吉林大学学报(医学版) ›› 2013, Vol. 39 ›› Issue (2): 199-203.doi: 10.7694/jldxyxb20130202
杨艳明1,方芳2,刘念1,曲志杰1,王志成2,张艳秋3
YANG Yan-ming1,FANG Fang2,LIU Nian1,QU Zhi-jie1,WANG Zhi-cheng2,ZHANG Yan-qiu3
摘要: 目的:检测转染pEgr1-hsTRAIL质粒的人肺腺癌A549细胞放射敏感性变化及其对死亡受体(DR)4和DR 5 mRNA和蛋白表达的影响,探讨pEgr1-hsTRAIL质粒的辐射增敏效应和诱导细胞凋亡的可能机制。方法:实验分为正常对照(Normal control)组、pEgr1-hsTRAIL组、6 Gy X线照射组和pEgr1-hsTRAIL + 6 Gy X线照射组。A549细胞经过阳离子脂质体转染、X线深部治疗机照射后,利用平板克隆形成试验检测细胞放射敏感性,反转录RCR(RT-PCR)法检测DR4和DR5 mRNA表达变化,Western blotting法检测DR4和DR5蛋白表达的变化。结果:正常对照组和pEgr1-hsTRAIL组A549细胞的平均致死剂量(D0值)分别为3.26和1.91 Gy,说明pEgr1-hsTRAIL质粒能够增强A549细胞的放射敏感性。RT-PCR显示,转染pEgr1-hsTRAIL质粒对DR4和DR5 mRNA和蛋白表达水平无明显影响,而6 Gy X线照射后DR4和DR5 mRNA表达均显著高于正常对照组(P<0.05),转染pEgr1-hsTRAIL质粒后再进行6 Gy X线照射,DR4和DR5 mRNA表达水平均显著高于正常对照组(P<0.05),但只有DR5 mRNA表达水平显著高于6 Gy X线照射组(P<0.05)。Western blotting结果显示,与正常对照组比较,DR4和DR5蛋白在pEgr1-hsTRAIL组无明显变化,而在6 Gy X线照射和pEgr1-hsTRAIL + 6 Gy X线照射组表达增加,其中DR5蛋白在pEgr1-hsTRAIL + 6 Gy X线照射组增加更明显。结论:重组表达质粒pEgr1-shTRAIL能够增强A549细胞放射敏感性,且能增强DR5辐射诱导表达,而对DR4的辐射诱导表达无明显增强作用。
中图分类号: