mIL-4昆虫表达载体pIZT/V5-His的构建及其高效表达

doi:美国国立卫生研究院资助课题(NIH48568)

mIL-4昆虫表达载体pIZT/V5-His的构建及其高效表达

孙延波，李菁华，史红艳

吉林大学基础医学院病原生物学教研室，吉林长春130021

收稿日期:2005-03-09 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-03-28 发布日期:2006-03-28

Construction and expression of inset expression vector pIZT/V5-His harboring mIL-4

SUN Yan-bo， LI Jing-hua，SHI Hong-yan

Department of Pathogenobiology, School of Basic Medical Sciences, Jilin University, Changchun 130021, China

Received:2005-03-09 Revised:1900-01-01 Online:2006-03-28 Published:2006-03-28

摘要/Abstract

摘要： 目的：构建昆虫表达载体pIZT/V5-His的基础上，建立能稳定高效表达mIL-4的昆虫细胞系。方法：PCR体外扩增mIL-4, 将目的基因mIL-4和昆虫表达载体pIZT/V5-His用EcoRI 和XbaI 做双酶切, 通过T4 DNA连接酶构建成含mIL-4目的基因的表达载体pIZT/V5-His-IL4。采用脂质体法将重组DNA转染到生长良好的昆虫细胞Sf9中。转染后的第3天, 用ELISA方法检测转染细胞的培养上清中分泌型蛋白mIL-4的含量。结果:转染后的昆虫细胞Sf9能产生大量的mIL-4, 含量可达1 mg·L^-1, 明显高于对照组(0.003 mg·L^-1)。结论:昆虫表达载体pIZT/V5-His 可用于mIL-4的高效表达。

关键词: 昆虫细胞Sf9, 基因表达, 遗传载体

Abstract: Objective To establish stable insect cell line expressing mIL-4 on the basis of construction of inset expression vector pIZT/V5-His. Methods Amplified mIL-4 and pIZT/V5-His were treated with EcoRI and XbaI, and mIL-4 were ligated into pIZT/V5-His vector using T4 DNA ligase. Sf9 cells were transfected with recombinant DNA and ELISA was employed to detect soluble mIL-4 production by transfected Sf9 cells. Results Transfected Sf9 cells could significantly produce mIL-4 (1 mg·L^-1) compared with control group(0.003 mg·L^-1) . Conclusion Inset expression vector pIZT/V5-His is an ideal expression vector for mIL-4 production in transfected cells.

Key words: insect cell Sf9, gene expression, genetic vectors

中图分类号:

Q786

孙延波，李菁华，史红艳. mIL-4昆虫表达载体pIZT/V5-His的构建及其高效表达[J]. J4, 2006, 32(2): 194-195.

SUN Yan-bo， LI Jing-hua，SHI Hong-yan. Construction and expression of inset expression vector pIZT/V5-His harboring mIL-4[J]. J4, 2006, 32(2): 194-195.

[1]	陈炳鹏, 任明, 李容杭, 韩青, 王金成. 基因芯片技术检测NOB1对骨肉瘤细胞相关基因的调控作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(05): 929-934.
[2]	田丹, 孙新, 安晓婷, 张立岩, 刘杨, 佟海滨, 李坦, 申野, 满枋霖, 颜伟群. HSA-TP5融合基因表达载体的构建及其真核表达[J]. 吉林大学学报(医学版), 2017, 43(05): 948-952.
[3]	辛桂杰, 朱海超, 李昊, 温剑平. 最低限度免疫定义基因表达的HCV多表位DNA疫苗对小鼠细胞免疫的诱导作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(06): 1071-1075.
[4]	齐玲, 王玮瑶, 郑中华, 张以忠, 赵丽微, 钟秀宏, 赵东海, 杨淑艳, 杨宁江, 任旷, 于洪泉. SUMO及SUMO化修饰蛋白在恶性胶质瘤发生中的作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(01): 7-10.
[5]	刘姝，王霁雪,吴雅臻，王淑梅. 色素上皮源性因子基因转染对巨噬细胞诱导大鼠增生性玻璃体视网膜病变的抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(6): 1181-1185.
[6]	孙晓宇，何钟勤，刘晓红，高心，钟丞，薛莹. 殊异韦荣菌sahH基因的克隆、表达和纯化[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(4): 704-709.
[7]	张雪，陈萍，毕云枫，曲宁宁，刘琼，孙鑫泽. 木糖氧化产碱菌中亚硝酸盐还原酶基因的克隆与表达[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(4): 690-693.
[8]	贾晓辉，罗建民，刘亚平，尹婉宜，张丽红. SHIP和Caspase-3 mRNA在骨髓增生异常综合征患者骨髓组织中的表达及其临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 554-558.
[9]	贺梦子，赵银龙，刘晓冬，马淑梅，刘欣. 甲状腺乳头状癌组织中差异表达miRNA及其靶基因的筛选和预测[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(1): 99-103.
[10]	伍贤军\|缪璇\|程秀\|王妍青\|辻一郎\|李晓萌. GFP-SUMO-3融合蛋白的重组及其在LNCaP细胞中的表达和定位[J]. J4, 2011, 37(6): 1024-1027.
[11]	孙玲,刘慧颖,李淑红\|宫鹏涛\|张西臣. 弓形虫GRA1基因的克隆与原核表达[J]. J4, 2011, 37(4): 631-635.
[12]	刘洁, 贾天军, 刘雪晴, 贾晓辉, 翟雪琼. 人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白激酶-2 C端基因的克隆与鉴定[J]. J4, 2011, 37(1): 51-55.
[13]	赵丽晶, 许多, 程宏, 梁作文, 鲁育铭, 韩向北, 郭亚雄, 赵丽娟, 董妍. 20(s)-原人参二醇对体外培养Siha细胞caspase-3表达激活的影响[J]. J4, 2011, 37(1): 26-29.
[14]	李智, 郎晓讴, 张绍军, 姜文华. Stat3和Stat5在分化型甲状腺癌组织中的表达及意义[J]. J4, 2010, 36(4): 708-712.
[15]	李静, 朴云峰, 蒋政, 安鼎伟, 金丽君. STAT3基因在人肝癌细胞株HepG2、Bel7402、SMMC7721和肝癌组织中的表达及意义[J]. J4, 2010, 36(3): 531-535.