CCNL1 真核表达载体的构建及其在 MDA-MB-231 细胞中表达的鉴定

J4 ›› 2011, Vol. 37 ›› Issue (4): 582-586.

CCNL1 真核表达载体的构建及其在 MDA-MB-231 细胞中表达的鉴定

李鹏^1,2, 马艳娇^1,2, 徐晓芳¹, 袁婷¹, 宫鹏涛¹, 李建华¹, 李赫¹, 欧阳红生¹, 张西臣¹

(1.吉林大学畜牧兽医学院寄生虫实验室| 吉林长春 130062；2.黑龙江八一农垦大学动物科技学院| 黑龙江大庆 163319)

收稿日期:2011-03-18 出版日期:2011-07-28 发布日期:2011-07-28
通讯作者: 张西臣 E-mail:(Tel:0431-87836155； E-mail:zhangxic@public.cc.jl.cn)
作者简介:李鹏(1971－)|男|山东省莱西市人|副教授|理学博士|主要从事生物化学与分子生物学方面的研究。
基金资助:
国家重大基础研究计划资助课题(2006CB910505）

Construction of CCNL1 eukaryotic expression vector and identification of expression of CCNL1 in MDA-MB-231 cells

LI Peng^1,2, MA Yan-Jiao^1,2, XU Xiao-Fang¹, YUAN Ting¹, GONG Peng-Tao¹, LI Jian-Hua¹, LI He¹, OU Yang-Gong-Sheng¹, ZHANG Xi-Chen¹

(1. Department of Parasitology Laboratory,College of Animal Science and Veterinary Medicine,Jilin University,Changchun 130062,China;2. Institute of Animal Science and Technology,Heilongjiang Bayi Agriculture University,Daqing 163319,China)

Received:2011-03-18 Online:2011-07-28 Published:2011-07-28

摘要/Abstract

摘要：

目的：构建 pcDNA3.1（+）-CCNL1、pVAXⅠ-CCNL1 和 pEGFP-C1-CCNL1 三组重组载体，鉴定其在 MDA-MB-231 细胞中的表达情况。方法：用 PCR 方法扩增得到 CCNL-1 基因，然后用 EcoRⅠ、HindⅢ 酶切 CCNL1 基因，将其分别与 pcDNA3.1（+）、pVAXⅠ 和 pEGFP-C1 载体连接，构建 pcDNA3.1（+）-CCNL1、pVAXⅠ-CCNL1 和 pEGFP-C1-CCNL1 三组重组载体，然后用 Fugene HD 转染试剂将构建的真核表达质粒转染入 MDA-MB-231 细胞，48 h 后，用荧光定量 PCR 和 Western blotting 方法检测 CCNL1 在 MDA-MB-231 细胞中的差异表达。结果：转染 MDA-MB-231 细胞 48 h 后，在荧光显微镜下， pEGFP-C1-CCNL1 重组载体能观测到绿色荧光，而 pcDNA3.1（+）-CCNL1 、 pVAXⅠ-CCNL1 重组载体未观测到；在 MDA-MB-231 细胞中 CCNL1 的 mRNA 和蛋白质表达水平由高到低依次为 pcDNA3.1（+）-CCNL1 、 pVAXⅠ-CCNL1 和 pEGFP-C1-CCNL1。结论：成功构建pcDNA3.1（+）-CCNL1、pVAXI-CCNL1和pEGFP-C1-CCN1三组重组载体，且pcDNA3.1（+）-CCNL1 在 MDA-MB-231 细胞中高表达。

关键词: 乳腺肿瘤；真核表达载体；细胞周期调节蛋白-1；MDA-MB-231 细胞

Abstract:

Abstract:Objective
To construct the CCNL1 eukaryotic expression vector pcfDNA3.1（+）-CCNL1,pVAXⅠ-CCNL1 and pEGFP-C1-CCNL1 and identify the expressions of CCNL1 genes in MDA-MB-231 cells.Methods The eukaryotic expression plasmid pcDNA3.1（+）-CCNL1,pVAX1-CCNL1 and pEGFP-C1-CCNL1 were transfected into the MDA-MB-231　cells by Fugene HD Transfection Reagent.After 48 h transfection,the differential expressions of pcDNA3.1（+）-CCNL1,pVAX1-CCNL1 and pEGFP-C1-CCNL1 in MDA-MB-231　cells were detected by real time PCR and Western blotting.Results After 48 h transfection,there was green fluorescence only in pEGFP-C1-CCNL1 by fluorescent microscope,not in pcDNA3.1（+）-CCNL1 and pVAX1-CCNL1; the expressions of mRNA and protein from high to low were pcDNA3.1（+）-CCNL1,pVAX1-CCNL1 and pEGFP-C1-CCNL1 recombinant vector in MDA-MB-231 cells.Conclusion The recombinant vectors pcDNA3.1（+）-CCNL1,pVAX1-CCNL1 and pEGFP-CCNL1 are constructed succesfully.The expression of pcDNA3.1（+）-CCNL1 in MDA-MB-231 cells is higher.

Key words: breast , neoplasms;eukaryotic expression vector;Cyclin L1;MDA-MB-231 cells

中图分类号:

R737.9

李鹏, 马艳娇, 徐晓芳, 袁婷, 宫鹏涛, 李建华, 李赫, 欧阳红生, 张西臣. CCNL1 真核表达载体的构建及其在 MDA-MB-231 细胞中表达的鉴定[J]. J4, 2011, 37(4): 582-586.

LI Peng, MA Yan-Jiao, XU Xiao-Fang, YUAN Ting, GONG Peng-Tao, LI Jian-Hua, LI He, OU Yang-Gong-Sheng, ZHANG Xi-Chen. Construction of CCNL1 eukaryotic expression vector and identification of expression of CCNL1 in MDA-MB-231 cells[J]. J4, 2011, 37(4): 582-586.