人肝癌多药耐药细胞系BEL-7402/ADM的建立及耐药相关基因表达检测

doi:辽宁省科技厅自然科学基金资助课题

人肝癌多药耐药细胞系BEL-7402/ADM的建立及耐药相关基因表达检测

王宁¹，杨海山^1*，刘洁²，李玉³

1. 吉林大学中日联谊医院放射科，吉林长春130031；2.中国医科大学实验技术中心,辽宁沈阳110001；3. 沈阳军区总医院放射肿瘤介入治疗科,辽宁沈阳110015

收稿日期:2004-12-08 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-05-28 发布日期:2005-05-28
通讯作者: 杨海山

Establishment of a multidrug resistance cell line BEL-7402/ADM of human hepatic carcinoma and expression analysis of multidrug resistance-associated gene

WANG Ning¹, YANG Hai-shan^1*,LIU Jie², LI Yu³

1. Department of Radiology,China-Japan Union Hospital,Jilin University, Changchun 130031, China;2. Experimental Technology Center of Chinese Medical University, Shenyang 110015, China;3. Department of Radiology Therapy, General Hospital of Shenyang Military Region, Shenyang 110015, China

Received:2004-12-08 Revised:1900-01-01 Online:2005-05-28 Published:2005-05-28

摘要/Abstract

摘要： 目的：建立人肝癌多药耐药细胞系，研究其耐药特性及机制。方法：应用人肝癌细胞株BEL-7402，采用阿霉素（ADM）大剂量间歇诱导法，建立多药耐药细胞系BEL-7402/ADM。相差显微镜观察细胞，用MTT法检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性，采用流式细胞术检测该耐药细胞表面多药耐药基因(MDR)的表达产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)及谷胱甘肽硫转移系统(GSH／GST)的表达情况，应用RT-PCR检测MDR、MRP基因表达水平。结果：BEL-7402/ADM对多种抗癌药物产生耐药，对ADM的耐药性(半数抑制浓度，IC₅₀)提高了17.31倍。流式细胞仪分析发现（65.5±5.8）%的BEL-7402/ADM细胞表面P-gp 表达阳性，而对照细胞BEL-7402表达仅为（31.3±4.3）%；（32.4±3.5）%的BEL-7402/ADM细胞表面MRP表达阳性，而对照细胞BEL-7402表达仅为（23.4±3.1）%，二者差异有显著性(P<0.01)；BEL-7402/ADM和BEL-7402细胞的GSH／GST表达无明显变化（P>0.05）。RT-PCR检测发现BEL-7402/ADM中MDR及MRP mRNA高表达。结论：BEL-7402/ADM具有明确的多药耐药性，其多药耐药相关基因MDR及MRP mRNA表达升高。

关键词: 肿瘤细胞, 培养的, 表柔比星, 抗药性, 肿瘤

Abstract: Objective To establish a multidrug resistance cell line of human hepatic carcinoma and study the mechanism of multidrug resistance. Methods Human hepatocellular carcinoma cell line BEL-7402 was induced to multidrug resistance cell line BEL-7402/ADM by intermittent administration of high dose of adriamycin (ADM). The multidrug resistance was detected by using MTT assay. The expressions of mdr-1 gene-coded P-glycoportein (P-gp), multidrug resistance-associated protein (MRP), and GSH/GST were examined by flow cytometric assay. The expressions of MDR and MRP gene were also detected using RT-PCR in both BEL-7402/ADM and BEL-7402 cell lines. Results BEL-7402/ADM was resistant to many anti-tumor agents. The IC₅₀ of ADM was 17.31 times higher than that of BEL-7402. It′s expressions of P-gp and MRP were increased significantly to (65.5±5.8)% and (34.2±3.5)%， respectively, while those of BEL-7402 were only (31.3±4.3)% and (23.4±3.1)%, respectively. There was no difference of the GSH/GST expression between BEL-7402/ADM and BEL-7402 cells. The levels of MDR and MRP mRNA expression were relatively high in BEL-7402/ADM.　 Conclusion BEL-7402/ADM is a model with multidrug resistance and the levels of MDR and MRP mRNA expressions are higher in BEL-7402/ADM than those in BEL-7402.

Key words: tumor cells, cultured, epirubicin, drug resistance, neoplasms

中图分类号:

R73-3

王宁，杨海山，刘洁，李玉. 人肝癌多药耐药细胞系BEL-7402/ADM的建立及耐药相关基因表达检测[J]. J4, 2005, 31(3): 361-364.

WANG Ning, YANG Hai-shan,LIU Jie, LI Yu. Establishment of a multidrug resistance cell line BEL-7402/ADM of human hepatic carcinoma and expression analysis of multidrug resistance-associated gene[J]. J4, 2005, 31(3): 361-364.

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