人肥胖基因的克隆与原核表达载体的构建

doi:国家自然科学基金

人肥胖基因的克隆与原核表达载体的构建

张忠芳1,2, 李鸿雁¹, 杨丽娜¹,董志恒²,刘娅^1*, 范哲^△

1. 吉林大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室，吉林长春130021;2. 北华大学医学院病理生理学教研室，吉林吉林132001

收稿日期:2004-11-19 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-07-28 发布日期:2005-07-28
通讯作者: 刘娅

Cloning of human obese gene and construction of its prokaryotic expression vector

ZHANG Zhong-fang^1,2, LI Hong-yan¹, YANG Li-na¹, DONG Zhi-heng²,LIU Ya^1*, FAN Zhe^△*

1. Department of Nutrition and Food Hygiene,School of Public Health , Jilin University, Changchun 130021, China;2. Department of Pathophysiology, Medical College, Beihua University, Jilin 132013, China

Received:2004-11-19 Revised:1900-01-01 Online:2005-07-28 Published:2005-07-28
Contact: LIU Ya

摘要/Abstract

摘要： 目的：克隆人肥胖基因瘦素蛋白（leptin）编码区cDNA序列，并构建其原核表达载体。方法：在人体脂肪组织中提取mRNA，利用RT-PCR扩增人肥胖基因，将其插入pMD18-T载体，经双酶切、鉴定后将肥胖基因片段亚克隆入pET-28a表达载体，提取质粒。将阳性重组质粒转化表达受体菌E.coliBL21(DE3)，经IPTG诱导肥胖基因表达产物,以聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测产物蛋白。结果：经测序证实获得的肥胖基因序列与相关文献报道一致，其表达产物的相对分子质量约为20 000。结论：利用pMD18-T克隆载体和pET-28a表达载体可以有效地在原核生物中表达重组人类瘦素蛋白。

关键词: 瘦素, 原核表达, 逆转录聚合酶链反应

Abstract: Objective To clone the sequence of cDNA of human obese gene (leptin) coding area and construct a prokaryotic expression vector. Methods Human obese gene was amplified from human fat tissue by RT-PCR and subcloned in pMD18-T ,a clone vector. The sequence of pMD18-T was checked by sequencing and restriction analysis. Expression of E.coli BL21(DE3) and expression products of obese gene induced by IPTG were analyzed with SDS-PAGE. Results It was proved that the cloned leptin cDNA had been constructed with gene recombinant technique. Sequencing and restriction analysis confirmed the sequence of pMD18-T. A 20 000 leptin fusion protein was expressed with high effeciency in recombinant E.coli BL21. Conclusion pMD18-T and pET-28a could highly express recombinant human leptin.

Key words: leptin, prokaryotic xpression, reverse transcriptase polymerase chain reaction

中图分类号:

Q786

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ZHANG Zhong-fang, LI Hong-yan, YANG Li-na, DONG Zhi-heng,LIU Ya, FAN Zhe. Cloning of human obese gene and construction of its prokaryotic expression vector[J]. J4, 2005, 31(4): 512-515.

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