Citicoline对大鼠中脑原代细胞培养的神经保护作用

doi:中国-奥地利科技合作项目资助课题(2004-200

Citicoline对大鼠中脑原代细胞培养的神经保护作用

姜晓燕^1,3，贾晓晶²，吕文天¹，赵红光¹，王志成¹，龚守良^1*

1. 吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室，吉林长春130021；2. 吉林大学第二医院放疗科，吉林长春130041；3. 长春市卫生局卫生监督所，吉林长春130033

收稿日期:2005-10-31 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-03-28 发布日期:2006-03-28
通讯作者: 龚守良^1*

Neuroprotective effects of citicoline on 6-hydroxydopamine-treatedmesencephalic dopaminergic neurons in primary culture

JIANG Xiao-yan^1,3, JIA Xiao-jing², LU Wen-tian¹, ZHAO Hong-guang¹, WANG Zhi-cheng¹, GONG Shou-liang^1*

1. MH Radiobiology Research Unit, School of Public Health, Jilin University, Changchun 130021,China; 2. Department of Radiotherapy, Second Hospital, Jilin University, Changchun 130041, China; 3. Public Health Supervision Institution of Changchun City, Changchun 130033, China

Received:2005-10-31 Revised:1900-01-01 Online:2006-03-28 Published:2006-03-28
Contact: GONG Shou-liang^1*

摘要/Abstract

摘要： 目的：探讨胞二磷胆碱（citicoline，CC）对6-OHDA诱导的帕金森体外细胞模型的保护作用及其机理。方法：孕15 d大鼠胚胎中脑原代培养，在培养第6 、8及10天，实验组加不同浓度CC（2、1、0.1、0.01和0.001 mmol·L^-1 ），并于第11天加50 μmol·L^-1的6-OHDA作用0.5 h，制作帕金森病细胞模型；6-OHDA组为原代培养细胞加50 μmol·L^-1的6-OHDA；对照组为原代培养细胞。培养11 d收集细胞。采用MTT法测细胞活力，通过流式细胞仪，用Fluo3/AM检测细胞内Ca²⁺i及用罗丹明123检测线粒体膜电位（Δψm）。结果：2、1和0.1 mmol·L^-1 CC组，细胞活力与对照组比较明显增高，并随着浓度的增加而增加，差异具有显著性(P<0.05)。1、0.1、0.01 和0.001 mmol·L^-1 CC+6-OHDA组，细胞活力均高于6-OHDA组，差异有显著性（P<0.01）。1、0.1、0.01、0.001 mmol·L^-1 CC+6-OHDA组细胞内Ca²⁺i均明显下降，分别为(32.23±1.87)%、(17.09±7.45)%、(21.71±8.89)%及(29.18±4.71)%，与6-OHDA组（49.30±7.62）%相比，差异均有显著性（P<0.01）；与对照组（42.40±0.81）%比较明显下降，差异均有显著性（P<0.01）。CC+6-OHDA各组与6-OHDA组比较均使Δψm升高，其中1 mmol·L^-1CC+6-OHDA组Δψm高于对照组，差异有显著性（P<0.01）。结论：CC通过保护神经元细胞膜、增加细胞活力、降低细胞内Ca²⁺i以及提高Δψm，发挥其对神经元的保护作用。

关键词: 神经元, 细胞, 培养的, 羟多巴胺, 帕金森病, 神经保护药

Abstract: Objective To study the neuroprotective effects of citicoline (CC) on the toxicity induced by 6-OHDA towards dopaminergic mesencephalic neurons in primary culture-Parkinson′s disease (PD) model in vitro and its mechanism. Methods Mesencephalic neurons in culture were prepared from embryonic 15-day Wistar rats. Cultures were treated for 6, 8, 10 d with various concentrations of CC (2,1,0.1,0.01 and 0.001 mmol·L^-1). At 11th day, the cultures were co-treated with the toxin 6-OHDA (50 μmol·L^-1) for 0.5 h, the cells were collected. Seven groups were categorized as follows:CC (2,1, 0.1, 0.01 and 0.001 mmol·L^-1) +6-OHDA, control and 6-OHDA group. The cell viability was evaluated with MTT assay. Intracellular free Ca²⁺，Ca²⁺i， was labeled by using the fluorescent dye Fluo3-AM and detected by flow cytometer. By measuring the intracellular Rhodamine 123 fluorescence density with flow cytometer, mitochondrial membrane potential (MMP) was evaluated. Results Cultures were treated with 2, 1 and 0.1 mmol·L^-1 CC, the viability of cell was increased (P<0.05). 1, 0.1, 0.01 and 0.001 mmol·L^-1 CC significantly attenuated 6-OHDA-induced neurotoxic effects. As compared with 6-OHDA, the viability of neurons increased, the mean Ca²⁺i was significantly lower in cells treated with CC(1, 0.1, 0.01 and 0.001 mmol·L^-1 ) plus 6-OHDA (49.30±7.62)% than that in 6-OHDA group without CC treatment (P<0.01). The densities of Ca²⁺i in CC (1, 0.1, 0.01 and 0.001 mmol·L^-1) plus 6-OHDA groups were (32.23±1.87)%,(17.09±7.45)%,(21.71±8.89)%,(29.18±4.71)%, respectively，and the density of mean Ca²⁺i in 6-OHDA group was (49.30±7.62)%. MMP significantly increased（P<0.01）. Conclusion CC has an important effect on dopaminergic cell survival in vitro in a validated model of PD. The neurotoxic effect of 6-OHDA can be reduced by CC and CC can increase the viability of neurons, decrease Ca²⁺i, maintain MMP at a relatively higher level.

Key words: neurons, cells, cultured, dopamine, Parkinson′s disease, neuroprotective remedy

中图分类号:

R977

姜晓燕，贾晓晶，吕文天，赵红光，王志成，龚守良. Citicoline对大鼠中脑原代细胞培养的神经保护作用[J]. J4, 2006, 32(2): 224-227.

JIANG Xiao-yan, JIA Xiao-jing, LU Wen-tian, ZHAO Hong-guang, WANG Zhi-cheng, GONG Shou-liang. Neuroprotective effects of citicoline on 6-hydroxydopamine-treatedmesencephalic dopaminergic neurons in primary culture[J]. J4, 2006, 32(2): 224-227.

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