J4 ›› 2011, Vol. 37 ›› Issue (2): 196-201.
周杨|朱建国|唐小春|闫森|宋娜|张明军|李莉|欧阳红生|逄大欣
ZHOU Yang,ZHU Jian-guo,TANG Xiao-chun,YAN Sen,SONG Na,ZHANG Ming-jun,LI Li,OU-YANG Hong-sheng,PANG Da-xin
摘要:
目的:构建表达Cre重组酶的载体Cre-pCEP4,并验证其能够有效识别loxP位点,为人类疾病动物模型的建立提供依据。方法:构建重组载体Cre-pCEP4和pStop-eGFP,利用Fugene HD转染猪胚胎成纤维细胞(PEF)和MCF-7细胞系,利用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况。结果:成功构建重组载体Cre-pCEP4和pStop-eGFP,将2个载体瞬时共转染PEF;经潮酶素B筛选出Cre重组酶稳定表达的MCF-7细胞系瞬时转染pStop-eGFP,在荧光显微镜下观察2种细胞均有绿色荧光蛋白的表达。而单独转染pStop-eGFP的MCF-7细胞系和PEF均未见绿色荧光蛋白的表达。结论:重组载体Cre-pCEP4在细胞内能够表达Cre重组酶,并且表达的Cre重组酶能够识别loxP位点,删除两同向loxP间的DNA片段。
中图分类号: