小鼠SGK1基因真核表达载体的构建及鉴定

doi:10.13481/j.1671-587X.20250107

吉林大学学报(医学版) ›› 2025, Vol. 51 ›› Issue (1): 51-57.doi: 10.13481/j.1671-587X.20250107

小鼠SGK1基因真核表达载体的构建及鉴定

张丽娜¹,巴隆¹,孟峻²()

^1.内蒙古医科大学附属医院临床检验诊断教研室，内蒙古呼和浩特 010059
^2.内蒙古医科大学附属医院检验科，内蒙古呼和浩特 010050

收稿日期:2024-03-06 接受日期:2024-05-08 出版日期:2025-01-28 发布日期:2025-03-06
通讯作者: 孟峻 E-mail:nmfrank@163.com
作者简介:张丽娜（2000-），女，内蒙古自治区乌兰察布市人，在读硕士研究生，主要从事临床生物化学及生殖分子生物学方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(81360109);内蒙古自治区科技厅自然科学基金项目(2021MS08158)

Construction and identification of eukaryotic expression vector of mouse SGK1 gene

Lina ZHANG¹,Long BA¹,Jun MENG²()

^1.Department of Clinical Laboratory Diagnosis，Affiliated Hospital，Inner Mongolia Medical University，Hohhot 010059，China
^2.Department of Clinical Laboratory，Affiliated Hospital，Inner Mongolia Medical University，Hohhot 010050，China

Received:2024-03-06 Accepted:2024-05-08 Online:2025-01-28 Published:2025-03-06
Contact: Jun MENG E-mail:nmfrank@163.com

摘要/Abstract

摘要：

目的构建含有小鼠血清和糖皮质激素诱导激酶（SGK）1基因的真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry，并观察载体在转染HEK293细胞后的表达情况。方法 PCR法扩增SGK1目的基因片段，并与经过Hind Ⅲ和Sbf Ⅰ双酶切的pcDNA3.1-MYC-C-mcherry载体连接。酶切和测序验证成功后，采用脂质体转染法将pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry转染至HEK293细胞中，Western blotting法测定HEK293细胞中真核表达载体的表达情况。结果酶切载体条带位于5 200 bp，目的基因条带位于3 100 bp，与预期结果相符。Snap Gene软件比对，pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry的测序结果与预期序列一致，表明真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry构建成功。Western blotting法观察到转染后的HEK293细胞在相对分子质量49 000附近显现出明显的条带，真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry成功表达。结论成功构建真核表达载体pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry，为后续研究SGK1基因对小鼠受精卵细胞早期发育的作用机制奠定了基础。

关键词: 血清和糖皮质激素诱导激酶1, 真核表达载体, HEK293细胞, 载体构建, 质粒

Abstract:

Objective To construct an eukaryotic expression vector pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry which containing mouse serum and glucocorticoid-induced kinase （SGK）1 gene， and to observe its expression in the transfected HEK293 cells. Methods The SGK1 target gene segments were amplified by PCR method， and the segments were ligated to the pcDNA3.1-MYC-C-mcherry vector which was doubly-digested with Hind Ⅲ and Sbf Ⅰ. After successful verification by enzyme digestion and sequencing， the pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry expression vector was transfected into the HEK293 cells by liposome transfection. Western blotting method was used to determine the expression level of eukaryotic expression vector in the cells. Results The vector band was located at 5 200 bp and the target gene band was located at 3 100 bp， which was consistent with the expected results. The sequencing results were also consistent when compared with the expected sequence by Snap Gene software， which indicated that the eukaryotic expression vector pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry was successfully constructed. Successful expression of the eukaryotic expression vector pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry was observed by Western blotting method， in which the transfected cells showed well-defined bands near the relative molecular mass of 49 000. Conclusion The eukaryotic expression vector pcDNA3.1-MYC-SGK1-mcherry is successfully constructed， laying a solid foundation for the subsequent study on the transition mechanism of SGK1 gene in the early development of mouse fertilized egg cells.

Key words: Serum and glucocorticoid-induced kinase 1, Eukaryotic expression vector, HEK293 cells, Vector construction, Plasmids

中图分类号:

Q132

张丽娜,巴隆,孟峻. 小鼠SGK1基因真核表达载体的构建及鉴定[J]. 吉林大学学报(医学版), 2025, 51(1): 51-57.

Lina ZHANG,Long BA,Jun MENG. Construction and identification of eukaryotic expression vector of mouse SGK1 gene[J]. Journal of Jilin University(Medicine Edition), 2025, 51(1): 51-57.

图/表 3

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小鼠SGK1基因真核表达载体的构建及鉴定

Construction and identification of eukaryotic expression vector of mouse SGK1 gene

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