辐射诱导人TRAIL基因表达的腺病毒穿梭质粒的构建及鉴定

doi:国家自然科学基金资助课题（30570546）

辐射诱导人TRAIL基因表达的腺病毒穿梭质粒的构建及鉴定

李艳博¹，梁硕¹，董丽华²，杨巍¹，郭

1.吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室，吉林长春 130021;2.吉林大学第一医院肿瘤中心放疗科，吉林长春 130021；3 .吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室，吉林长春 130021

收稿日期:2007-09-12 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-05-28 发布日期:2008-05-28
通讯作者: 龚守良

Construction and identification of recombinant adenoviral shuttle vector with radiation-inducible TRAIL gene

LI Yan-bo¹， LIANG Shuo¹， DONG Li-hua²， YA

1.MH Radiobiology Research Unit, School of Public Health, Jilin University, Changchun 130021, China;2.Department of Radiotherapy, Tumor Center, First Hospital, Jilin University, Changchun 130021,China； 3.Department of Toxicology, School of Public Health, Jilin University, Changchun 130021, China

Received:2007-09-12 Revised:1900-01-01 Online:2008-05-28 Published:2008-05-28
Contact: GONG Shou-liang

摘要/Abstract

摘要： 目的：构建辐射敏感Egr-1启动子诱导人肿瘤坏死因子（TNF）相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因表达的腺病毒穿梭质粒pshuttle-Egr1-hTRAIL。方法：利用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法从pACCMV-hTRAIL质粒中扩增得到TRAIL基因片段，并将其连接到pMD19T载体进行测序，利用基因重组技术构建含有辐射诱导启动子Egr-1的腺病毒穿梭质粒pshuttle-Egr1-hTRAIL。结果：PCR扩增出约820 bp的片段，测序结果证实扩增片段的序列与GenBank公布（NM_003810）的一致。pshuttle-Egr1-hTRAIL用EcoRⅠ、KpnⅠ双酶切重组得到大小为3 540和4 299 bp的2个片段，用SmaⅠ酶切得到1 517、2 282和4 040 bp 的3个片段，用BamHⅠ酶切得到3 304和4 535 bp的2个片段，与预期结果完全一致。结论：成功克隆了hTRAIL基因，并构建了辐射诱导表达的腺病毒穿梭质粒pshuttle-Egr1-hTRAIL。

关键词: 克隆, 分子, 腺病毒, 辐射, Egr-1

Abstract: Abstract:Objective To construct a recombinant adenoviral shuttle vector pshuttle-Egr1-hTRAIL containing radiation-sensitive Egr-1 promoter and TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL). Methods The TRAIL gene fragment was acquired from the plasmid pACCMV-hTRAIL by RT-PCR.Then the TRAIL gene was ligated to pMD19T vector and sequenced.With the gene recombinant technique, the recombinant plasmid pshuttle-Egr1-hTRAIL with radiation-inducible promoter Egr-1 was constructed. Results A fragment about 820 bp was amplified by PCR, and the sequence of acquired hTRAIL gene was totally in concordance with that published in GenBank（NM_003810）.Moreover, the recombinant plasmid pshuttle-Egr1-hTRAIL was digested by EcoRⅠand KpnⅠdouble-enzyme and BamHⅠsingly both into two fragments, with the length of 3 540 and 4 299 bp, 3 304 and 4 535 bp,　 respectively.The SmaⅠenzyme could digest it into three fragments with lengths of 1 517, 2 282 and 4 040 bp.The results of enzyme identification were all in concordance with that expected. Conclusion The hTRAIL gene is cloned and the recombinant plasmid pshuttle-Egr1-hTRAIL is constructed successfully.

Key words: cloning, molecular, adenovirus, radiation, Egr-1

中图分类号:

R730.55

李艳博，梁硕，董丽华，杨巍，郭. 辐射诱导人TRAIL基因表达的腺病毒穿梭质粒的构建及鉴定[J]. J4, 2008, 34(3): 364-368.

LI Yan-bo， LIANG Shuo， DONG Li-hua， YA. Construction and identification of recombinant adenoviral shuttle vector with radiation-inducible TRAIL gene[J]. J4, 2008, 34(3): 364-368.

[1]	于雷, 唐庚, 方芳, 李鑫, 龚守良, 王志成, 王剑锋. 低剂量辐射诱导小鼠睾丸细胞中IRE1α和XBP1 mRNA及其蛋白的表达[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(05): 919-923.
[2]	尹芳蕊, 庞春艳, 耿立霞, 王永福. 过表达miR-124a对J774.1细胞中TNF-α和IL-6表达水平及细胞周期的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(05): 983-987.
[3]	李鑫, 马云飞, 唐庚, 韦麒, 纪红池, 田嘉安, 申延男, 王志成. 线粒体靶向KillerRed诱导的ROS增强辐射对HeLa细胞的增殖抑制作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(04): 718-723.
[4]	治丁铭, 隋殿军, 岂蕊, 苗永迪, 韩冬, 娄石磊, 邱悦, 孙聪. 基于网络药理学探讨葛根治疗高脂蛋白血症的潜在作用靶点[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(04): 724-730.
[5]	杨文延, 刘强, 孙志娟, 杜利清, 徐畅, 王彦, 柳杨, 王芹. 褪黑素对人非小细胞肺癌H1299细胞辐射敏感性的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(03): 532-536.
[6]	刘少伟, 姜欢, 王晓龙, 李梦红, 陈玉, 唐中元, 胡敏. 兔抗破骨细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶多克隆抗体的制备和应用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(03): 661-666.
[7]	张艳霞, 李跃辉, 张丽红, 张年萍, 闫燕艳, 杨小会, 冯湘玲. 沉默HOXA13基因对肝癌HepG₂和QGY-7703细胞恶性表型的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(02): 315-320.
[8]	齐亚莉, 刘扬, 梁硕, 龚守良, 王志成, 刘威武. 三重靶向介导的Smac过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和周期进程的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(01): 90-94.
[9]	林玉茵, 陈文生, 郭晓兰, 谭茵, 贺小松, 戴建威. 人生长激素释放激素受体剪接变异体1型对人肝癌细胞HepG2增殖的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2017, 43(03): 474-478.
[10]	张晶, 王志成, 赵大力, 卢晓倩, 沈智渊, 齐亚莉. 电离辐射对肺癌H460细胞凋亡的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2017, 43(03): 522-526.
[11]	弓婷婷, 韩雪立, 韩津梁, 袁庆海. iDose⁴迭代重建技术和滤波反投影技术在冠状动脉CT成像中的应用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2017, 43(01): 159-163.
[12]	廖蕤堃, 邓小林, 曾丹妮, 吴晓凤, 文明. SPIO-shRNA分子探针注射不同时间点荷瘤裸鼠肿瘤区域组织信号变化及MRI最佳扫描时间[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(06): 1220-1225.
[13]	崔磊华, 及昕, 李明贺, 韩明林, 张宁, 孙兰芳, 韩成敏. miR-34a在牙龈鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(06): 1099-1103.
[14]	于雷, 王蕴龙, 陈志深, 王新春, 郜玉钢, 贾晓晶. 鹿角脱盘对辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤Notch2基因表达和免疫功能的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(05): 887-891.
[15]	张玉宇, 王利波, 赵钦, 李戈, 龚守良, 董丽华. 肿瘤微环境与肿瘤细胞放射敏感性关系的研究进展[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(05): 1038-1044.