pLEGFP-mIFNγ重组质粒的构建及神经干细胞转染

doi:吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题（20

pLEGFP-mIFNγ重组质粒的构建及神经干细胞转染

刘颖¹，陈东^2*，李菁华³

1. 吉林大学基础医学院组织学与胚胎学教研室，吉林长春130021；2. 广东医学院组织学与胚胎学教研室，广东广州523803；3. 吉林大学基础医学院病原生物学教研室，吉林长春130021

收稿日期:2005-04-14 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-07-28 发布日期:2006-07-28
通讯作者: 陈东

Construction and transfection of neural stemcells of recombinant plasmid pLEGFP-mIFNγ

LIU Ying¹，CHEN Dong^2*，LI Jing-hua³

1. Department of Histology and Embryology，School of Basic Medical Sciences, Jilin University, Changchun 130021,China；2. Department of Histology and Embryology, Guangdong Medical College,Guangzhou523803,China；3. Department of Pathogenobiology，School of Basic Medical Sciences,Jilin University, Changchun 130021,China

Received:2005-04-14 Revised:1900-01-01 Online:2006-07-28 Published:2006-07-28
Contact: CHEN Dong

摘要/Abstract

摘要： 目的：构建pLEGFP-mIFNγ真核表达质粒，以获得带有绿色荧光蛋白的γ干扰素融合蛋白。方法：以克隆质粒pcDNA3.1-mIFNγ为模板,用PCR方法扩增mIFNγ DNA 片段,利用pEGFP-C1质粒载体构建pLEGFP-mIFNγ重组质粒，用酶切电泳验证重组质粒的正确性。脂质体转染包装细胞PA317，利用PA317病毒上清转染神经干细胞。结果：PCR结果显示扩增片断大小约500 bp，与预期相同。重组质粒酶切后显示其大小约7 400 bp。pLEGFP-mIFNγ成功转染神经干细胞。结论：pLEGFP-mIFNγ质粒构建成功，能够有效转染神经干细胞，并进行示踪。

关键词: 质粒, 干细胞, 转染

Abstract: Objective To construct a recombinant plasmid pLEGFP-mIFNγ for developing the genetical therapy of tumor by stem cells. Methods PCR was used to amplify the mIFNγ gene from plasmid pcDNA3.1-mIFNγ in which the mIFNγ was cloned. A new plasmid, pLEGFP-mIFNγ, was then constructed by inserting the amplified mIFNγ gene into pLEGFP-C1. Restriction analysis and sequencing were used to confirm the structure of pLEGFP-mIFNγ. Neural stem cells were transfected by supernatant of PA317. Results A DNA fragment in size of 500 bp was amplified. Restriction analysis showed that the amplified gene was inserted into pLEGFP-C1 correctly. Conclusion The plasmid pLEGFP-mIFNγ is constructed successfully，and it can transfect neural stem cells.

Key words: plasmids, stem cells, transfection

中图分类号:

刘颖，陈东，李菁华. pLEGFP-mIFNγ重组质粒的构建及神经干细胞转染[J]. J4, 2006, 32(4): 593-595.

LIU Ying，CHEN Dong，LI Jing-hua. Construction and transfection of neural stemcells of recombinant plasmid pLEGFP-mIFNγ[J]. J4, 2006, 32(4): 593-595.

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