急性髓系白血病患者血清外泌体中miR-92a-3p的表达及其意义

doi:10.13481/j.1671-587X.20230223

摘要/Abstract

摘要：

目的检测急性髓系白血病（AML）患者血清外泌体中微小RNA-92a-3p（miR-92a-3p）表达水平，探讨其对AML的诊断价值。方法选取AML患者51例（AML组）和34名同期健康体检志愿者（对照组）作为研究对象，收集研究对象外周血标本；差速离心法提取血清外泌体，通过透射电子显微镜、纳米粒度分析仪和Western blotting法鉴定外泌体；采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测2组研究对象血清外泌体中miR-92a-3p表达水平；根据血清外泌体中miR-92a-3p表达水平绘制受试者工作特征（ROC）曲线，计算ROC曲线下面积（AUC），确定其临界值，根据灵敏度和特异度评估miR-92a-3p表达水平对AML的诊断效能。结果在透射电子显微镜下外泌体呈外观圆形且中间凹陷的膜状结构，纳米粒度分析仪检测外泌体粒径为30~100 nm，Western blotting法在提取外泌体中检测到CD63和CD9蛋白表达。与对照组比较，AML组患者血清外泌体中miR-92a-3p表达水平明显降低（P<0.01）；ROC曲线分析，血清外泌体miR-92a-3p诊断AML的最佳临界值为0.51，灵敏度为76.47%，特异度为94.12%，AUC为0.913，AUC 95%置信区间（CI）为（0.856，0.971）（P<0.001）。结论 AML患者血清外泌体中miR-92a-3p表达水平诊断AML的灵敏度和特异度较高，可应用于早期AML的临床诊断。

关键词: 急性髓系白血病, 外泌体, 微小RNA-92a-3p, 肿瘤标志物

Abstract:

Objective To detect the expression level of microRNA-92a-3p （miR-92a-3p） in the exosome in serum exosome of the patients with acute myeloid leukemia （AML）， and to explore its diagnostic value for AML. Methods A total of 51 patients with AML （AML group） and 34 physically healthy volunteers during the same period（control group） were selected as subjects，and the peripheral blood specimens of the subjects were collected，and the peripheral blood specimens were collected from the subjects. The serum exosomes were extracted by differential centrifugation，and identified by transmission electron microscope， nanoparticle analyzer and Western blotting method；the expression levels of miR-92a-3p in serum exosome of the subjects in two groups were detected by real-time fluorescence quantitative PCR（RT-qPCR） method；according to the expression level of miR-92a-3p in serum exosome， the receiver operating characteristic（ROC） curve was drawn and the area under the curve （AUC） was calculated to determine the critical value， and the diagnostic efficiency of expression level of miR-92a-3p to AML was evaluated based on the sensitivity and specificity. Results The extracted exosomes had membrane structures with round appearance and concave in the middle under transmission electron microscope； the size of the exosomes was 30－100 nm detected by nanoparticle analyzer；the expressions of CD63 and CD9 proteins were found by Western blotting method.Compared with control group，the expression level of miR-92a-3p in serum exosome of the patients in AML group was significantly decreased（P<0.01）；the ROC curve results showed that the optimal critical value of serum exosome miR-92a-3p for the diagnosis of AML was 0.51， the sensitivity was 76.47%， the specificity was 94.12%，the AUC was 0.913，95% confidence interval（CI）=（0.856，0.971）（P<0.001）. Conclusion The expression level of miR-92a-3p in serum exosome of the AML patients has high sensitivity and specificity in the diagnosis of AML， and it can be used in the clinical diagnosis of early AML.

Key words: Acute myeloid leukemia, Exosome, MicroRNA-92a-3p, Tumor marker

中图分类号:

R733.7

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图/表 5

表1

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Gene	Sequence of primers（5'－3'）
miR-92a-3p	TATTGCACTTGTCCCGGCCTG
U6(Forward primer)	ATTGGAACGATACAGAGAAGATT
U6(Reverse primer)	GGAACGCTTCAGAATTTG

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