吉林大学学报(医学版) ›› 2022, Vol. 48 ›› Issue (2): 284-290.doi: 10.13481/j.1671-587X.20220203
王一涵,王奕丹,惠赫童,范馨元,王添琦,夏薇(),刘丽梅()
Yihan WANG,Yidan WANG,Hetong HUI,Xinyuan FAN,Tianqi WANG,Wei XIA(),Limei LIU()
摘要: 建立绿色荧光蛋白(GFP)标记的急性淋巴细胞白血病(ALL)移植瘤小鼠模型,研究ALL髓外浸润过程中血清游离DNA(cfDNA)特异基因甲基化的变化,为ALL髓外浸润监测提供理论和实验依据。 60只ICR小鼠随机分为对照组、实验15 d组和实验30 d组,每组20只。实验组小鼠通过尾静脉注射构建GFP标记ALL移植小鼠模型,流式细胞术检测白血病细胞髓外浸润情况。分别在建模后第15和30天时采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组小鼠血清中双加氧酶2(TET2)、DNA甲基转移酶3α(DNMT3a)、DNA甲基转移酶3β(DNMT3b)、Wnt家族成员5A(Wnt5A)及逆转座子长散布核元件-1(LINE-1) mRNA表达水平,重亚硫酸盐测序法(BSP)检测各组血清中Wnt5A和LINE-1启动子区甲基化水平。 实验15 d组和实验30 d组小鼠脾脏组织中均可见明显绿色荧光,且实验30 d组较实验15 d组荧光强度增强;实验30 d组小鼠脾脏质量高于对照组(P<0.05),脾肿大较为明显。流式细胞术检测,与对照组比较,实验15 d组和实验30 d组小鼠外周血细胞荧光强度均明显增强,且实验30 d组小鼠外周细胞血荧光强度较实验15 d组增强(P<0.05)。RT-qPCR法检测,与对照组比较,实验15 d组和实验30 d组小鼠血清中Wnt5A和TET2 mRNA表达水平均明显降低(P<0.05),LINE-1、DNMT3a和DNMT3b mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。BSP法检测,与对照组比较,实验15 d组和实验30 d组小鼠血清 LINE-1启动子区甲基化水平明显降低(P<0.05),在浸润过程中逐步呈现低甲基化;抑癌基因Wnt5A启动子区甲基化水平明显升高(P<0.05)。 ALL移植瘤小鼠模型于建模早期即出现髓外浸润,血清cfDNA中Wnt5A和LINE-1启动子区的异常甲基化直接影响其异常表达。cfDNA特异位点甲基化水平检测可为ALL早期诊断与治疗监测提供新的方法和策略。
中图分类号: