吉林大学学报(医学版) ›› 2023, Vol. 49 ›› Issue (3): 706-713.doi: 10.13481/j.1671-587X.20230320
Heran YANG1,Xingjiang LI2,Jiahang HU3,Yanwei LI1()
摘要:
目的 探讨Ghrelin对脂肪间充质干细胞(ADSCs)向神经元分化的影响,并阐明可能的机制。 方法 ADSCs随机分为空白组、神经分化诱导剂组、Ghrelin组(给予600 μg·L-1 Ghrelin)、U0126组(给予40 ng·L-1 U0126)、Ghrelin+U0126组(给予600 μg·L-1 Ghrelin+40 ng·L-1 U0126)和Ghrelin受体阻断剂D-赖氨酰3生长激素释放肽6(D-Lys3-GHRP-6)组(给予10-10 g·L-1 D-Lys3-GHRP-6)。倒置显微镜观察各组细胞病理形态表现,免疫荧光法检测各组细胞中神经丝蛋白(NF)-200和微管蛋白(Tuj-1)阳性表达率,Western blotting法检测各组细胞中丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)通路蛋白、神经元特异性核蛋白(NeuN)及Tuj-1、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、NF、生长激素促分泌受体(GHSR)、胎肝激酶1(Flk1)和CD29蛋白表达水平。 结果 细胞培养第10天,空白组ASCs呈长梭形和螺旋状融合;神经分化诱导剂组细胞胞体收缩,长梭形胞体向类圆形转变、突起长度延长及类似神经元样细胞数增多;Ghrelin组细胞胞体突起进一步增多,类圆形细胞数进一步增多;U0126组和D-Lys3-GHRP-6组仅有少量细胞胞体收缩及类圆形转变。免疫荧光法检测,与空白组比较,神经分化诱导剂组细胞中NF-200和Tuj-1阳性表达率升高(P<0.05);与神经分化诱导剂组比较,Ghrelin组细胞中NF-200和Tuj-1阳性表达率升高(P<0.05),U0126组和D-Lys3-GHRP-6组细胞中NF-200及Tuj-1阳性表达率降低(P<0.05);与Ghrelin组比较,U0126组、D-Lys3-GHRP-6组和Ghrelin+U0126组细胞中NF-200和Tuj-1阳性表达率降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与空白组比较,神经分化诱导剂组细胞中NSE、NeuN、Tuj-1、NF、GHSR蛋白表达水平和磷酸化MAPK(p-MAPK)/MAPK及磷酸化ERK(p-ERK)/ERK比值升高(P<0.05),Flk1和CD29蛋白表达水平降低(P<0.05);与神经分化诱导剂组比较,Ghrelin组细胞中NSE、NeuN、Tuj-1、NF、GHSR蛋白表达水平和p-MAPK/MAPK及p-ERK/ERK比值升高(P<0.05),Flk1和CD29蛋白表达水平降低(P<0.05),U0126组和D-Lys3-GHRP-6组细胞中NSE、NeuN、Tuj-1、NF、GHSR蛋白表达水平及p-MAPK/MAPK和p-ERK/ERK比值降低(P<0.05),Flk1和CD29蛋白表达水平升高(P<0.05);与Ghrelin组比较,U0126组、D-Lys3-GHRP-6组和Ghrelin+U0126组细胞中NSE、NeuN、Tuj-1、NF和GHSR蛋白表达水平及p-MAPK/MAPK和p-ERK/ERK比值降低(P<0.05),Flk1和CD29蛋白表达水平升高(P<0.05)。 结论 Ghrelin可诱导ASCs向神经元分化,其作用机制与激活MAPK/ERK通路有关。
中图分类号: