J4

• 技术交流 • 上一篇    下一篇

靶向人Ku70 mRNA反义核苷酸的优化设计与筛选

闫志风1,3,崔满华1,袁守军2   

  1. 1.吉林大学第二医院妇产科,吉林 长春 130041;2.军事医学科学院放射医学研究所,北京 100850;3.中国人民解放军总医院妇产科,北京 100853
  • 收稿日期:2006-12-30 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-11-28 发布日期:2007-11-28
  • 通讯作者: 崔满华

Design and selection of antisense nucleotide targeting on human Ku70 mRNA

  • Received:2006-12-30 Revised:1900-01-01 Online:2007-11-28 Published:2007-11-28

摘要: 目的:联合应用RNAdraw和Sfold软件设计并筛选低毒且高效抑制Hela细胞Ku70 mRNA表达的反义寡核苷酸。方法:从GenBank获得人Ku70 mRNA全序列,联合应用RNAdraw与Sfold软件,根据最小自由能原理设计多条20 nt的反义寡核苷酸,脂质体转染后MTT法检测其非序列特异性细胞毒性,选择毒性最小者并转染Hela细胞,RT-PCR检测转染前后Ku70 mRNA的表达水平并进行比较。结果:靶向Ku70 mRNA设计6条20 nt的反义寡核苷酸,其中NO.1 序列非特异性毒性最低,对Hela细胞的生长抑制率(50、100和200 nmol•L-1浓度组分别为4.8%、9.5%和10.2%)与脂质体组比较差异无显著性(P>0.05),用毒性最低序列转染Hela细胞后使Ku70 mRNA表达水平显著降低(P<0.01),条带强度和面积与未转染组比较分别下降81.6%和77.6%。结论:联合应用计算机软件RNAdraw和Sfold对设计反义核酸有较大的指导意义,能实现较高的命中率,设计的反义寡核苷酸能有效抑制Hela 细胞Ku70mRNA的表达。

关键词: 寡核苷酸类, 反义, Hela细胞, 逆转录聚合酶链反应

中图分类号: 

  • R73-3