吉林大学学报(医学版) ›› 2013, Vol. 39 ›› Issue (2): 204-208.doi: 10.7694/jldxyxb20130203
王妍1,2,黄志立1,李艳晖1,张丽君1,解桂秋3
WANG Yan1,2,HUANG Zhi-li1,LI Yan-hui1,ZHANG Li-jun1,XIE Gui-qiu3
摘要: 目的:构建干扰素β1a(IFN-β1a)的CHO表达体系,探讨人IFN-β1a在真核细胞中的表达效果。方法:采用全基因合成法获取重组人IFN-β1a基因,并通过点突变将IFN-β1a的17位半胱氨酸进行修饰,合成的基因经PCR扩增,连接入 pSV2-dhfr 质粒中,构建重组真核表达质粒 pSV2-dhfr-IFN-β1a。将质粒转染至 CHO-dhfr-细胞中,经 MTX 加压筛选,获得稳定生长的能够持续表达IFN-β1a的单克隆细胞株;提取细胞基因组DNA,进行PCR 鉴定。收集细胞培养上清液,采用 Wish 细胞病变抑制法检测转染细胞中 IFN-β1a的抗病毒活性。结果:重组真核表达质粒 pSV2-dhfr -IFN-β1a 经 PCR 及双酶切鉴定证明构建正确;以转染细胞基因组 DNA 为模板,可扩增出 IFN-β1a 基因;转染后重组细胞表达的 IFN-β1a具有抗病毒活性,达到3×105 IU·mL-1。结论:IFN-β1a基因真核表达质粒构建成功,并在 CHO 细胞中成功表达了具有较高生物学活性的 IFN-β1a 蛋白。
中图分类号: