瘦素对单核细胞THP1分泌趋化因子的影响及其作用机制

doi:10.13481/j.1671-587x.20140304

吉林大学学报(医学版)

瘦素对单核细胞THP1分泌趋化因子的影响及其作用机制

曹红，王林，李矿发，庞雪利，苏敏，黄云秀，魏兰，陈婷梅

（重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆 400016）

收稿日期:2013-10-28 出版日期:2014-05-28 发布日期:2014-05-28
通讯作者: 陈婷梅 E-mail:（Tel：023-68485555，E-mail:chentingmei@sohu.com）
作者简介:曹红（198６-），女，湖南省郴州市人，在读医学硕士，主要从事肿瘤微环境与肿瘤转移、新生血管生成和肿瘤免疫抑制等方面的研究。 
基金资助:
国家自然科学基金面上项目资助课题（81272544）；重庆市科委自然科学基金计划项目资助课题（cstc2012jjA10011）

Influence of leptin on secretion of chemokine in THP1 cells and its mechanism

CAO Hong,WANG Lin,LI Kuang-fa,PANG Xue-li,SU Min,HUANG Yun-xiu,WEI Lan,CHEN Ting-mei

（Key Laboratory of Clinical Laboratory Medical Diagnostics,Ministry of Education,School of Laboratory Medicine,Chongqing Medical University,Chongqing 400016,China）

Received:2013-10-28 Online:2014-05-28 Published:2014-05-28

摘要/Abstract

摘要：

目的：探讨瘦素促进单核细胞THP1分泌趋化因子的作用及其相关机制，为研究瘦素调节机体免疫功能提供依据。方法：采用RT-PCR法和流式细胞术检测 THP1细胞瘦素受体 (Ob-Rb和Ob-Rt) 表达。选取对数生长期THP1细胞，随机分为空白对照组和10、50、100及200 μg•L^-1瘦素组，采用Transwell实验检测各处理组穿膜细胞数。THP1细胞分为空白对照组和100 μg•L^-1瘦素组，采用Western blotting法检测信号通路关键分子p-AKT、 p-ERK 1/2和p-STAT3表达水平。THP1细胞分为空白对照组、100 μg•L^-1瘦素组、100 μg•L^-1瘦素+DMSO组、100 μg?L-1瘦素+50 μmol•L^-1 AG490组、100 μg?L-1瘦素+10 μmol•L^-1 LY294002组和100 μg•L^-1瘦素+10 mol•L^-1PD980590组，采用RT-PCR法和Western blotting法检测各组细胞因子IL-8表达水平。结果：瘦素长受体Ob-Rb和短受体Ob-Rt在THP1细胞中均有高表达。与空白对照组比较，50、100和200 μg•L^-1瘦素组穿膜细胞数明显增加(P<0.05)。与空白对照组比较，100 μg•L^-1瘦素组THP1细胞中p-AKT、p-ERK 1/2和p-STAT3表达水平明显升高 (P<0.05)。与空白对照组比较，50、100和200 μg•L^-1瘦素组THP1细胞中IL-8表达水平明显升高(P<0.05)；与100 μg?L-1瘦素组比较，100 μg•L^-1瘦素+10 μmol•L^-1 LY294002组和100 μg?L-1瘦素+10 mol•L^-1 PD980590组THP1细胞中IL-8表达水平明显降低(P<0.05)，而100 μg?L-1瘦素+50 μmol•L^-1 AG490组IL-8表达水平变化不明显 (P>0.05)。结论：瘦素能促进单核细胞T
HP1分泌趋化因子，其机制可能与 PI3K/AKT和MAPK/ERK 1/2信号通路有关。

关键词: 瘦素, THP1细胞, 趋化因子, 白细胞介素-8

Abstract:

To investigate the effect of leptin on the secretion of chemokine in THP1 cells and explore its related mechanism,and to provide basis for research on the role of leptin in immune response.Methods The expressions of Ob-Rb and Ob-Rt in THP1 cells were detected by RT-PCR and flow cytometry (FCM).The THP1 cells at logarithm growth phase were selected and randomly divided into blank control group and different concentrations(10,50,100,200 μg•L^-1) of leptin groups.Transwell chamber assay was performed to detect the number of invated THP1 cells.The THP1 cells were divided into blank control group and 100 μg•L^-1 leptin group.Western blotting method was carried out to detect the expressions of p-AKT,p-ERK 1/2,and p-STAT3 in THP1 cells.The THP1 cells were divided into blank control group and 100 μg•L^-1 leptin group,100 μg•L^-1 leptin+ DMSO group,100 μg•L^-1 leptin+50 μmol?L-1 AG490 group,100 μg•L^-1 leptin+10 μmol•L^-1 LY294002 group and 100 μg•L^-1 leptin+ 10 mol•L^-1 PD980590 group.RT-PCR and Western blotting methods were performed to detect the expression of IL-8.Results Ob-Rb and Ob-Rt were highly expressed in THP1 cells.Compared with blank control group,the number of invated THP1 cells was significantly increased in 50,100, and 200 μg•L^-1 leptin groups (P<0.05).Compared with blank control group,the expressions of p-STAT3,p-ERK 1/2 and p-AKT in THP1 cells were up-regulated in 100 ug•L^-1 leptin group(P<0.05).Compared with blank control group,the mRNA and protein expressions of IL8 in THP1 cells in 50,100,and 200 μg?L-1 leptin groups were remarkably increased(P<0.05);compared with 100 μg•L^-1 leptin group,the expressions of IL-8 in THP1 cells in 100 μg•L^-1 leptin+10 mol•L^-1 PD980590 group and 100 μg•L^-1 leptin+10 μmol•L^-1 LY2 94002 group were decreased(P<0.05),while the expression of IL-8 in 100 μg?L-1 leptin+ 50 μmol•L^-1 AG490 group had no change(P>0.05).Conclusion leptin can up-regulate the expression of chemokine in THP1 cells,which might be associated with PI3K-AKT and MAPK/ERK 1/2 signaling pathways.

Key words: leptin, THP1 cells, chemokine, interleukin-8

中图分类号:

R392.12

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