HIV多抗原位点同源序列合成基因的表达及活性鉴定

doi:国家质检总局科研基金资助课题（2007IK202

HIV多抗原位点同源序列合成基因的表达及活性鉴定

杨怀宁^1,2，徐卉³，浦昀^1,2，于湘晖⁴，张煜⁴，赵大力²，孙志伟¹

1.吉林大学公共卫生学院卫生毒理学教研室，吉林长春130021; 2.吉林出入境检验检疫局，吉林长春 130062; 3.吉林大学第一医院电诊科，吉林长春 130021；4.吉林大学生命科学学院疫苗研究中心，吉林长春130012

收稿日期:2007-11-14 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-03-28 发布日期:2008-03-28
通讯作者: 孙志伟

Expression and preliminary activity identification of several linked antigen epitopes of consensce genes of HIV

YANG Huai-ning^1,2,XU Hui³,PU Yun^1,2,YU Xiang-hui⁴,ZHANG Yu⁴,ZHAO Da-li²,SUN Zhi-wei¹

1.Department of Toxicology,School of Public Health,Jilin University,Changhun 130021,China; 2.Jilin Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Changchun 130062,China; 3.Department of Electrondiagnosis,First Hospital,Jilin University,Changchun 130021,China; 4.Vaccine Research Center,School of Life Science,Jilin University,Changchun 130012,China)

Received:2007-11-14 Revised:1900-01-01 Online:2008-03-28 Published:2008-03-28
Contact: SUN Zhi-wei

摘要/Abstract

摘要： 目的：在原核表达载体系统中对HIV-1gp41/gp120和HIV-2gp125/gp36外膜蛋白多个抗原位点同源序列合成基因进行表达、纯化并鉴定其活性。方法：人工合成含HIV-1gp41的3个抗原位点、HIV-1gp120的2个抗原位点、HIV-2gp125的3个抗原位点和HIV-2gp36的1个抗原位点的串联基因，克隆到原核表达载体pRSETB中，构建重组表达质粒pRSETB-env，用异丙-β-Ｄ-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达，采用金属离子亲和层析技术纯化表达蛋白，逐渐降低尿素浓度使目的蛋白复性，免疫印迹和ELISA法分别对表达产物进行鉴定。结果：目的基因在BL21中有较高表达率，纯化后表达蛋白经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可见相对分子质量约44 000的蛋白带，与设计相对分子质量相符。免疫印迹、ELISA试验显示pRSETB-env质粒的HIV-1/2表达蛋白与HIV-1及HIV-2患者血清都能较好地结合，与其他患者血清无交叉反应。结论：成功构建了由HIV-1/2外膜蛋白多个抗原位点串联基因片段的表达载体pRSETB-env，并在原核细胞中高效表达，表达蛋白经纯化后纯度较高,并具有良好特异性和活性。

关键词: 合成基因, 基因表达, 活性鉴定

Abstract: Objective To express the several linked antigen epitopes of consence genes of HIV-1gp41/gp120 and HIV-2gp125/gp36 in the system of prokaryotic expression vector;to purify and identify the expression products.Methods In order to construct the recombinant expression plasmid pRSETB-env,the linked genes contained three antigen epitopes of gp41,two antigen epitopes of gp120,one antigen epitope of gp36 and three antigen epitopes of gp125 were inserted into pRSETB vector.After transformed into E.coli BL21(DE3) cells,the recombinant protein was expressed with induction of isopropy1β-D-thiogalactopyranoside(IPTG),and was purified by immobilized metalion affinity chromatograph and was recoveried by decreasing the concentration of urea.The immunoactivity was analyzed by Western blotting and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).Results An expected expressing protein band (about 44 000) was seen with sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE).The aim genes revealed higher expressive rate in E.coli BL21(DE3) cells.The results of Western blotting and ELISA showed specific reactions with HIV patients’sera,and no cross-reaction with other patients’sera using the expression protein.Conclusion The recombinant expression plasmid pRSETB-env which contained the several linked antigen epitopes of envelop genes of HIV is successfully constructed.After purification,the expression protein possesses higher pureness,good specificity and activity.

