目的: 将Egr1-TRAIL重组质粒转染人乳腺癌MCF-7细胞且加X线照射,探讨MCF-7细胞中死亡受体通路相关基因和蛋白表达的变化。方法: 将MCF-7细胞分为对照组、空质粒组、pEgr1-TRAIL质粒组、4.0GyX射线组、空质粒+4.0GyX射线组和pEgr1-TRAIL+4.0GyX射线组。Real-timePCR法检测各组MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6mRNA表达水平;Western blotting法检测各组MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6蛋白相对表达水平。结果: 经4.0GyX射线照射后4h,与对照组比较,各组MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6mRNA表达水平升高(P<0.01),8h达最高值,之后开始降低,到24h恢复到照射前水平;各组MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6mRNA表达由高到低的顺序为pEgr1-TRAIL+4.0GyX射线组> 空质粒+4.0GyX射线组> pEgr1-TRAIL质粒组> 空质粒组> 4.0GyX射线组> 对照组,其中pEgr1-TRAIL+4.0GyX射线组MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6mRNA表达水平明显高于其他各组(P<0.01)。MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6蛋白在照射后6h开始表达,12h达高峰,48h后细胞中DR4、caspase-9和caspase-6蛋白表达水平仍高于6h时蛋白表达水平。与对照组比较,其他各组MCF-7细胞中蛋白相对表达水平由高到低的顺序为pEgr1-TRAIL+4.0GyX射线组> 空质粒+4.0GyX射线组> 4.0GyX射线组> pEgr1-TRAIL质粒组> 空质粒组> 对照组,其中pEgr1-TRAIL+4.0GyX射线组MCF-7细胞中蛋白相对表达水平明显高于其他各组。结论: pEgr1-TRAIL重组质粒联合放疗对MCF-7细胞具有杀伤和诱导凋亡的作用,其效果优于单纯质粒或单纯照射。

目的: 构建爱泼斯坦-巴尔(EB)病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)基因与粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)融合基因(CSF2A)重组真核表达载体,探讨CSF2A融合蛋白对EBV阳性(EBV⁺)肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法: 根据重叠延伸原理,将LMP2A与GM-CSF在编码(Gly4Ser)3多肽的DNA基因片段连接下进行重组。采用DNA重组技术将融合基因片段连接于pIRES2-eGFP真核表达载体上,行酶切电泳分析和DNA测序鉴定重组质粒。设pIRES2-CSF2A重组质粒转染组为实验组,pIRES2-LMP2A质粒转染组和pIRES2-eGFP空质粒转染组为对照组,分别转染树突状细胞(DC)。采用RT-PCR和Western blotting法检测细胞中CSF2A基因和蛋白表达;MTT和Hochest法检测各组EBV⁺肿瘤细胞增殖抑制率和细胞凋亡形态学。结果: 酶切实验和序列测定,CSF2A融合基因正确插入pIRES2-eGFP质粒,并成功获得重组真核表达载体pIRES2-CSF2A。转染pIRES2-CSF2A至DC后,检测到CSF2A蛋白的表达。MTT法检测,pIRES2-CSF2A质粒转染组细胞增殖抑制率高于对照组(P<0.05或P<0.01),且呈时间依赖性;Hochest检测,细胞出现凋亡形态学改变并产生凋亡小体。pIRES2-CSF2A质粒转染组作用于EBV⁺肿瘤细胞48h时凋亡细胞明显增多。结论: 重组真核表达载体pIRES2-CSF2A可有效转染DC,并明显抑制EBV⁺CNE2细胞增殖且促进其凋亡。

目的: 探讨低氧诱导SD新生鼠嗅黏膜来源嗅鞘细胞(OECs)自噬的发生,分析自噬对细胞增殖能力的影响。方法: 采用酶消化法和改良的Nash差速贴壁法分离提纯培养SD新生鼠嗅黏膜来源OECs,利用免疫荧光法鉴定细胞属性和纯度。以低氧条件(氧浓度为2％)培养的SD新生鼠嗅黏膜来源OECs作为低氧处理组,以正常条件下培养的OECs作为对照组,采用自噬抑制剂3-MA处理后的OECs继续在低氧条件下培养作为3-MA低氧处理组。相差显微镜下观察各组细胞形态;Western blotting法检测对照组、4h低氧处理组和8h低氧处理组OECs中低氧诱导因子1α(HIF-1α)、自噬标志蛋白LC3Ⅰ/Ⅱ和自噬标志基因Beclin-1的蛋白表达水平;采用CCK-8法检测对照组、3-MA低氧处理组、低氧处理组和3-MA低氧处理组OECs的增殖能力。结果: 在对照组、低氧处理组和3-MA低氧处理组经分离提纯的OECs均呈梭形,表现为典型的双极、三极细胞形态,3组间无明显差异。OECs呈NGFRp75和GFAP阳性,纯度为87%;与对照组比较,低氧处理组OECs中HIF-1α表达水平升高(P<0.05),LC3Ⅰ/Ⅱ和Beclin-1表达水平升高(P<0.05);与低氧处理组比较,3-MA低氧处理组OECs增殖能力降低。结论: 低氧诱导的自噬可降低SD新生鼠嗅黏膜来源OECs的增殖能力。

目的: 观察利莫那班在大鼠颅脑外伤后不同时期对癫痫易感性的影响,探讨利莫那班能否干预外伤后癫痫的发生。方法: 105只大鼠分为模型处理组(45只)、模型组(45只)和空白对照组(15只)。模型处理组和模型组大鼠通过外侧液压打击法制备颅脑外伤模型,并在打击后2min分别腹腔注射利莫那班和生理盐水。上述2组大鼠继续均分为3个不同时间点(每个时间点15只),分别在液压打击后24h、1周和6周时腹腔注射戊四唑,空白对照组大鼠直接腹腔注射戊四唑。观察各组大鼠癫痫发生的潜伏期和出现全身强直阵挛性癫痫(GTCS)大鼠的数量。结果: 液压打击后6周时,模型组大鼠癫痫发生的潜伏期较打击后24h时和1周时缩短(F=12.93,P=0.023;F=11.80,P=0.016);模型处理组大鼠癫痫发生的潜伏期在打击后24h时较液压打击后1周时和6周时缩短(F=22.51,P=0.001;F=11.69,P=0.024)。空白对照组大鼠癫痫发生的潜伏期较模型组6周时(F=14.74,P=0.03)和模型处理组24h时(F=18.33,P=0.007)延长;打击后24h时,模型组大鼠癫痫发生的潜伏期较模型处理组延长(t=2.97,P=0.009);打击后6周时,模型组大鼠癫痫发生的潜伏期较模型处理组缩短(t=2.31,P=0.033)。在打击后6周时模型处理组发生GTCS大鼠的数量较模型组减少(χ²=6.67,P=0.033)。结论: 利莫那班在脑外伤后急性期时可增加癫痫易感性,而在慢性期时其可降低癫痫易感性。

