稳定表达NGF、BDNF和NT3星形胶质细胞系的建立及其鉴定
马丽娜1*，遇红梅1，赵文静1，洛 涛1，
- 1. 吉林大学再生医学研究所生化教研室，吉林 长春130021；2. 名古屋大学，日本 名古屋464-8601；3. 歧阜药科大学，日本 岐阜502-8585
Construction and identification of astrocyte linesexpressing NGF, BDNF, and NT3 steadily
MA Li-na1*, YU Hong-mei1,ZHAO Wen-jing1, LUO Tao1, CHEN Sen2, NOMOTO Hiroshi3, FURUKAWA Shoei3
- 1. Biochemistry Laboratory, Institute of Frontier Medical Sciences, Jilin University, Changchun 130021, China;2. Nagoya University, Nagoya464-8601，Japan；3. Gifu Pharmaceutical University, Gifu 502-8585，Japan
摘要： 目的：探讨星形胶质细胞直接作为转基因靶细胞进行目的基因的表达。 方法：克隆大鼠NGF、BDNF和NT3基因，构建真核表达载体；3种重组载体分别转染星形胶质细胞，G418筛选后获得阳性克隆细胞进行扩大培养；取基因修饰星形胶质细胞培养液上清培养PC12细胞或TrkB-PC12细胞；用Western blotting杂交或免疫组织化学方法检测基因靶细胞目的基因的表达及其水平。结果：经G418筛选后，转染NGF、BDNF和NT3基因修饰星形胶质细胞呈G418抗性；转染NGF和NT3基因条件培养液上清培养的PC12细胞，数量增多，突起明显变长，转染BDNF基因条件培养液上清培养的TrkB-PC12细胞，同样数量增多，突起明显变长。大部分G418抗性的基因靶细胞出现NGF、BDNF和NT3免疫染色阳性。Western blotting杂交显示有相应分子量大小的蛋白条带出现。 结论：星形胶质细胞直接作为基因靶细胞能有效地表达和分泌有生物学活性的NGF、BDNF和NT3。
中图分类号:
- Q782