人线粒体超氧化物歧化酶真核表达载体的构建及其在HUVEC中的表达

doi:10.7694/jldxyxb20140103

吉林大学学报(医学版)

人线粒体超氧化物歧化酶真核表达载体的构建及其在HUVEC中的表达

仲苓芝，李文雪，李秀英，李新娜，李玉林，李荣贵

(吉林大学基础医学院病理生物学教育部重点实验室,吉林长春130021)

收稿日期:2013-06-04 出版日期:2014-01-28 发布日期:2014-01-28
通讯作者: 李荣贵 E-mail:（Tel:0431- 85619481,E-mail:lirg@jlu.edu.cn)
作者简介:仲苓芝（1984-），女，山东省烟台市人，在读医学博士，主要从事肿瘤分子病理学方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金面上项目资助课题（21277057）

Construction of eukaryotic expression vector of human mitochondrial superoxide dismutase and its expression in HUVEC

ZHONG Ling-zhi,LI Wen-xue,LI Xiu-ying,LI Xin-na,LI Yu-lin,LI Rong-gui

(Key Laboratory of Pathobiology,Ministry of Education,School of Basic Medical Sciences,Jilin University,Changchun 130021,China)

Received:2013-06-04 Online:2014-01-28 Published:2014-01-28

摘要/Abstract

摘要：

目的：构建人线粒体超氧化物歧化酶2（SOD2）的真核细胞表达载体，探讨其在人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中的表达效果。方法：以HUVEC mRNA为原始模板,应用RT-PCR技术,扩增编码线粒体SOD2全长的cDNA片段。利用分子生物学技术，将扩增的cDNA片段与真核细胞表达载体pcDNA3.0的多酶切位点相连接，构成重组质粒并转染到HUVEC，将细胞分为HUVEC母细胞组、转染pcDNA3.0空载组和转染pcDNA3.0-SOD2组。应用RT-PCR方法检测SOD2在HUVEC中的表达情况。结果：将表达SOD2全长cDNA片段定向克隆至质粒pcDNA3.0，测序结果表明成功构建人线粒体SOD2的真核细胞表达载体pcDNA3.0-SOD2。该载体稳定转染HUVEC后，在细胞内获得了稳定表达。与母细胞组和空载组比较，转染pcDNA3.0-SOD2组SOD2 mRNA表达水平明显增加。结论：成功构建SOD2的真核细胞表达载体pcDNA3.0-SOD2，并在人HUVEC中成功表达。本研究为SOD2对细胞保护作用研究提供了实验模型。

关键词: 线粒体超氧化物歧化酶, pcDNA3.0, 人脐静脉内皮细胞

Abstract:

To construct the recombinant eukaryotic expression vector of mitochondrial superoxide dismutase 2 (SOD2) and to explore its expression efficacy in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC).Methods SOD2 gene full-length cDNA was amplified from HUVEC by RT-PCR and the target gene SOD2 was connected with the plasmid pcDNA3.0 vector.The recombinant plasmid was constructed and transfected into HUVEC.The cells were grouped into HUVEC,pcDNA3.0 and pcDNA3.0-SOD2 transfected groups.The expression of SOD2 in HUVEC was detected by RT- PCR.

Key words: , mitochondrial superoxide dismutase, pcDNA3.0, human umbilical vein endothelial cell

中图分类号:

仲苓芝，李文雪，李秀英，李新娜，李玉林，李荣贵. 人线粒体超氧化物歧化酶真核表达载体的构建及其在HUVEC中的表达[J]. 吉林大学学报(医学版), 2014, 40(01): 10-14.

ZHONG Ling-zhi,LI Wen-xue,LI Xiu-ying,LI Xin-na,LI Yu-lin,LI Rong-gui. Construction of eukaryotic expression vector of human mitochondrial superoxide dismutase and its expression in HUVEC[J]. Journal of Jilin University Medicine Edition, 2014, 40(01): 10-14.

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人线粒体超氧化物歧化酶真核表达载体的构建及其在HUVEC中的表达

Construction of eukaryotic expression vector of human mitochondrial superoxide dismutase and its expression in HUVEC

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