目的: 确定人参糖蛋白的基本化学组成,探讨其对东莨菪碱所致小鼠学习和记忆障碍的影响。方法: 采用中空纤维超滤设备,对已除去皂苷的人参水提取物进行分离。采用苯酚硫酸法测定总糖含量,Lowry法测定蛋白含量,高效液相色谱法(HPLC)测定人参糖蛋白的纯度和相对分子质量,将人参制备成1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)衍生物后进行单糖组成分析。注射东莨菪碱建立小鼠记忆获得障碍模型,60只小鼠随机分为对照组(正常小鼠),模型组(训练后腹腔注射氢溴酸东莨菪碱2.5mg·kg^-1),阳性药组(训练前灌胃给药吡拉西坦9mg·kg^-1,30d),低、中、高剂量人参糖蛋白组(训练前灌胃给药,剂量为7.5、75.0、225.0mg·kg^-1),每组10只。水迷宫实验测定各组小鼠逃避潜伏期;跳台实验测定小鼠跨平台次数。结果: 人参糖蛋白总糖质量分数为58.41%,由7种单糖组成,其蛋白质量分数为19.93%,由17种氨基酸组成。人参糖蛋白相对分子质量分布在200~50000。Morris水迷宫实验,从第3天开始,与模型组比较,高剂量人参糖蛋白组小鼠平均逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),跨平台次数明显增加(P<0.01)。在对位训练中,与模型组比较,高剂量人参糖蛋白组小鼠60s内在平台所在象限s的时间明显延长(P<0.01),从第2天起,与模型组比较,低、中和高剂量人参糖蛋白组小鼠平均逃避潜伏期明显缩短(P<0.05)。在跳台实验中,与模型组比较,低、中和高剂量人参糖蛋白组小鼠3min内的错误次数明显减少(P<0.05),中剂量人参糖蛋白组小鼠停留在平台上的潜伏期明显延长(P<0.05)。结论: 人参糖蛋白具有提高小鼠记忆能力的作用。

目的: 观察塞来昔布联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,探讨环氧化酶2(Cox-2)抑制剂与化疗药物协同作用的可能机制。方法: 将MCF-7细胞分为空白对照组(不含药物作用的培养基)、塞来昔布组(含不同浓度塞来昔布的培养基)、紫杉醇组(含不同浓度紫杉醇的培养基)和塞来昔布联合紫杉醇组(含不同浓度塞来昔布和不同浓度紫杉醇的培养基)。Hoechst 33258染色观察各组MCF-7细胞凋亡形态;MTT法检测各组MCF-7细胞存活率;流式细胞术检测各组MCF-7细胞周期分布和细胞凋亡率;Western blotting法检测各组MCF-7细胞中B淋巴细胞瘤2(bcl-2)、细胞外调节蛋白激酶2(ERK2)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)蛋白的表达量。结果: Hoechst 33258染色,与空白对照组比较,塞来昔布组和紫杉醇组MCF-7凋亡细胞数增多,塞来昔布联合紫杉醇组MCF-7凋亡细胞最多,并随塞来昔布浓度增加而增加。MTT法检测,塞来昔布组和紫杉醇组MCF-7细胞存活率均随药物作用时间的延长而降低;而在相同时间段内,50mg·L^-1塞来昔布与30μg·L^-1紫杉醇联合应用组MCF-7细胞存活率低于单独使用两药时的细胞存活率(P<0.05)。流式细胞术检测,塞来昔布组细胞阻滞于G₀/G₁期,紫杉醇组细胞阻滞于G₂/M期;与空白对照组比较,塞来昔布联合紫杉醇组细胞周期分布改变最明显,在G₀/G₁期及G₂/M期的细胞比例均有明显升高,S期细胞比例下降。AnnexinⅤ/PI双染,药物刺激细胞6h后,塞来昔布组和紫杉醇组细胞早期凋亡率均高于空白对照组(P<0.05),塞来昔布联合紫杉醇组细胞早期凋亡率高于其他组(P<0.05)。Western blotting法检测,与空白对照组比较,塞来昔布组、紫杉醇组和塞来昔布联合紫杉醇组MCF-7细胞中bcl-2蛋白和p-ERK蛋白表达量均下调,塞来昔布联合紫杉醇组下调最明显;而ERK2蛋白表达量组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论: 塞来昔布和紫杉醇在促乳腺癌MCF-7细胞凋亡方面有协同作用,其机制可能与下调bcl-2和p-ERK蛋白表达水平有关。

目的: 构建干扰素凋节因子5(IRF5)慢病毒表达载体LV11-cmv-neo-IRF5并转染巨噬细胞RAW264.7,观察IRF5巨噬细胞RAW264.7中的表达。方法: 采用基因重组技术,将PCR技术钓取的目的基因IRF5片段克隆至线性化慢病毒表达载体LV11中,重组载体经PCR、双酶切和测序鉴定构建成功后,采用脂质体转染技术将表达质粒和包装质粒共转染293FT细胞,获得携带IRF5基因的重组慢病毒;收集病毒上清液感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,用G418将非浸染的细胞致死,获得纯净的浸染细胞,即RAW264.7-IRF5细胞(实验组),并将RAW264.7-NC细胞作为对照(对照组)。分别采用RT-qPCR和Western blotting法检测2组细胞中IRF5mRNA和蛋白的表达水平。结果: 重组慢病毒质粒LV11-cmv-neo-IRF5经PCR和酶切法鉴定构建成功;病毒上清液感染RAW264.7细胞并经G418筛选获得阳性细胞;RT-qPCR法检测,与对照组比较,实验组细胞中IRF5mRNA表达水平升高(P<0.001);Western blotting法检测,实验组细胞中IRF5蛋白的表达水平明显高于对照组。结论: 成功构建携带IRF5基因的慢病毒表达载体LV11-cmv-neo-IRF5,IRF5基因在巨噬细胞RAW264.7中稳定表达。

目的: 探讨厄洛替尼对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞产生的炎症反应和小鼠急性肺损伤(ALI)的影响,阐明其作用机制。方法: 原代培养的小鼠骨髓来源的巨噬细胞随机分为对照组、厄洛替尼组、LPS组和LPS+厄洛替尼组。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组巨噬细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;Western blotting法检测各组巨噬细胞中ERK1/2和p38磷酸化水平。16只C57BL/6小鼠随机分为对照组(生理盐水灌胃3d,腹腔注射生理盐水1次)、厄洛替尼组(45mg·kg^-1厄洛替尼预处理3d,腹腔注射生理盐水1次)、LPS组(生理盐水灌胃3d,腹腔注射5mg·kg^-1LPS)和LPS+厄洛替尼组(45mg·kg^-1厄洛替尼连续3d灌胃,腹腔注射5mg·kg^-1LPS)。ELISA法检测各组小鼠血清中TNF-α的表达水平;Western blotting法检测各组小鼠肺组织中ERK1/2和p38磷酸化水平;HE染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现。结果: 与对照组比较,厄洛替尼组巨噬细胞和小鼠血清中TNF-α水平、ERK1/2和p38蛋白磷酸化水平差异无统计学义(P>0.05),小鼠肺组织形态无明显改变;与厄洛替尼组比较,LPS组巨噬细胞和小鼠血清中TNF-α水平明显升高(P<0.05),巨噬细胞和肺组织中ERK1/2和p38蛋白磷酸化水平明显升高(P<0.05),小鼠肺组织出现ALI改变;与LPS组比较,LPS+厄洛替尼组巨噬细胞和小鼠血清中TNF-α表达水平明显降低(P<0.05),巨噬细胞和肺组织中ERK1/2和p38蛋白磷酸化水平降低(P<0.05),小鼠肺组织ALI病理状态改善。结论: 厄洛替尼可以抑制巨噬细胞炎症通路蛋白ERK1/2和p38的磷酸化水平及炎症因子TNF-α的生成,降低ALI小鼠的全身炎症反应,在一定程度上对ALI有保护作用。

目的: 探讨白细胞介素17(IL-17)对破骨细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达水平的影响,为研究IL-17在正畸力致牙根吸收过程中的作用提供依据。方法: 培养小鼠单核/巨噬系细胞RAW264.7,将细胞分为实验组和对照组,实验组细胞培养液中加入梯度浓度0.1、1.0、10.0和100.0μg·L^-1IL-17,作为0.1、1.0、10.0和100.0μg·L^-1IL-17组,对照组细胞培养液中不加入IL-17。对各组RAW264.7细胞进行破骨细胞诱导,诱导第5天时采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定破骨细胞诱导成功。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测破骨细胞诱导第5天时各组RAW264.7细胞培养液中MMP-9表达水平;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测破骨细胞诱导第5天时各组RAW264.7细胞培养液中MMP-9mRNA表达水平。结果: TRAP染色,RAW264.7细胞诱导第5天时可见TRAP染色阳性细胞,体积大,多核(细胞核≥3个)。ELISA和PT-PCR法检测,经破骨细胞诱导第5天时,与对照组比较,1.0、10.0和100.0μg·L^-1IL-17组RAW264.7细胞培养液中MMP-9和MMP-9mRNA表达水平升高(P<0.05);与1.0μg·L^-1IL-17组比较;10.0和100.0μg·L^-1IL-17组RAW264.7细胞培养液中MMP-9和MMP-9mRNA表达水平升高(P<0.05);与10.0μg·L^-1IL-17组比较,100μg·L^-1IL-17组RAW264.7细胞培养液中MMP-9和MMP-9mRNA表达水平升高(P<0.05)。结论: IL-17可以促进破骨细胞中MMP-9表达,且其促进作用随着IL-17浓度的升高而增强。

目的: 研究力达霉素(LDM)对人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其机制。方法: 选取处于对数生长期的人CMLK562细胞,采用不同浓度(0.01、0.10和1.00nmol·L^-1)LDM处理48h,作为0.01、0.10和1.00nmol·L^-1LDM组,不加药物的正常细胞为对照组。台盼蓝染色观察各组K562细胞生长抑制率,MTT法检测细胞存活率,吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法观察凋亡细胞的形态表现,AnnexinⅤ-FITC/PI双染结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞中caspase-3和caspase-8蛋白相对表达量。结果: 台盼蓝染色,LDM对K562细胞增殖有一定的抑制作用,各浓度LDM组细胞生长抑制率均高于对照组(P<0.05);MTT法检测,随LDM作用浓度的升高,细胞存活率下降,LDM对K562细胞作用的半数抑制浓度(IC₅₀)为(0.1±3.2)nmol·L^-1。AO/EB染色,荧光显微镜下观察到LDM能够引起细胞发生凋亡(胞质呈芽状突起,胞核碎裂成点状)。流式细胞术检测,各浓度LDM组K562细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05)。Western blotting法检测,0.10和1.00nmol·L^-1LDM组K562细胞中caspase-8和caspase-3蛋白相对表达量明显高于对照组(P<0.01)。0.01nmol·L^-1LDM组K562细胞中caspase-8和caspase-3蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论: LDM能够有效抑制K562细胞增殖,低浓度LDM可能通过上调细胞中caspase-8和caspase-3表达诱导K562细胞发生凋亡。

目的: 探讨外侧缰核(LHb)中5-羟色胺2C(5-HT_2C)受体在调节帕金森病(PD)大鼠相关焦虑行为中的作用,阐明PD相关焦虑行为的神经机制。方法: 将126只大鼠随机分为假手术组(n=63)和黑质致密部(SNc)损毁组(n=63)。采用行为学方法观察2组大鼠在旷场实验中的中央区停留时间百分比、高架十字迷宫实验(EPM)中的开放臂进入次数百分比和开放臂停留时间百分比;采用高效液相色谱-电化学检测法观察大鼠边缘相关脑区中单胺类递质水平;采用组织学和免疫组织化学染色法确认套管位置及SNc损毁后多巴胺(DA)神经元的缺失程度。结果: 与假手术组比较,SNc损毁组大鼠中央区停留时间百分比(F_1,72=36.678,P<0.001)、开放臂进入次数百分比(F_1,72=59.077,P<0.001)和开放臂停留时间百分比(F_1,72=84.245,P<0.001)均明显降低,且内侧前额叶皮层(mPFC)(P<0.01)、杏仁核(P<0.01)和海马(P<0.05)中DA水平均明显下降;LHb中局部注射5-HT_2C受体激动剂Ro60-0175后,与未加入Ro60-0175时比较,2组大鼠中央区停留时间百分比(P<0.05或P<0.01)、开放臂进入次数百分比(P<0.05或P<0.01)和开放臂停留时间百分比(P<0.05或P<0.01)均明显降低;且mPFC、杏仁核和海马中3种单胺类递质DA、5-HT和去甲肾上腺素(NA)水平均不同程度下降。在mPFC,2组大鼠给予Ro60-0175后,3种递质水平均明显降低(P<0.05或P<0.01);在杏仁核,给予Ro60-0175后,除5-HT水平无明显变化外,其余2种递质水平明显下降(P<0.05或P<0.01);在海马,给予Ro60-0175后,除假手术组大鼠NA水平无变化外,其余均明显下降(P<0.05或P<0.01)。组织学确认行为学实验中使用大鼠套管均位于LHb上方1mm;免疫组织化学检测,SNc损毁组大鼠损毁侧SNc中DA神经元完全缺失,且腹侧被盖区DA神经元较未损毁侧明显减少(P<0.001)。结论: LHb中5-HT_2C受体的激活可诱发或增强大鼠的焦虑行为,其机制与相关脑区中单胺类递质水平变化有关联。

目的: 设计并构建α-catulin-shRNA表达载体,建立沉默α-catulin基因的人舌鳞状细胞癌(TSCC),TSCCA细胞模型并观察其沉默效率,为TSCC的基因治疗提供依据。方法: TSCCA细胞分为转染组(转染sh-catu1、sh-catu2、sh-catu3和sh-catu4质粒)、阴性对照组(转染sh-nc质粒)及空白对照组(未处理)。根据GenBank上获取的α-catulinmRNA序列,设计并合成4条α-catulin-shRNA质粒表达载体。测序鉴定后,经脂质体介导,将3组质粒分别转染至体外培养的人TSCCA细胞中,荧光显微镜观察各组TSCCA细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达;采用RT-PCR和Western blotting法检测TSCCA细胞中α-catulin基因的mRNA及其蛋白相对表达水平及沉默效率。结果: 测序鉴定表明成功构建了编码α-catulin的shRNA质粒表达载体sh-catu1、sh-catu2、sh-catu3和sh-catu4;转染TSCCA细胞后,荧光显微镜下观察到表达载体在细胞中成功表达。RT-PCR检测,与空白对照组比较,转染组细胞中α-catulinmRNA表达水平降低(P<0.05),沉默效率升高(P<0.05);与阴性对照组比较,转染组细胞中α-catulinmRNA相对表达水平降低(P<0.05),沉默效率升高(P<0.05)。Western blotting法检测,与空白对照组比较,转染组细胞中α-catulin蛋白相对表达水平降低(P<0.05),沉默效率升高(P<0.05);与阴性对照组比较,转染组细胞中α-catulin蛋白相对表达水平降低(P<0.05),沉默效率升高(P<0.05)。结论: 成功构建α-catulin-shRNA重组质粒载体,建立了沉默α-catulin基因的人TSCC的TSCCA细胞模型,为研究α-catulin基因在TSCC发病机制中的作用提供了细胞模型。

目的: 探讨α-catulin基因对人舌鳞状细胞癌(TSCC)TSCCA细胞增殖和凋亡的影响,阐明α-catulin在TSCCA细胞生物学行为中的作用。方法: 取对数生长期的TSCCA细胞,分为α-catulin-siRNA转染组、空质粒转染组和空白对照组。RT-PCR法检测各组TSCCA细胞中α-catulinmRNA相对表达水平;Western blotting法检测各组TSCCA细胞中α-catulin蛋白的相对表达水平,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测各组TSCCA细胞凋亡率。结果: RT-PCR检测,与空质粒转染组和空白对照组比较,α-catulin-siRNA转染组TSCCA细胞中α-catulinmRNA相对表达水平降低(P<0.01),且随着时间的相对延长,α-catulinmRNA相对表达水平逐渐降低,72h时其相对表达水平低于24和48h时(P<0.01)。Western blotting法检测,与空质粒转染组和空白对照组比较,α-catulin-siRNA转染组TSCCA细胞中α-catulin蛋白相对表达水平降低(P<0.05)。MTT法检测,与空质粒转染组和空白对照组比较,α-catulin-siRNA转染组TSCCA细胞生长抑制率升高(P<0.001)。流式细胞术检测,与空质粒对照组和空白对照组比较,α-catulin-siRNA转染组TSCCA细胞凋亡率升高(P<0.001)。结论: 特异性沉默α-catulin基因的表达可抑制TSCC的TSCCA细胞的增殖,促进其凋亡。

目的: 研究低分子壳聚糖(LMCTS)对缺氧/复氧(H/R)损伤大鼠心肌细胞中氯离子通道3(ClC-3)表达的影响,探讨LMCTS对大鼠心肌细胞H/R损伤的保护作用及其与ClC-3通道的关系。方法: 原代培养的大鼠心肌细胞分为空白对照组,模型组和200、400及600mg·L^-1LMCTS组。除空白对照组细胞不做任何处理、正常培养外,其余各组细胞均进行低压缺氧处理1h,之后在37℃条件下复氧24h,构建心肌细胞H/R损伤模型,其中模型组不加药物,正常培养;而不同浓度LMCTS组细胞在构建模型前分别给予200、400和600mg·L^-1LMCTS。采用RT-PCR法检测大鼠心肌细胞中ClC-3mRNA的表达水平;Western blotting法和免疫荧光法检测大鼠心肌细胞中ClC-3蛋白的相对表达水平。结果: RT-PCR法和Western blotting法检测,与空白对照组比较,模型组大鼠心肌细胞中ClC-3mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,不同浓度LMCTS组大鼠心肌细胞中ClC-3mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),其中以600mg·L^-1LMCTS组心肌细胞中ClC-3mRNA和蛋白表达水平最低。免疫荧光检测,与空白对照组比较,模型组大鼠心肌细胞荧光强度明显增强;与模型组比较,不同浓度LMCTS组大鼠心肌细胞荧光强度明显降低。结论: 大鼠心肌细胞中ClC-3表达水平与心肌细胞H/R损伤有关联,LMCTS可降低ClC-3表达水平,其可能通过降低ClC-3表达水平对大鼠心肌细胞H/R损伤发挥保护作用。

目的: 皮下注射硝酸甘油(NTG)制备大鼠偏头痛模型,探讨清脑止痛胶囊对大鼠脑组织和血浆中炎性细胞因子表达的影响及其意义。方法: 90只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,低(0.35g·kg^-1)、中(0.70g·kg^-1)、高(1.40g·kg^-1)剂量清脑止痛胶囊组和阳性药(正天丸1.8g·kg^-1)组,每组15只。连续给药7d后,皮下注射NTG复制偏头痛大鼠模型,观察注射NTG180min内大鼠的挠头次数,4h后取血浆和中脑组织。免疫组织化学法和Western blotting法检测大鼠中脑组织中核因子kappaB(NF-κB)和环氧合酶2(COX-2)表达水平,酶联免疫吸附法检测大鼠血浆和中脑组织中前列环素E₂(PGE₂)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果: 与空白组比较,模型组大鼠挠头次数明显增加(P<0.01),中脑组织中NF-κB和COX-2表达水平明显升高(P<0.01),血浆和中脑组织中PGE2、IL-1β和TNF-α水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,中、高剂量清脑止痛胶囊组和阳性药组大鼠挠头次数明显减少(P<0.05或P<0.01),中脑组织中NF-κB和COX-2表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),血浆中PGE2、IL-1β和TNF-α水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论: 清脑止痛胶囊可以缓解大鼠偏头痛症状,对偏头痛有一定的预防作用,其机制可能与调节神经源性炎症有关联。

目的: 探讨肿瘤细胞癌基因表皮生长因子受体(EGFR)L858R型突变与肺腺癌恶性转移患者癌细胞中白细胞介素6(IL-6)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的关系及其意义。方法: 将含EGFRL858R全长基因质粒的载体转染EGFR野生型肺腺癌细胞系H460(EGFRL858R-H460组),空载体转染H460细胞作为对照组(Vec-H460组),QRT-PCR法检测2组细胞中IL-6和VEGFmRNA表达水平。将含IL-6siRNA的载体转染带有EGFRL858R型突变的细胞系H1975(IL-6siH1975组),转染空载体的H1975细胞作为对照组(Vec-H1975组),QRT-PCR法检测2组细胞中IL-6和VEGFmRNA表达水平,Western blotting法检测2组细胞中VEGF蛋白表达水平。结果: 与Vec-H460组比较,EGFRL858R-H460组细胞中IL-6和VEGFmRNA表达水平明显升高(P<0.01);与Vec-H1975组比较,IL-6siH1975组细胞组IL-6和VEGFmRNA表达水平明显降低(P<0.01),VEGF蛋白表达强度明显降低。结论: 肺腺癌细胞系中EGFRL858R型突变可升高肺腺癌患者癌细胞中IL-6和VEGFmRNA表达水平,其中IL-6mRNA水平升高可能是VEGFmRNA表达水平升高的原因,这些变化可能是EGFRL858R型突变参与肺腺癌恶性转移进程的途径之一。

目的: 建立人舌鳞状细胞癌(舌鳞癌)顺铂耐药细胞株CAL-27/DDP,探讨其顺铂耐药机制。方法: 采用顺铂浓度梯度法对人舌鳞癌CAL-27细胞株进行诱导,将细胞分为CAL-27组和CAL-27/DDP组。CAL-27组细胞株用普通培养液培养,CAL-27/DDP组细胞株用含有不同浓度顺铂的培养液培养,经过12个月的诱导形成生长良好的耐药细胞系株CAL-27/DDP。采用倒置显微镜观察细胞株形态表现;MTT法检测细胞株的半数抑制浓度(IC₅₀)和耐药指数(RI);流式细胞术检测细胞株的细胞周期;RT-PCR法检测细胞株中多药耐药基因(MDR1)mRNA的相对表达水平;Western blotting法检测细胞株P糖蛋白(P-gp)的相对表达水平。结果: CAL-27/DDP组细胞株在一段时间内能在普通培养液中稳定生长,并维持其形态和耐药性状。与CAL-27组细胞株比较,CAL-27/DDP细胞略增大,细胞中出现颗粒和"空泡"样变,胞浆丰富,倍增时间延长(P<0.01),RI为18.09±0.30。与CAL-27组比较,CAL-27/DDP组G₁期和G₂期细胞比例减少,S期细胞比例升高,CAL-27/DDP组细胞株中MDR1mRNA和P-gp相对表达水平升高(P<0.01)。结论: 本研究建立了人舌鳞癌顺铂耐药细胞株CAL-27/DDP,其耐药机制与CAL-27/DDP细胞株中MDR1和P-gp的表达水平上调有关联。

目的: 探讨正畸临床常用的3种粘接剂在干燥和人工唾液条件下对金属托槽的粘结强度,评价其粘接性能,为临床应用提供参考。方法: 收集60颗因正畸治疗拔除的前磨牙,随机分为3M光固化粘接剂组、3M化学固化粘接剂组和杭州西湖牙釉质粘接剂组,每组20颗,每组分为2个亚组,每组10颗。A1组为干燥条件+金属托槽+3M光固化粘接剂,A2组为人工唾液条件+金属托槽+3M光固化粘接剂,B1组为干燥条件+金属托槽+3M化学固化粘接剂,B2组为人工唾液条件+金属托槽+3M化学固化粘接剂,C1组为干燥条件+金属托槽+杭州西湖粘接剂,C2组为人工唾液条件+金属托槽+杭州西湖粘接剂。采用电子万能力学实验机测定各组粘接剂与金属托槽在干燥及人工唾液条件下的抗剪切强度;显微镜下观察粘接金属托槽的离体牙表面粘接剂残留指数(ARI);扫描电镜观察去除金属托槽后离体牙牙釉质表面形态表现。结果: 在干燥和人工唾液条件下,3M光固化粘接剂组粘接剂的抗剪切强度高于3M化学固化粘接剂组(P>0.05)和杭州西湖粘接剂组(P<0.05)。在干燥条件下,3M化学固化组粘接剂的抗剪切强度高于人工唾液条件(P<0.05)。在人工唾液环境下,3种粘接剂的抗剪切强度比较差异无统计学意义(P>0.05)。3M光固化粘接剂组离体牙的ARI均低于其他2组。扫描电镜下,3M光固化粘接剂组离体牙牙釉质表面较其他组规则且平坦,无明显裂痕和釉质剥脱。结论: 在干燥和人工唾液条件下,3种粘接剂的粘接强度均能达到正畸临床要求,其中3M光固化粘接剂的粘接性能优于其他2种粘接剂。

目的: 比较类金刚石涂层(DLC)镍钛丝和未涂层镍钛丝在不同pH值和氟离子(F^-)浓度的人工唾液中的耐腐蚀性能,为DLC在正畸治疗中的应用提供依据。方法: 采用射频磁控溅射技术在镍钛丝上制备DLC,激光拉曼光谱(Raman)对镍钛丝进行表征;DLC镍钛丝作为实验组,未涂层镍钛丝作为对照组,2组镍钛丝分别浸泡在4组不同F^-浓度和pH值的人工唾液中,即pH7+0%F^-组、pH7+0.2%F^-组、pH7+0.5%F^-组和pH5+0.5%F^-组。采用电化学工作站经典三电极体系绘制动电位极化(Tafel)曲线,并测定2组镍钛丝的自腐蚀电位(Ecorr)和腐蚀电流密度(Icorr);扫描电镜(SEM)观察2组镍钛丝经人工唾液腐蚀前后表面形态学。结果: Raman显示D峰和G峰,表明镍钛丝表面已镀有DLC。电化学腐蚀实验,与pH7+0%F^-组比较,pH7+0.2%F^-组DLC镍钛丝的Ecorr降低(P<0.05),Icorr升高(P<0.05);未涂层镍钛丝的Ecorr降低(P<0.05),Icorr升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。与pH7+0.5%F^-组比较,pH5+0.5%F^-组DLC镍钛丝和未涂层镍钛丝的Ecorr降低(P<0.05),Icorr升高(P<0.05)。在同组人工唾液中,实验组镍钛丝的Ecorr均高于对照组(P<0.05),Icorr均低于对照组(P<0.05)。实验组和对照组镍钛丝的Tafel曲线随F^-浓度增加和pH值降低依次向左偏移,提示耐腐蚀效果降低;SEM观察到腐蚀后镍钛丝表面有点状腐蚀,且对照组镍钛丝表面点状腐蚀多于实验组。结论: DLC镍钛丝耐腐蚀性较未涂层镍钛丝有所增强,但pH值降低和F^-浓度增大均会降低其耐腐蚀性。

