辐射诱导表达载体pEgr-hTRAIL的构建及其对肿瘤细胞的体外诱导凋亡作用

doi:国家自然科学基金资助课题

辐射诱导表达载体pEgr-hTRAIL的构建及其对肿瘤细胞的体外诱导凋亡作用

朴春姬¹，田梅¹，刘林林²，杨巍¹，李修义^1*

1. 吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室，吉林长春130021；2. 吉林大学第二医院放疗科，吉林长春130041

收稿日期:2004-11-05 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-03-28 发布日期:2005-03-28
通讯作者: 李修义

Construction of pEgr-hTRAIL expression vector inducedby irradiation and its apoptosis in tumor cells in vitro

PIAO Chun-ji¹,TIAN Mei¹,LIU Lin-lin², YANG Wei¹,LI Xiu-yi^1*

1. MH Radiobiology Research Unit, School of Public Health, Jilin University，Changchun 130021,China;2. Department of Radiotherapy, Second Hospital, Jilin University, Changchun 130041, China

Received:2004-11-05 Revised:1900-01-01 Online:2005-03-28 Published:2005-03-28
Contact: LI Xiu-yi

摘要/Abstract

摘要： 目的：构建携带人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（hTRAIL）基因的辐射诱导表达载体pEgr-hTRAIL，并研究其在人肺腺癌细胞株A549中的表达及促凋亡作用。方法：采用常规分子生物学方法构建表达质粒pEgr-hTRAIL，体外通过脂质体转染A549细胞,经G418筛选稳定转染细胞A549-shTRAIL，利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测目的基因的表达，采用Annexin-V-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞早期凋亡。结果：经限制性内切酶酶切鉴定pEgr-hTRAIL表达质粒构建正确；稳定转染细胞A549-shTRAIL的hTRAIL mRNA表达量明显增加；稳定转染细胞A549-shTRAIL的凋亡细胞百分数明显增加，是A549细胞的1.8倍（P<0.05）。结论：成功构建pEgr-hTRAIL表达质粒，体外稳定转染细胞A549-shTRAIL具有明显诱导凋亡作用。

关键词: pEgr-hTRAIL表达载体, 基因表达, 细胞凋亡

Abstract: Objective To construct the radiation-inducible expression vector pEgr-hTRAIL containing human TNF related apoptosis inducing ligand (hTRAIL) gene and study its expression and function of inducing apoptosis in A549 human lung adenocarcinoma cells. Methods Expression vector pEgr-hTRAIL was constructed with DNA recombinant technique. pEgr-hTRAIL plasmids were packaged with lipofectin to transfect into A549 cells in vitro. Stably transfected cell line A549-shTRAIL was selected through G418. The expression of hTRAIL gene was detected by RT-PCR. The early stage apoptosis of A549 cells was detected by Annexin-V-FITC apoptosis detecting kit. Results Expression vector pEgr- hTRAIL was constructed correctly by identification with restriction enzyme digestion. The expression of hTRAIL mRNA in stably transfected cell line A549-shTRAIL was increased significantly. The percentage of apoptotic A549-shTRAIL was increased significantly; it was 1.8 times as much as A549 cells (P<0.05). Conclusion Expression vector pEgr-hTRAIL is constructed successfully,which can increase the apoptosis of the stably transfected cell line A549-shTRAIL significantly.

Key words: pEgr-hTRAIL expression vector, gene expression, apoptosis

中图分类号:

Q782

朴春姬，田梅，刘林林，杨巍，李修义. 辐射诱导表达载体pEgr-hTRAIL的构建及其对肿瘤细胞的体外诱导凋亡作用[J]. J4, 2005, 31(2): 169-172.

PIAO Chun-ji,TIAN Mei,LIU Lin-lin, YANG Wei,LI Xiu-yi. Construction of pEgr-hTRAIL expression vector inducedby irradiation and its apoptosis in tumor cells in vitro[J]. J4, 2005, 31(2): 169-172.

[1]	朱德强, 陈学军. 白花丹素对肝癌索拉菲尼耐药细胞HepG2R增殖和凋亡的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(06): 1223-1229.
[2]	阎慧, 马淑飞, 段明华, 闫玉礼, 潘新, 李海清, 周长龙, 赵天倚. 京尼平对胃癌SGC 7901细胞体外增殖、侵袭能力和凋亡的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(05): 924-928.
[3]	邢树刚, 张丽红, 金明华, 李百慧, 武则馨, 房波, 李伟. 杨梅黄酮对小鼠脑胶质瘤GL261细胞增殖和凋亡的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(05): 955-961.
[4]	薛亚娟, 符兆英. 人乳头瘤病毒致癌特性及其E6和E7蛋白致癌机制的研究进展[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(05): 1096-1099.
[5]	陈炳鹏, 任明, 李容杭, 韩青, 王金成. 基因芯片技术检测NOB1对骨肉瘤细胞相关基因的调控作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(05): 929-934.
[6]	于洋, 徐路, 刘师兵, 李松岩, 徐冶. 杨梅素通过促进DRP1依赖性线粒体分裂诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(05): 903-907.
[7]	王淼, 母润红, 李明成, 李洪杰. RNAi沉默survivin和HIF-1α基因对胃癌BGC-823细胞体外增殖和凋亡的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(04): 753-758.
[8]	杨万霞, 苏强, 邢爱华, 张晓延. 饥饿对Beclin-1依赖的Ana-1细胞自噬和凋亡的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(04): 704-708.
[9]	朱效慧, 孟琴, 冯世燕. TP53在不明原因复发性流产患者绒毛组织中的表达及其对人滋养层细胞生长的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(04): 796-800.
[10]	安乐, 杨建征, 胡春梅, 于琼, 肖晗, 郝书弘, 唐艳. 多囊蛋白1基因对人宫颈癌HeLa细胞的抗凋亡作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(04): 776-779.
[11]	任艳芳, 姜永杰, 张秀玲, 姜姗, 王玉红. SHH信号通路对子痫前期患者滋养细胞凋亡和侵袭的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(03): 510-515.
[12]	吕鹏, 宁明杰, 邵玉, 张璐妮, 唐英, 王南博, 陈飞儿, 齐玲. 野黄芩苷对人脑胶质瘤U87细胞的增殖抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(03): 466-470.
[13]	杨文延, 刘强, 孙志娟, 杜利清, 徐畅, 王彦, 柳杨, 王芹. 褪黑素对人非小细胞肺癌H1299细胞辐射敏感性的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(03): 532-536.
[14]	丁振东, 张玉影, 张宇, 钟越, 温娜, 于洪泉, 齐玲. 五味子多糖对脑肿瘤干细胞的凋亡诱导及生长抑制作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(02): 305-309.
[15]	杨易, 包康达, 周彦兵, 袁超, 李勇, 刘晓明, 徐金瑞. Wnt5a对人肺腺癌A549细胞凋亡的调控作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(02): 229-234.