金银花提取物对LPS诱导的急性前部葡萄膜炎小鼠的抗炎作用及其机制

doi:10.13481/j.1671-587X.20210422

摘要/Abstract

摘要： 目的

探讨金银花提取物对脂多糖（LPS）诱导的急性前部葡萄膜炎（AAU）小鼠的抗炎作用，并阐明其作用机制。

方法

将50只BALB/c小鼠随机分为对照组，模型组，低、中和高剂量金银花提取物组，每组10只。低、中和高剂量金银花提取物组小鼠灌胃给予250、500 和 750 mg·kg^－1金银花提取物，对照组和模型组小鼠均给予等体积生理盐水。连续给药15 d后，除对照组外其余各组小鼠于玻璃体腔内注射125 mg·L^－1LPS建立小鼠AAU模型。采用HE染色观察小鼠眼组织病理形态表现，采用实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）和Western blotting法检测小鼠眼组织中Toll样受体4（TLR4）及核因子κB（NF-κB）mRNA和蛋白表达水平，采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠眼组织中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素10（IL-10）水平。

结果

对照组小鼠眼组织结构完整，无炎症细胞浸润；模型组小鼠视网膜水肿，葡萄膜组织中出现大量炎症细胞浸润；与模型组比较，低、中和高剂量金银花提取物组小鼠葡萄膜组织中炎症细胞浸润不同程度减轻。与对照组比较，模型组小鼠眼组织中TLR4及NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05），TNF-α、IL-6和IL-10水平明显升高（P<0.05）；与模型组比较，低、中和高剂量金银花提取物组小鼠眼组织中TLR4及NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05），TNF-α、IL-6和IL-10水平明显降低（P<0.05）；与低剂量金银花提取物组比较，中和高剂量金银花提取物组小鼠眼组织中TLR4及NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05），TNF-α、IL-6和IL-10水平明显降低（P<0.05）；与中剂量金银花提取物组比较，高剂量金银花提取物组小鼠眼组织中TLR4及NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05），TNF-α、IL-6和IL-10水平明显降低（P<0.05）。

结论

金银花提取物可通过TLR4/NF-κB信号通路下调炎症细胞表达，减轻AAU小鼠的眼部组织炎症反应，且呈剂量依赖性。

关键词: 金银花提取物, 急性前部葡萄膜炎, 脂多糖, 小鼠

Abstract: Objective

To investigate the anti-inflammatory effect of honeysuckle extract on lipopolysaccharide （LPS）-induced acute anterior uveitis （AAU） in the mice， and to illuminate the mechanism.

Methods

Fifty BALB/c mice were randomly divided into control group， model group， and low， medium and high doses of honeysuckle extract groups（n=10）.The mice in low， medium and high doses of honeysuckle extract groups were given 250， 500 and 750 mg·kg^－1 honeysuckle extract by gavage， and the mice in control group and model group were given normal saline. After administration for 15 d，the mice in other groups except control group were injected with 125 mg·L^－1 LPS in the vitreous cavity to establish the AAU mouse models. HE staining was used to observe the pathomorphology of the eye tissue of the mice.Real-time fluorescence quantitative PCR（RT-qPCR） and Western blotting methods were used to detect the expression levels of Toll-like receptor 4（TLR4） and nuclear factor-κB（NF-κB） mRNA and proteins in eye tissue of the mice.ELISA was used to determine the levels of tumor necrosis factor-α （TNF-α）， interleukin-6 （IL-6） and interleukin-10 （IL-10） in eye tissue of the mice.

Results

The eye tissue of mice in control group was intact and had no inflammatory cell infiltration. Retinal edema occurred and a large number of inflammatory cells infiltrated in tissue of the mice in model group. Compared with model group， the infiltration of inflammatory cells in uvea tissue of the mice in low， medium and high doses of honeysuckle extract groups were decreased to different degrees.Compared with control group， the levels of TLR4 and NF- κB mRNA and proteins in model group were significantly increased （P<0.05）， while the levels of TNF-α， IL-6 and IL-10 were significantly increased （P<0.05）. Compared with model group，the levels of TLR4 and NF-κB mRNA and proteins in low， medium and high doses of honeysuckle extract groups were significantly decreased （P<0.05）， while the levels of TNF-α， IL-6 and IL-10 were significantly decreased （P<0.05）. Compared with low dose of honeysuckle extract group，the levels of TLR4 and NF-κB mRNA and proteins in eye tissue of the mice in medium and high doses of honeysuckle extract groups were significantly decreased （P<0.05），while the levels of TNF-α， IL-6 and IL-10 were significantly decreased（P<0.05）. Compared with medium dose of honeysuckle extract group，the levels of TLR4 and NF-κB mRNA and proteins in high dose of honeysuckle extract group were significantly decreased （P<0.05）， while the levels of TNF-α， IL-6 and IL-10 were significantly decreased（P<0.05）.

Conclusion

Honeysuckle extract can down-regulate the expression of inflammatory cells and reduce the inflammatory response of eye tissue in the AUU mice through the TLR4/NF-κB signaling pathway.

Key words: honeysuckle extract, acute anterior uveitis, lipopolysaccharide, mice, anti-inflammatory effects

中图分类号:

R773.9

李康宁,宋志领,贾利龙,楚妙,熊朝晖. 金银花提取物对LPS诱导的急性前部葡萄膜炎小鼠的抗炎作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2021, 47(4): 978-983.

Kangning LI,Zhiling SONG,Lilong JIA,Miao CHU,Chaohui XIONG. Anti-inflammatory effect of honeysuckle extract on acute anterior uveitis mice induced by LPS and its mechanism[J]. Journal of Jilin University(Medicine Edition), 2021, 47(4): 978-983.

图/表 4

图1

表1

图2

表2

参考文献 22

1	GHITĂ A C， ILIE L， GHITĂ A M. The effects of inflammation and anti-inflammatory treatment on corneal endothelium in acute anterior uveitis［J］. Rom J Ophthalmol， 2019， 63（2）： 161-165.
2	YU S， MAO C， YU J Y， et al. A study of the key genes and inflammatory signaling pathways involved in HLA-B27-associated acute anterior uveitis families［J］. Int J Mol Med， 2018， 42（1）： 259-269.
3	何唯，黄旭东. 内毒素诱导的葡萄膜炎动物模型相关研究进展［J］. 青岛医药卫生， 2017， 49（2）： 135-138.
4	樊俐慧，吉红玉，兰雨泽，等. 金银花量效关系及其临床应用［J］. 吉林中医药， 2019， 39（5）： 597-600.
5	石艳宾，李文静. 响应面优化金银花绿原酸提取工艺及抗氧化作用研究［J］. 食品研究与开发， 2019， 40（21）： 152-158.
6	李建军，任美玲，尚星晨，等. 共水蒸馏法提取金银花挥发油及其成分分析［J］.河南农业科学，2017，46（12）：144-148.
7	ZHAO Y， DOU D， GUO Y， et al. Comparison of the trace elements and active components of lonicera japonica flos and lonicera flos using ICP-MS and HPLC-PDA［J］. Biol Trace Elem Res， 2018， 183（2）： 379-388.
8	KIM S J， KIM J S， CHOI H S， et al. HS-23， a Lonicera japonica extract， reverses sepsis-induced immunosuppression by inhibiting lymphocyte apoptosis［J］. J Ethnopharmacol， 2015， 171： 231-239.
9	杨娟，于晓涛，郭丽娜，等. 金银花抗肺癌作用机制的网络药理学研究［J］. 药物评价研究， 2020， 43（2）： 213-220.
10	ZHANG T， LIU H， BAI X， et al. Fractionation and antioxidant activities of the water-soluble polysaccharides from Lonicera japonica Thunb［J］. Int J Biol Macromol， 2020， 151： 1058-1066.
11	崔晓燕. 金银花提取物的抗炎免疫作用研究［J］. 中国药业， 2011， 20（23）： 8-9.
12	白雪. 金银花提取物对化合物48/80，组胺及P物质诱导小鼠瘙痒模型的作用［J］. 山东大学学报（医学版）， 2015， 53（53）： 46-49.
13	王燕云，张栋彦，耿园园，等. 血管生成素对脂多糖诱导的急性葡萄膜炎小鼠的抗炎作用［J］. 眼科新进展， 2020， 40（10）： 933-935.
14	余奇，许迅. 实验性自身免疫性葡萄膜炎模型的研究进展［J］.上海交通大学学报（医学版），2013，33（10）：1411-1414.
15	李上，卢弘. LPS-TOLL样受体-4在急性前葡萄膜炎发病机制中的研究进展［J］.眼科新进展，2009，29（9）： 709-712.
16	SONG G X， HUANG J X， DENG Y L， et al. The expression of calprotectin and factors in TLR4/NF-κB/MyD88 pathway in patients with idiopathic acute anterior uveitis［J］. Ocular Immunol Inflamm， 2019， 27（7）： 1144-1148.
17	李上，卢弘，胡小凤，等. TLR4-MyD88在大鼠急性前葡萄膜炎虹膜中的表达［J］.眼科研究，2010，19（2）： 97-102.
18	KAUPPINEN A， SUURONEN T， OJALA J， et al. Antagonistic crosstalk between NF-κB and SIRT1 in the regulation of inflammation and metabolic disorders［J］. Cell Signal， 2013， 25（10）： 1939-1948.
19	张晓龙，王婧，许卓再，等. 大黄多糖对内毒素诱导急性前葡萄膜炎TLR4/NF-κB传导通路干预作用的实验研究［J］. 眼科， 2013， 22（2）： 134-140.
20	RHODUS N L， CHENG B， MYERS S， et al. The feasibility of monitoring NF-κB associated cytokines： TNF-α， IL-1α， IL-6， and IL-8 in whole saliva for the malignant transformation of oral lichen planus［J］. Mol Carcinog， 2005， 44（2）： 77-82.
21	ZUSSO M， LUNARDI V， FRANCESCHINI D， et al. Ciprofloxacin and levofloxacin attenuate microglia inflammatory response via TLR4/NF-kB pathway［J］. J Neuroinflammation， 2019， 16（1）： 148.
22	邓珍，吴一峰，姜蕾，等. 苦参碱眼液调控TLR4/NF-κB通路影响实验性葡萄膜炎家兔相关细胞因子的表达［J］. 中华全科医学， 2020， 18（4）： 568-572.