目的: 探讨孕妇血浆和非孕妇血浆游离DNA中常用内参基因的拷贝数稳定性,为孕妇血浆游离DNA的定量研究提供参考。方法: 选择孕龄为12周左右的健康孕妇及健康未孕女性各18名,取外周静脉血并提取血浆DNA,将DNA样本分为孕妇与非孕妇整体组、孕妇组、非孕妇组、母体与胎儿整体组、母源DNA组和胎源DNA组,选取β-珠蛋白(HBB)、端粒酶(TERT)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、白蛋白(ALB)、β-肌动蛋白(ACTB)和T细胞受体γ(TRG)为内参基因。采用实时荧光定量PCR(qPCR)法分析血浆DNA中内参基因Ct值,分别采用3款统计学软件geNorm、NormFinder和BestKeeper比较6种内参基因在各组样本中的拷贝数稳定性。结果: 1qPCR法,6种内参基因的所有PCR产物均特异性扩增。各组内参基因Ct值比较差异均无统计学意义(P>0.05)。各组ACTB的Ct值最低,HBB次之,即血浆DNA中ACTB和HBB拷贝数最高。2按照geNorm软件计算结果基因稳定值(M)由高到低的顺序、NormFinder软件计算结果含量稳定性由高到低的顺序、BestKeeper软件计算结果相关系数(R)由高到低的顺序,在各组样本中将6种内参基因按照其拷贝数稳定性由高到低进行排序。综合分析3种软件的分析结果,在孕妇与非孕妇整体组、孕妇组、非孕妇组、母体与胎儿整体组、母源DNA组和胎源DNA组中,拷贝数稳定性最高的内参基因分别为TERT、ACTB、ALB、HBB、HBB及HBB。3母体与胎儿整体组、母源DNA组、母源DNA组和胎源DNA组内参基因的Ct值比较差异均有统计学意义(F=114.84,P<0.05)。结论: 当采用qPCR法对来自于孕妇与非孕妇整体、孕妇、非孕妇、母体与胎儿整体、母源DNA和胎源DNA的血浆游离DNA进行定量分析时,推荐分别选择TERT、ACTB、ALB、HBB、HBB及HBB作为校正内参基因。

目的: 检测基底细胞样乳腺癌(BLBC)患者乳腺癌组织及配对癌旁正常乳腺组织中异黏蛋白基因(MTDH)与基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达,探讨二者之间的关系。方法: 采用免疫组织化学SP法检测60例BLBC患者癌组织及配对癌旁正常乳腺组织中MTDH和MMP-9蛋白的表达情况;Spearman相关分析法分析二者阳性表达率的相关性。结果: BLBC组织中MTDH和MMP-9阳性表达率均明显高于癌旁配对正常乳腺组织中MTDH和MMP-9的阳性表达率(P<0.05),且其表达与BLBC患者的淋巴结转移、临床分期有关联(P<0.05);有淋巴结转移者癌组织中MTDH和MMP-9阳性表达率高于无淋巴结转移者(χ²=6.89,P<0.05;χ²=15.22,P<0.01);Ⅲ+Ⅳ期BLBC患者癌组织中MTDH和MMP-9蛋白阳性表达率高于Ⅰ+Ⅱ期者(χ²=6.431,P<0.05;χ²=8.014,P<0.05)。BLBC患者癌组织中MTDH和MMP-9的表达呈正相关关系(r=0.531,P<0.01)。结论: BLBC患者癌组织中MTDH与MMP-9蛋白表达有相关性,二者在BLBC形成和进展过程中可能起重要作用。

目的: 探讨多肿瘤标志物蛋白芯片技术(C12芯片法)在老年人健康体检中的应用,并量化分析不同年龄和性别体检者肿瘤标志物检测值和阳性率的差别,阐明其临床意义。方法: 选择健康体检者9654人,按年龄分为对照组(40~59岁)、老年组(60~79岁)和高龄组(80岁及以上)。采用多肿瘤标志物芯片检测系统检测各组体检者甲胎蛋白(AFP)、糖链抗原15-3(CA15-3)、糖链抗原19-9(CA19-9)、糖链抗原125(CA125)、糖链抗原242(CA242)、癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、铁蛋白(ferritin)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、人生长激素(HGH)、前列腺特异性抗原(PSA)和游离PSA(f-PSA)共12项肿瘤标志物水平,以超出正常范围为阳性结果,分析3组体检者样本的肿瘤标志物检测值和阳性率。结果: 1体检者9654人中共检出阳性结果665人,阳性检出率为6.89%,其中32人经内窥镜、病理学和影像学检查确诊为早期或中期肿瘤,肿瘤检出率为0.33％。2男女体检者肿瘤标志物阳性率不同,男性前5位依次为f-PSA、PSA、CEA、CA19-9和NSE;女性前5位依次为CA19-9、CA125、CEA、NSE和CA242。3CA19-9、CA242、CEA、NSE、PSA和f-PSA阳性率分布呈随年龄增长而升高的趋势(P<0.01)。4各组体检者AFP、CA125、CA19-9、CA242、CEA、HGH、NSE和PSA检测值随着年龄增长而升高,高龄体检者上述指标高于老年组和对照组(P<0.01),老年组上述指标高于对照组(P<0.01)。结论: C12芯片中CA19-9、CEA、NSE、PSA和f-PSA等肿瘤标志物在老年人、尤其是高龄老年人的健康筛查中阳性率高,有助于发现早期肿瘤。

目的: 探讨体质对肺炎心衰患儿血清肌钙蛋白I(cTnI)水平的影响,并评估其临床价值。方法: 选择1~3岁肺炎心衰患儿116例作为观察组,并选择同期行正常体检的1~3岁儿童98人作为对照组。测量观察对象的身高、体质量,根据幼儿Kaup指数将2组研究对象为正常组(Kaup指数为13.5~18.0kg·cm^-2)、优良组(Kaup指数为18.1~20.0kg·cm^-2)及肥胖组(Kaup指数>20.0kg·cm^-2)。测定各组受试者血清cTnI和超敏C反应蛋白(hsCRP)水平,并分析血清cTnI和hsCRP水平与Kaup指数的相关性。结果: 观察组患儿血清cTnI和hsCRP水平均高于对照组(P=0.000),血清cTnI和hsCRP水平随Kaup指数水平升高而逐渐升高,血清cTnI和hsCRP水平与Kaup指数水平呈正相关关系(r=0.555,P=0.000;r=0.705,P=0.000),血清cTnI与hsCRP水平亦呈正相关关系(r=0.407,P=0.000)。结论: 体质状况明显影响肺炎心衰患儿血清cTnI水平,Kaup指数高者其血清cTnI和hsCRP水平亦高,因此单纯依赖cTnI水平检查不利于肥胖肺炎患儿心衰的诊断和预后判断。

