人肝细胞生长因子真核表达载体的构建及在COS7细胞中的表达

doi:吉林省科技厅基金资助课题（99031601）

人肝细胞生长因子真核表达载体的构建及在COS₇细胞中的表达

李玉香，王峰，牛俊奇，闫红青，张锦前^*，姜艳芳

吉林大学第一医院感染症科，吉林长春 130021

收稿日期:2006-08-22 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-03-28 发布日期:2007-03-28
通讯作者: 牛俊奇

Construction of hepatocyte growth factor expression vector and detection of its expression in COS₇ cell line

LI Yu-xiang, WANG Feng, NIU Jun-qi, YAN Hong-qing, ZHANG Jin-qian^*, JIANG Yan-fang

Department of Infectious Disease, First Hospital, Jilin University, Changchun 130021, China

Received:2006-08-22 Revised:1900-01-01 Online:2007-03-28 Published:2007-03-28
Contact: NIU Jun-qi

摘要/Abstract

摘要： 目的:构建人肝细胞生长因子（HGF）的真核表达载体，并在COS₇细胞中进表达。方法:利用PCR技术扩增HGF基因，与PCI-Neo载体连接，构建成重组真核表达载体PCI-neo-HGF，应用限制性内切酶法及测序方法进行鉴定。利用脂质体将PCI-HGF转入COS₇细胞系中，用ELISA法检测培养液上清中的HGF的表达水平。结果:重组真核表达载体PCI-neo-HGF经限制性内切酶分析，片段与理论值相符，测序结果与GenBank 对比, HGFcDNA序列同源性99%, 插入正确；将重组真核表达载体PCI-neo-HGF转染COS₇细胞，于转染12 h开始有表达，36～72 h表达量较高(约2 000 ng•L^-1)，以后逐渐下降。结论: 成功构建了带有HGF 基因真核表达载体，并能在转染细胞中表达。

关键词: 遗传载体, 基因表达, COS细胞

Abstract: To construct PCI-hepatocyte growth factor (HGF) expression vector and to detect its transient expression in transfected COS₇ cell line. Methods Techniques of gene recombination and gene transfection were employed. Human HGF cDNA was ligated to PCI-neo. The recombinant plasmid was transfected into COS₇ cell line with liposome. The expression of HGF protein was observed by ELISA method. Results PCI-neo-HGF expression vector was analyzed by transient expression，the fragment was same as theoretical value. Compared with GenBank, the conspecific property of HGFcDNA array was 99%. Identification of PCI-HGF by enzyme digestion showed that HGF fragment had been cloned into BamHⅠand SalⅠ sites of PCI-neo vector. The expression of HGF was observed in COS₇ cells transfected with PCI-HGF for 12 h; the value of expression was 2 000　ng•L^-1 in 36-72 h, then,the value gradually declined. Conclusion The PCI-HGF expression vector is constructed successfully and it can express in transfected COS₇ cell line.

Key words: genetic vector, gene expression, COS cells

中图分类号:

李玉香，王峰，牛俊奇，闫红青，张锦前，姜艳芳. 人肝细胞生长因子真核表达载体的构建及在COS₇细胞中的表达[J]. J4, 2007, 33(2): 297-300.

LI Yu-xiang, WANG Feng, NIU Jun-qi, YAN Hong-qing, ZHANG Jin-qian, JIANG Yan-fang. Construction of hepatocyte growth factor expression vector and detection of its expression in COS₇ cell line[J]. J4, 2007, 33(2): 297-300.

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人肝细胞生长因子真核表达载体的构建及在COS₇细胞中的表达

Construction of hepatocyte growth factor expression vector and detection of its expression in COS₇ cell line

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