逆转录病毒载体介导shRNA对人胚胎肾细胞中p53基因的沉默作用
刘 扬，马淑梅，刘晓冬*，金顺子，徐瑞明，武 宁，赵银龙，龚守良，刘树铮
- 吉林大学公共卫生学院 卫生部放射生物学重点实验室，吉林 长春130021
Small hairpin RNA and retroviral vector-mediatedsilencing of p53 in HEK293 cells
LIU Yang, MA Shu-mei, LIU Xiao-dong*, JIN Shun-zi , XU Rui-ming, WU Ning, ZHAO Yin-long, GONG Shou-liang, LIU Shu-zheng
- MH Radiobiology Research Unit, School of Public Health, Jilin University, Changchun 130021,China
摘要： 目的：检测逆转录病毒载体介导的小发夹环RNA（small hairpin RNA，shRNA）对人胚胎肾细胞（HEK293）中p53基因的干扰作用。方法：将人H1启动子由XholⅠ和EcoRⅠ酶切位点插入CMV启动子上游，人CD4基因替代匀霉素抗性基因，作为检测标志。针对人野生型p53基因设计的shRNA被连接在H1启动子的下游，构建含有shRNA的逆转录病毒载体LTRH1-p53，即RNAi表达载体；利用流式细胞术检测逆转录病毒感染HEK293细胞72 h后细胞内P53蛋白水平的变化。结果：成功构建LTRH1-p53载体，该载体感染HEK293细胞后72 h，与感染空病毒载体LTRH1组相比，P53蛋白表达降至空病毒载体LTRH1组的69％（P<0.01）。结论：LTRH1-p53表达载体成功使p53基因沉默，shRNA表达载体的使用为基因功能研究提供有力工具。