目的: 比较FOS样抗原2(FOSL2)mRNA在新疆维吾尔族2型糖尿病(T2DM)患者及正常糖代谢(NGT)人群中的表达水平,并分析其表达与研究对象临床生化指标的相关性。方法: 收集新疆喀什地区维吾尔族T2DM(T2DM组)患者50例和NGT者(NGT组)50人,测量并记录其一般临床指标,如性别、年龄、脉搏、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、腰臀比(WHR)、体质量指数(BMI),记录T2DM病程(根据WHO糖尿病诊断标准确诊),采集血液标本。生化分析仪测定2组研究对象的空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)等糖脂代谢指标;全自动电化学发光分析仪及配套试剂测定空腹胰岛素(FINS)水平;高压液相色谱法(HPLC)测定糖化血红蛋白(HbAlc)水平;RT-PCR法测定血液中FOSL2mRNA表达水平。结果: 与NGT组比较,T2DM组患者的BMI(t=-4.62,P=0.00)、FPG(t=-9.56,P=0.00)、HbAlc(t=-7.83,P=0.00)、TC(t=-7.86,P=0.00)、TG(t=-3.89,P=0.00)和LDL-C(t=-2.41,P=0.01)水平升高。而HDL-C水平和FOSL2mRNA表达水平(t=-2.58,P=0.01;t=-12.174,P=0.000)降低。与NGT组比较,T2DM组患者的FINS(t=-2.42,P=0.02)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)(t=-6.46,P=0.00)、胰岛β细胞功能指数(In-HOMA-β)(t=-5.58,P=0.00)升高,胰岛素敏感指数(In-ISI)(t=6.80,P=0.00)降低。T2DM患者白细胞中FOSL2mRNA表达水平与WHR(r=-0.415,P=0.008)、FPG(r=-0.620,P=0.000)、HbAlc(r=-0.681,P=0.000)、HOMA-IR(r=-0.504,P=0.001)、TC(r=-0.582,P=0.000)、TG(r=-0.342,P=0.031)和HDL-C(r=-0.323,P=0.042)、T2DM病程(r=-0.733,P=0.000)呈负相关关系,与In-HOMA-β(r=0.638,P=0.000)呈正相关关系。回归分析,T2DM病程(β=-0.056,P=0.002)、In-HOMA-β(β=0.342,P=0.001)和TC(β=-0.219,P=0.003)为FOSL2基因表达水平的影响因素。结论: FOSL2mRNA表达水平下调参与新疆维吾尔族人群胰岛素抵抗和T2DM发生发展,TC是维吾尔族T2DM患者FOSL2基因表达水平下调的重要影响因素。

目的: 分析慢性乙型病毒性肝炎(CHB)、慢加急性/亚急性重型肝炎(重型肝炎)、乙肝肝硬化和乙型肝炎病毒(HBV)相关性原发性肝癌(HCC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中白细胞介素22(IL-22)mRNA的表达水平及其可能的临床意义。方法: 收集20名健康对照者(健康对照组)、33例CHB中度患者(CHB中度组)、21例CHB重度患者(CHB重度组)、16例重型肝炎患者(重型肝炎组)、16例乙肝肝硬化患者(肝硬化组)和40例HCC患者(HCC组)的临床资料。RT-PCR半定量分析各组研究对象PBMCs中IL-22mRNA表达水平;Pearson相关分析法分析IL-22mRNA表达水平与临床重要检测指标的相关性。结果: CHB中度、CHB重度和肝硬化组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平均高于健康对照组(P<0.001);重型肝炎组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平与健康对照组比较差异无统计学意义(P=0.830);HCC组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平明显低于健康对照组(P<0.001)。CHB重度组患者和重型肝炎组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平与总胆红素(TB)水平呈明显负相关关系(r=-0.383,P=0.043;r=-0.619,P=0.028);HCC组患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平与血清甲胎蛋白(AFP)水平呈明显正相关关系(r=0.664,P=0.000)。结论: 慢性乙肝重症化过程中,患者PBMCs中IL-22mRNA表达水平低下提示肝细胞再生障碍,且IL-22mRNA表达水平与TB一样能够反映患者病情严重程度。IL-22可能对HCC的发生发展起促进作用。

目的: 检测类风湿关节炎(RA)患者和有关节症状的系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的表达水平,探讨TSLP在RA及SLE病程进展中的可能机制。方法: 选取RA患者40例作为RA组,有关节症状的SLE患者20例作为SLE组,另选健康体检者20人作为正常对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测3组研究对象血清TSLP水平,检测RA患者血常规、C反应蛋白(CRP)水平、红细胞沉降率(ESR)和抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体水平,记录及触痛关节数(TJC)、肿胀关节数(SJC)和VAS评分,并计算28个关节的疾病活动评分(DAS28-ESR、DAS28-CRP);统计SLE患者关节炎、新发皮疹和黏膜溃疡等临床症状及血常规、24h尿蛋白等相关指标,计算系统性红斑狼疮疾病活动度指数(SLEDAI)。RA组和SLE组患者相关临床指标、评分与血清TSLP水平的相关性分析采用Pearson检验。结果: RA组患者血清TSLP水平明显高于正常对照组(t=2.73,P<0.05),并与CRP、ESR及抗CCP抗体呈正相关关系(r=0.504,P=0.001;r=0.550,P<0.0001;r=0.895,P<0.0001),与DAS28-ESR、DAS28-CRP评分无相关关系(r=0.213,P=0.187;r=0.170,P=0.293)。抗CCP抗体阳性患者血清TSLP水平高于CCP阴性患者(F＝16.99,P<0.05)。SLE组患者血清TSLP水平与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),且SLE组患者血清TSLP水平与SLEDAI无相关关系(r=0.079,P=0.749)。结论: RA患者血清TSLP水平明显升高,TSLP参与RA的发病过程并具有促炎作用;TSLP可能对CCP抗体的产生具有调控影响,血清TSLP水平变化对于判断RA治疗效果有一定参考价值。

