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正交法用于真菌微卫星PCR体系优化

杨艳秋1,2,贺 丹1,王 爽1,3,郭 亮1,张 宇1, 横山耕治4,王 丽1*   

  1. 1. 吉林大学基础医学院病原生物学教研室, 吉林 长春 130021;2. 吉林大学第一医院干部病房, 吉林 长春 130021;3. 吉林大学第二医院皮肤科, 吉林 长春 130041; 4. 日本国立千叶大学真菌医学研究中心, 日本 千叶
  • 收稿日期:2006-06-12 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-11-28 发布日期:2006-11-28
  • 通讯作者: 王 丽

Optimization of SSR-PCR reaction system in fungus by orthogonal design

  • Received:2006-06-12 Revised:1900-01-01 Online:2006-11-28 Published:2006-11-28

摘要: 目的: 探讨影响真菌微卫星聚合酶链反应(SSR-PCR)的多个因素,建立PCR的最佳反应体系,为进一步进行真菌的鉴定、遗传多样性研究奠定基础。方法: 利用正交设计,从Taq DNA聚合酶、模板DNA、dNTP、引物4 种因素,对真菌微卫星反应体系进行优化分析,并确定 PCR 适宜的退火温度及循环次数。结果: 各因素的不同水平对PCR结果都有显著 影响,其中模板DNA影响最大。在PCR反应体系中(25 μL),Taq DNA 聚合酶 1U,模板DNA 30 ng ,dNTP 150 μmol•L-1,引物 0.25 μmol•L-1为最佳。 结论: 采用正交法 实验设计,对真菌微卫星PCR体系优化更科学,得出的实验体系有效范围宽,且高效、快捷。

关键词: 微卫星重复, 聚合酶链反应, 正交法

Abstract:

中图分类号: 

  • R379