aaptamine 与顺铂联合用药对人肺腺癌顺铂耐药A549/DDP细胞的协同抑制作用

doi:10.13481/j.1671-587x.20210102

摘要/Abstract

摘要： 目的

探讨aaptamine与顺铂（DDP）联合用药对肺癌DDP耐药A549/DDP细胞的协同抑制作用，并阐明其可能的分子机制。

方法

取对数生长期A549/DDP细胞，加入不同浓度aaptamine和（或）DDP培养48 h，采用CCK-8法检测aaptamine和DDP的半数抑制浓度（IC₅₀），利用Chou-Talalay中效分析法计算aaptamine和DDP的联合指数（CI），确定最佳联合用药浓度。将细胞分为对照组、aaptamine组（5 mg·L^－1）、DDP组（1 mg·L^－1）和联合用药组（5 mg·L^－1aaptamine＋ 1 mg·L^－1DDP），采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性，克隆形成实验检测各组细胞克隆数，划痕实验观察各组细胞迁移能力，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blotting 法检测各组细胞中耐药和凋亡相关蛋白表达水平。

结果

aaptamine 和DDP对A549/DDP细胞的IC₅₀分别为19.45和12.86 mg·L^－1。所选择的不同浓度aaptamine和DDP对A549/DDP细胞均有协同抑制作用。细胞增殖实验，与对照组、aaptamine组和DDP组比较，联合用药组细胞增殖活性明显降低（P<0.01）。克隆形成实验，与对照组、aaptamine组和DDP组比较，联合用药组克隆数明显减少（P<0.05或P<0.01）。细胞划痕实验，与对照组、aaptamine组和DDP组比较，联合用药组细胞迁移率明显降低（P<0.01）。流式细胞术检测，与对照组、aaptamine组和DDP组比较，联合用药组细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）。Western blotting法检测，与对照组、aaptamine组和DDP组比较，联合用药组细胞中三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01），B细胞淋巴瘤2原癌基因（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）/Bcl-2比值明显升高（P<0.05或P<0.01）；与对照组比较，联合用药组切除修复交叉互补基因1（ERCC1）蛋白表达水平降低（P<0.05）。

结论

aaptamine 和DDP联合用药对A549/DDP细胞具有协同抑制作用，其机制可能与抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调耐药蛋白ABCG2和ERCC1表达水平有关。

关键词: aaptamine, 顺铂耐药, 肺肿瘤, A549/DDP细胞, 协同作用

Abstract: Objective

To investigate the synergetic inhibitory effect of aaptamine and cisplatin （DDP） on the DDP resistant human lung cancer A549/DDP cells， and to clarify its possible molecular mechanism.

Methods

The A549/DDP cells in logarithmic phase were selected and cultured with different concentrations of aaptamine and DDP for 48 h； the medium inhibitory concentrations（IC₅₀） of aaptamine and DDP were detected by CCK-8 assay； the combination index （CI） of aaptamine and DDP were analyzed by Chou-Talalay method and the optimal combination concentrations were confirmed. The cells were divided into control group， aaptamine group（5 mg·L^－1）， DDP group（1 mg·L^－1）， and combination group （5 mg·L^－1aaptamine +1 mg·L^－1DDP）. The proliferation activities of cells in various groups were detected by CCK-8 assay.The number of clones of the cells in various groups was determined by clonal formation assay. The migration abilities of the cells in various groups were detected by scratch assay. The apoptotic rates of cells in various groups were detected by double-staining flow cytometry. Western blotting method was performed to detect the expression levels of resistance-related proteins in the cells in various groups.

Results

The IC₅₀ values of aaptamine and DDP for the A549/DDP cells were 19.45 mg·L^－1 and 12.86 mg·L^－1， respectively. Co-treatment with aaptamine and DDP produced a synergistic effect at any selected concentrations in the A549/DDP cells. The proliferation assay results showed that compared with control group， aaptamine group and DDP group， the proliferation activity of the cells in combination group was decreased （P<0.01）. The clone formation assay results showed that compared with control group， aaptamine group and DDP group， the number of clones in combination group was decreased （P<0.05 or P<0.01）. The scratch assay results showed that compared with control group， aaptamine group and DDP group， the migration rate of cells in combination group was decreased significantly （P<0.01）. The flow cytometry results showed that compared with control group， aaptamine group and DDP group， the apoptotic rate of A549/DDP cells in combination group was markedly increased （P<0.05 or P<0.01）. The Western blotting results showed that compared with control group， aaptamine group and DDP group， the expression level of resistance related proteins ATP binding cassette subfamily G member 2（ABCG2） in the cells in combination group was decreased （P<0.05 or P<0.01），and the ratio of Bax/Bcl-2 was increased （P<0.05 or P<0.01）.Compared with control group，the expression level of excision repair cross complementing group 1（ERCC1） protein in combination group was decreased （P<0.05）.

Conclusion

Aaptamine has a synergistic inhibitory effect with DDP in the A549/DDP cells and its mechanism may be related to inhibiting proliferation， inducing apoptosis and decreasing the expression levels of resistance-related proteins ABCG2 and ERCC1.

Key words: aaptamine, cisplatin resistance, lung neoplasms, A549/DDP cells, synergistic effect

中图分类号:

R734.2

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图/表 7

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表1

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Group	ABCG2	ERCC1	Bax /Bcl-2
Control	1.09±0.04	1.38±0.21	0.30±0.06
Aaptamine	1.04±0.08	1.16±0.10	0.66±0.18
DDP	0.90±0.02	0.92±0.19	0.63±0.13
Combination	0.59±0.08^*?#	0.55±0.04^*	1.74±0.05^**??##

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