Key words: chimeric gene, gene expression, activity identification

中图分类号:

杨怀宁，徐卉，浦昀，于湘晖，张煜，赵大力，孙志伟. HIV多抗原位点同源序列合成基因的表达及活性鉴定[J]. J4, 2008, 34(2): 217-220.

YANG Huai-ning,XU Hui,PU Yun,YU Xiang-hui,ZHANG Yu,ZHAO Da-li,SUN Zhi-wei. Expression and preliminary activity identification of several linked antigen epitopes of consensce genes of HIV[J]. J4, 2008, 34(2): 217-220.

[1]	陈炳鹏, 任明, 李容杭, 韩青, 王金成. 基因芯片技术检测NOB1对骨肉瘤细胞相关基因的调控作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(05): 929-934.
[2]	田丹, 孙新, 安晓婷, 张立岩, 刘杨, 佟海滨, 李坦, 申野, 满枋霖, 颜伟群. HSA-TP5融合基因表达载体的构建及其真核表达[J]. 吉林大学学报(医学版), 2017, 43(05): 948-952.
[3]	辛桂杰, 朱海超, 李昊, 温剑平. 最低限度免疫定义基因表达的HCV多表位DNA疫苗对小鼠细胞免疫的诱导作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(06): 1071-1075.
[4]	齐玲, 王玮瑶, 郑中华, 张以忠, 赵丽微, 钟秀宏, 赵东海, 杨淑艳, 杨宁江, 任旷, 于洪泉. SUMO及SUMO化修饰蛋白在恶性胶质瘤发生中的作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(01): 7-10.
[5]	刘姝，王霁雪,吴雅臻，王淑梅. 色素上皮源性因子基因转染对巨噬细胞诱导大鼠增生性玻璃体视网膜病变的抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(6): 1181-1185.
[6]	孙晓宇，何钟勤，刘晓红，高心，钟丞，薛莹. 殊异韦荣菌sahH基因的克隆、表达和纯化[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(4): 704-709.
[7]	张雪，陈萍，毕云枫，曲宁宁，刘琼，孙鑫泽. 木糖氧化产碱菌中亚硝酸盐还原酶基因的克隆与表达[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(4): 690-693.
[8]	贾晓辉，罗建民，刘亚平，尹婉宜，张丽红. SHIP和Caspase-3 mRNA在骨髓增生异常综合征患者骨髓组织中的表达及其临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 554-558.
[9]	贺梦子，赵银龙，刘晓冬，马淑梅，刘欣. 甲状腺乳头状癌组织中差异表达miRNA及其靶基因的筛选和预测[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(1): 99-103.
[10]	张士尧\|浦昀\|徐坤\|李金华\|原野\|鞠文\|李娟. 重组钩端螺旋体多抗原位点同源合成基因的表达及其抗原性鉴定[J]. J4, 2012, 38(3): 404-408.
[11]	伍贤军\|缪璇\|程秀\|王妍青\|辻一郎\|李晓萌. GFP-SUMO-3融合蛋白的重组及其在LNCaP细胞中的表达和定位[J]. J4, 2011, 37(6): 1024-1027.
[12]	孙玲,刘慧颖,李淑红\|宫鹏涛\|张西臣. 弓形虫GRA1基因的克隆与原核表达[J]. J4, 2011, 37(4): 631-635.
[13]	刘洁, 贾天军, 刘雪晴, 贾晓辉, 翟雪琼. 人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白激酶-2 C端基因的克隆与鉴定[J]. J4, 2011, 37(1): 51-55.
[14]	赵丽晶, 许多, 程宏, 梁作文, 鲁育铭, 韩向北, 郭亚雄, 赵丽娟, 董妍. 20(s)-原人参二醇对体外培养Siha细胞caspase-3表达激活的影响[J]. J4, 2011, 37(1): 26-29.
[15]	李智, 郎晓讴, 张绍军, 姜文华. Stat3和Stat5在分化型甲状腺癌组织中的表达及意义[J]. J4, 2010, 36(4): 708-712.