵德明. 趋化因子受体CXCR4小分子干扰RNA表达载体的构建及表达[J]. J4, 2007, 33(6): 992-996.

IU Yan,WANG Long,ZHANG Da-wei,ZHAO De-ming. Construction and expression of small interfering RNA expression vector of CXCR4[J]. J4, 2007, 33(6): 992-996.

[1]	马晓周, 刘麒麟, 尹唯凰, 王越, 于阳, 杨刚, 于子莹. CC趋化因子受体6在人唾液腺腺样囊性癌组织中的表达及其临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(01): 147-150.
[2]	徐吉光, 李宇宁. 叶酸联合维生素B12对高同型半胱氨酸血症引起大鼠动脉粥样硬化的治疗作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2017, 43(05): 943-947.
[3]	昝晓燕, 吴贻刚. 趋化因子配体19和趋化因子受体7在肥胖脂肪组织慢性炎症中的作用及有氧运动对其影响的研究进展[J]. 吉林大学学报(医学版), 2017, 43(03): 659-662.
[4]	张晶, 王志成, 赵大力, 卢晓倩, 沈智渊, 齐亚莉. 电离辐射对肺癌H460细胞凋亡的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2017, 43(03): 522-526.
[5]	崔磊华, 及昕, 李明贺, 韩明林, 张宁, 孙兰芳, 韩成敏. miR-34a在牙龈鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(06): 1099-1103.
[6]	王堃, 张爱臣, 盛敏佳, 潘颖, 佟玲玲, 孙小淳. 骨桥蛋白和趋化因子受体4在卵巢肿瘤组织中的表达及其意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2015, 41(06): 1186-1189.
[7]	黄志立, 张丽君, 伍丽华, 王妍, 杨汝德. RNA干扰血管紧张素原基因表达对前脂肪细胞3T3-L1分化的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2015, 41(06): 1195-1200.
[8]	方芳, 张万生, 唐化勇, 赵良中, 陈爽, 李强, 王立国. CD147 RNA干扰对前列腺癌LNCaP-AI细胞体外侵袭力的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2015, 41(03): 460-463.
[9]	王珂, 邹积艳, 汪丽, 杜珍武, 王俊容, 叶聪, 潘颖. RhoC慢病毒干扰载体的构建及其对卵巢癌SKOV3细胞中RhoC mRNA表达的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2015, 41(02): 304-306.
[10]	张成才, 宋艳艳, 周梦娇, 崔志倩, 张西臣, 邢沈阳. RNA干扰YWHAZ基因对结肠癌HCT-8细胞增殖的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2015, 41(02): 307-310.
[11]	刘畅, 高薇, 冯欣. RNA干扰沉默STAT3对胶原诱导大鼠类风湿性关节炎的治疗作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2015, 41(01): 77-82.
[12]	刘相良,原铭贞,刘笑玎,王司仪,梁豪君,高歌,李波,董春玲. 趋化因子及其受体在急性肺损伤中作用的研究进展[J]. 吉林大学学报(医学版), 2014, 40(04): 908-912.
[13]	蒋清虎，罗伟，温路，胡惠雯，邓大炜，吴忠均. ARK5在肝癌组织中的表达及其对肝癌SMMC-7721细胞生长的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2014, 40(04): 743-747.
[14]	曹红，王林，李矿发，庞雪利，苏敏，黄云秀，魏兰，陈婷梅 . 瘦素对单核细胞THP1分泌趋化因子的影响及其作用机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2014, 40(03): 482-487.
[15]	张霞，张秀梅，肖建英 . 靶向CK2α基因的siRNA对结肠癌HCT116细胞生长抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2014, 40(03): 621-625.