hβ2GPⅠ第一功能区基因单体和二串联体的克隆和表达

doi:吉林省科技厅科研基金资助课题（20030419）

hβ₂GPⅠ第一功能区基因单体和二串联体的克隆和表达

李明辉, 谭岩^*，姜艳芳，刘力华，方艳秋，许淑芬，段秀梅，付嘉

吉林大学第一医院中心实验室，吉林长春130021

收稿日期:2005-10-17 修回日期:1900-01-01 出版日期:2006-03-28 发布日期:2006-03-28
通讯作者: 谭岩^*

Cloning and expression of monomer and dimmerof hβ₂GPⅠ first domain gene

LI Ming-hui, TAN Yan^*，JIANG Yan-fang, LIU Li-hua, FANG Yan-qiu, XU Shu-fen, DUAN Xiu-mei,FU Jia

Department of Central Laboratory, First Hospital, Jilin University, Changchun 130021, China

Received:2005-10-17 Revised:1900-01-01 Online:2006-03-28 Published:2006-03-28
Contact: TAN Yan^*

摘要/Abstract

摘要： 目的：构建hβ₂GPⅠ(hβ₂GPⅠ)第一功能区基因单体及二串联体的原核表达载体PQE30-β₂GPⅠ-DI和PQE30-β₂GPⅠ-DI₂，并在大肠杆菌M15中进行高效表达。方法：应用PCR技术扩增hβ₂GPⅠ第一功能区基因的单体β₂GPⅠ-DI，并根据同尾酶特性构建hβ₂GPⅠ第一功能区基因二串联体β₂GPⅠ-DI₂，将获得的单体和二串联体分别与PGEM-T easy载体连接测序，测序正确后分别克隆于原核表达载体PQE30中，构建成重组表达载体PQE30-β₂GPⅠ-DI和PQE30-β₂GPⅠ-DI₂，在大肠杆菌M15中以l mmol·L^-1 IPTG诱导蛋白表达，经Western blotting鉴定目的蛋白的抗原性。结果：表达了hβ₂GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的蛋白，相对分子质量约为9 000和17 000，其表达量均可达菌体总蛋白的25％，并具有hβ₂GPⅠ的抗原性。结论：成功构建了hβ₂GPⅠ第一功能区基因的单体及二串联体的原核表达载体，并诱导了蛋白的高效表达。

关键词: sub>GPⅠ, 遗传载体, 基因表达

Abstract: Objective To clone and express the genes of hβ₂GPⅠ-DI and hβ₂GPⅠ-DI₂ in E.coli M15. Methods Target gene β₂GPⅠ-DI was cloned by PCR,the PCR products were connected into dimmer,the monomer and dimmer were inserted into PGEM-T easy vector and sequenced. Then they were inserted into an expression vector PQE30 and expressed in E.coli M15. The recombinant proteins were identified by Western blotting. Results The expected protein of hβ₂GPⅠ-DI and hβ₂GPⅠ-DI₂ recombinant protein were synthesized, their relative molecular mass were 9 000 and 17 000. The two proteins could be recognized by hβ₂GPⅠ mAb with Western blotting. Conclusion The monomer and dimmer of hβ₂GPⅠ first domain gene are constructed successfully.

Key words: sub>GPⅠ, genetic vectors, gene expression

中图分类号:

李明辉, 谭岩，姜艳芳，刘力华，方艳秋，许淑芬，段秀梅，付嘉. hβ₂GPⅠ第一功能区基因单体和二串联体的克隆和表达[J]. J4, 2006, 32(2): 203-206.

LI Ming-hui, TAN Yan，JIANG Yan-fang, LIU Li-hua, FANG Yan-qiu, XU Shu-fen, DUAN Xiu-mei,FU Jia. Cloning and expression of monomer and dimmerof hβ₂GPⅠ first domain gene[J]. J4, 2006, 32(2): 203-206.

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hβ₂GPⅠ第一功能区基因单体和二串联体的克隆和表达

Cloning and expression of monomer and dimmerof hβ₂GPⅠ first domain gene

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