人线粒体超氧化物歧化酶真核表达载体的构建及其在HUVEC中的表达
仲苓芝，李文雪，李秀英，李新娜，李玉林，李荣贵
- (吉林大学基础医学院 病理生物学教育部重点实验室,吉林 长春130021)
Construction of eukaryotic expression vector of human mitochondrial superoxide dismutase and its expression in HUVEC
ZHONG Ling-zhi,LI Wen-xue,LI Xiu-ying,LI Xin-na,LI Yu-lin,LI Rong-gui
- (Key Laboratory of Pathobiology,Ministry of Education,School of Basic Medical Sciences,Jilin University,Changchun 130021,China)
摘要：
目的：构建人线粒体超氧化物歧化酶2（SOD2）的真核细胞表达载体，探讨其在人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中的表达效果。方法：以HUVEC mRNA为原始模板,应用RT-PCR技术,扩增编码线粒体SOD2全长的cDNA片段。利用分子生物学技术，将扩增的cDNA片段与真核细胞表达载体pcDNA3.0的多酶切位点相连接，构成重组质粒并转染到HUVEC，将细胞分为HUVEC母细胞组、转染pcDNA3.0空载组和转染pcDNA3.0-SOD2组。应用RT-PCR方法检测SOD2在HUVEC中的表达情况。结果：将表达SOD2全长cDNA片段定向克隆至质粒pcDNA3.0，测序结果表明成功构建人线粒体SOD2的真核细胞表达载体pcDNA3.0-SOD2。该载体稳定转染HUVEC后，在细胞内获得了稳定表达。与母细胞组和空载组比较，转染pcDNA3.0-SOD2组SOD2 mRNA表达水平明显增加。结论：成功构建SOD2的真核细胞表达载体pcDNA3.0-SOD2，并在人HUVEC中成功表达。本研究为SOD2对细胞保护作用研究提供了实验模型。
中图分类号:
- Q78