Group	TLR4		NF-κB
	mRNA	Protein	mRNA	Protein
Control	1.00±0.02	0.12±0.02	1.00±0.03	0.31±0.01
Model Honeysuckle	1.74±0.07^*	0.54±0.03^*	2.17±0.09^*	0.78±0.04^*
Low dose	1.59±0.08^△	0.39±0.04^△	1.68±0.05^△	0.60±0.04^△
Medium dose	1.26±0.09^△#	0.22±0.02^△#	1.60±0.07^△#	0.41±0.03^△#
High dose	1.20±0.07^△#○	0.16±0.02^△#○	1.31±0.05^△#○	0.33±0.03^△#○

Group	TNF-α	IL-6	IL-10
Control	45.33±6.72	26.32±3.21	55.60±6.41
Model Honeysuckle	168.24±12.35^*	230.23±12.41^*	138.45±10.21^*
Low dose	102.31±10.20^△	130.50±10.25^△	96.31±8.74^△
Medium dose	76.41±8.99^△#	67.09±5.49^△#	79.54±8.20^△#
High dose	59.70±8.02^△#○	39.21±4.84^△#○	62.11±7.66^△#○

[1]	乔树伟,李保胜,李效宇,王子璇,李碧榕,董博,孟维艳. 炎症状态下人牙周膜成纤维细胞中SLC7A11和GPX4的表达水平及其意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(4): 922-928.
[2]	王兆卫,吕亚楠,胡正,杨永广. 基于CRISPR/Cas9技术构建LDLR基因敲除的免疫缺陷小鼠模型及其表型分析[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(2): 271-276.
[3]	王曼莹,付宝玉,徐晓浩,李香竹,陈红,孙立伟,赵大庆. 人参组培不定根蛋白对小鼠的抗疲劳作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 18-25.
[4]	刘昊川,李新贺,陈冰. 红细胞人源化小鼠模型的构建及其临床应用研究进展Research progress in construction and its clinical application of humanized mouse model of red blood cells[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 241-248.
[5]	董浩,江海圳,李超,高登科,靳亚平,陈华涛. 小鼠NR1D1基因过表达载体的构建及其生物信息学分析[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 94-103.
[6]	白雪,于露,杨文强,何鑫,杨新生,杨菁. 肌肽对脂多糖诱导星形胶质细胞炎症因子释放的抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2021, 47(2): 330-337.
[7]	杨吉平, 费琳, 柴学军, 苟兴春. MyD88抑制肽对LPS诱导BV2小胶质细胞极化状态的抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2020, 46(05): 899-904.
[8]	刘岚清, 李瑞林, 周晓敏, 孟峻. CDC14B在小鼠1-细胞期受精卵各细胞周期的动态表达及其定位[J]. 吉林大学学报(医学版), 2020, 46(04): 675-679.
[9]	王欣欣, 李思佳, 关洪全, 侯殿东. DNCB对BALB/c小鼠特应性皮炎的诱导作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2020, 46(03): 439-443.
[10]	林久涵, 田琳, 张娜娜, 董营, 吕航, 王丹, 曲萌, 张勇, 孙连坤, 于春艳, 刘希. 线粒体动力学改变对APP/PS1小鼠移植黑色素瘤生长的抑制作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2020, 46(03): 476-481.
[11]	陈州华, 龚辉, 冯磊, 肖玉洁, 黄立中. LPS对乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化的诱导作用及其对β-catenin表达的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2020, 46(02): 309-315.
[12]	吕亚楠, 范伟, 胡正. 基于piggyBac转座子系统构建长期表达人细胞因子的免疫缺陷小鼠模型[J]. 吉林大学学报(医学版), 2020, 46(01): 176-181.
[13]	张宸豪, 李瑶, 李正祎, 骆晓峰. 原花青素B1对LPS诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7损伤的保护作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2019, 45(06): 1243-1247.
[14]	梁小波, 吴德洪, 王星, 张沄, 王孝芸, 李国平. 鼻内滴注烟草提取物和脂多糖建立慢性阻塞性肺疾病小鼠模型的评价[J]. 吉林大学学报(医学版), 2019, 45(06): 1454-1458.
[15]	杨云, 马喜兴, 王大虎, 张环环, 马耀辉, 任翠敏, 刘强. 丹参酮ⅡA对过敏性紫癜肾炎小鼠肾组织中Cosmc和AOPP表达的影响及其治疗作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2019, 45(04): 867-871.