稳定高效表达p21WAF1/CIP1蛋白的Hela细胞株的建立

doi:吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题

稳定高效表达p21WAF1/CIP1蛋白的Hela细胞株的建立

侯治富，卜丽莎，董贵福^△，王维忠，郑斐^#

吉林大学中日联谊医院中心实验室，吉林长春130031

收稿日期:2003-04-23 修回日期:1900-01-01 出版日期:2004-01-28 发布日期:2004-01-28

Establishment of cell line Hela-WAF1 of efficientand stable expression on p21WAF1/CIP1

HOU Zhi-fu, BU Li-sha, DONG Gui-fu^△，WANG Wei-zhong, ZHENG Fei^#

Central Laboratory, China-Japan Union Hospital, Jilin University, Changchun 130031，China

Received:2003-04-23 Revised:1900-01-01 Online:2004-01-28 Published:2004-01-28

摘要/Abstract

摘要： 目的：建立高效、稳定表达p21WAF1/CIP1人宫颈癌细胞株Hela-pcDNA3-WAF1。方法：应用脂质体(lipofectin)将质粒pcDNA3和重组质粒pcDNA3-WAF1分别转入人宫颈癌细胞系Hela细胞；经G418筛选，转染阳性细胞连续传代培养，并应用免疫荧光技术监测重组基因p21WAF1/CIP1翻译水平的表达活性。结果：经G418筛选，Hela细胞全部死亡，转染质粒pcDNA3和重组质粒pcDNA3-WAF1的Hela细胞存活，并可连续传代培养30代；免疫荧光技术监测p21WAF1/CIP1表达结果显示：转染重组质粒pcDNA3-WAF1的Hela细胞p21WAF1/CIP1表达阳性细胞率（92.83%）显著高于转染质粒pcDNA3（12.26%）和Hela细胞组（5.63%）（F=17 218.22，P<0.001）；各代间差异无显著性（F=1.562，P>0.05）。结论：建立一株高效、稳定表达p21WAF1/CIP1人宫颈癌细胞株Hela-pcDNA3-WAF1。

关键词: CIP1, Hela细胞, 脂质体, 基因转移技术

Abstract: Objective To establish a cell line Hela-WAF1 of efficient and stable expression on p21WAF1/CIP1. Methods Recombined vector pcDNA3-WAF1 and vector pcDNA3 were transferred to Hela cell line by lipofectin, respectively. These two cell lines were selected by G418, and the selected cell lines were subcultured. Hela cell line was enclosed as control group. The expression of p21WAF1/CIP1 was detected by immunofluorescence. Results After G418 selecting, Hela cell line in control group was died, and the cell lines transferring pcDNA3 and recombined pcDNA3-WAF1 were subcultured over 30 generations. The p21WAF1/CIP1 expression in Hela-pcDNA3-WAF1 was 92.83%. The results showed that recombined gene of WAF1 was more efficient expression, compared with other two groups (F=17 218.22,P<0.001); There was no significant difference in every generation (F=1.562,P>0.05). Conclusion The cell line Hela-pcDNA2-WAF1 of efficient and stable expressing p21WAF1/CIP1 is established successfully.

Key words: CIP1, Hela cells, liposomes, gene transfer techniques

中图分类号:

Q786

侯治富，卜丽莎，董贵福，王维忠，郑斐. 稳定高效表达p21WAF1/CIP1蛋白的Hela细胞株的建立[J]. J4, 2004, 30(1): 49-51.

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