目的: 检测小细胞肺癌(SCLC)患者血清中白细胞介素9(IL-9)的水平和外周血中Th9的细胞比例,探讨Th9在SCLC疾病进展过程中的作用。方法: 选择20例局限期SCLC患者(局限期SCLC组)、16例扩散期SCLC患者(扩散期SCLC组)和10名健康对照者(健康对照组)。ELISA法检测各组研究对象血清中IL-9水平,流式细胞术检测各组研究对象外周血Th9细胞在CD4⁺T细胞中所占比例。结果: SCLC组患者外周血中Th9细胞比例高于健康对照组(t=3.731,P<0.01),局限期SCLC患者外周血中Th9细胞比例低于扩散期SCLC组(t=2.825,P<0.01)。SCLC组患者血清IL-9水平高于健康对照组(t=4.001,P<0.01),局限期SCLC组患者血清中IL-9水平低于扩散期SCLC组(t=3.089,P<0.01);结论: Th9可能通过分泌IL-9直接促进SCLC的疾病进展,外周血中Th9细胞和IL-9可能成为评价小细胞肺癌的分子标志。

目的: 建立可膨胀椎间融合器(EVIFC)和第4、5腰椎的有限元模型,分析EVIFC植入对腰椎生物力学的影响,为EVIFC的临床应用提供依据。方法: 根据健康成年男性腰椎CT扫描数据建立正常第4、5腰椎有限元模型,在此模型上模拟腰4-5椎间盘轻度退变,在三维模型上植入EVIFC。在屈伸、侧弯和旋转的载荷下,分析腰椎模型置入EVIFC前后的稳定性、椎间盘压力、终板压力及小关节载荷变化。结果: EVIFC的置入减少了退变节段终板、髓核和小关节的应力。屈伸时,腰4-5椎体退变模型的终板及髓核平均压力分别是6.1620和0.2016MPa,小关节载荷是32.8N;植入EVIFC后其数值分别是3.526、0.107MPa和8.5N。侧弯及旋转载荷结果一致。对于邻近的腰椎节段,与退变模型比较,植入EVIFC后,腰4-5终板和髓核应力值均有所减小,但其相邻节段纤维环的应力值均有所增加。结论: EVIFC对退变腰椎能起到良好的稳定效果,可满足人体生物力学需求,是一种适宜的新型腰椎融合器。

目的: 探讨一种安全、方便地将巨大胸膜孤立性纤维肿瘤(SFTP)完整切除的手术方式。方法: 回顾性分析5例肿瘤直径>10cm的SFTP患者的临床资料。术前应用增强CT明确肿瘤血供,术中均先采用胸腔镜探查明确肿瘤位置、直径及范围,分离与重要脏器相关的黏连,将肿瘤完整切除。其中1例患者术前行滋养动脉栓塞术。记录患者的手术方式、肿物直径大小、手术耗时、出血量、术后置管时间、切缘是否有残留和有无术后并发症等。结果: 5例患者的肿瘤均完整切除,切缘均为阴性。术中平均出血量210mL,手术平均耗时112min,术后平均置管时间3.8d,无围手术期死亡。术后随访6个月~3年,未见肿瘤复发。结论: 对于SFTP患者,术前应行增强CT扫描判断肿瘤血供及其与周围脏器的关系,必要时行滋养动脉栓塞;开胸术中辅以胸腔镜是一种较为安全、便捷和可行的方式。

目的: 报道1例第2跖趾关节痛风性关节炎并发先天性短指(趾)畸形病例,并对其诊疗情况进行讨论。方法: 该男性17岁患者因右足第2跖趾关节反复肿痛6个月入院,诊断为先天性短指(趾)畸形,右第2跖趾关节痛风性关节炎,手术行痛风石切除和关节成形术。结果: 患者术后恢复顺利,疼痛消失,恢复正常行走。结论: 痛风可并发足部畸形,临床上需注意鉴别诊断,手术治疗可获得良好效果。

目的: 探讨Viabahn腔内人工血管治疗髂股动脉长段闭塞性病变的临床经验和预后,评价其在外周动脉闭塞性病变治疗方面的疗效。方法: 回顾性分析经腔内介入治疗的78例(89条肢体)髂股动脉长段闭塞性病变患者的临床资料。根据患者意愿分为裸支架组(42例,48条肢体)和Viabahn腔内人工血管组(36例,41条肢体),比较2组患者的一般资料、围手术期情况、远期通畅率和保肢率等,随访时间为3~12个月,平均随访11.08个月。结果: 术后2组患者缺血症状明显改善,踝肱指数(ABI)较术前均明显升高(P<0.05);术后随访3、6、9个月2组患者的一期和二期通畅率比较差异无统计学意义(P>0.05),Viabahn腔内人工血管组患者12个月后一期通畅率和二期通畅率均明显高于裸支架组(P<0.05);2组患者的1年保肢率均为100%;Viabahn腔内人工血管组患者术中动脉血栓形成概率明显低于裸支架组(P<0.05)。结论: 应用Viabahn腔内人工血管治疗髂股动脉长段(≥10cm)闭塞性病变是安全、有效的,且其12个月的远期通畅率和术中动脉血栓形成概率明显优于金属裸支架。

目的: 采用A型肉毒毒素局部注射脑卒中患者偏瘫侧小腿三头肌,观察其对下肢肌痉挛和步行能力的影响,探讨肌张力变化与下肢运动功能的关系,研究其在社区康复中应用的可行性。方法: 选取脑卒中小腿三头肌痉挛患者30例,按照患者意愿分为治疗组(n=15)和对照组(n=15)。治疗组患者小腿三头肌局部注射A型肉毒毒素后进行常规康复治疗,对照组患者仅进行常规康复治疗。常规康复训练包括偏瘫侧下肢肌肉牵伸、肌力训练、平衡训练和步行训练。治疗前后进行康复评定并于治疗后3个月随访评定。肌张力评定采用改良Ashworth痉挛量表(MAS),下肢运动功能评定采用Fugl-Meyer(FM)量表中的下肢部分,步行能力评定采用10米步行测试(10MWT)时间。结果: 组内比较,治疗组患者治疗后和治疗后3个月MAS评分低于治疗前(P<0.05);对照组患者治疗前后MAS评分比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后3个月MAS随访评分低于治疗前(P<0.05)。2组患者治疗后和治疗后3个月随访FMA评分、10MWT时间均高于治疗前(P<0.05)。组间比较,治疗组患者治疗后和3个月随访MAS评分低于对照组(P<0.05),而FMA评分、10MWT时间明显高于对照组(P<0.05)。结论: A型肉毒毒素局部注射可快速而持久降低肌张力,结合康复训练可有效改善下肢痉挛状态,提高患者的运动功能和步行能力,适合在社区康复中推广应用。

目的: 探讨18F-脱氧葡萄糖(¹⁸FDG)正电子发射计算机断层显像(PET)/计算机断层显像(CT)在皮肌炎(DM)/多发性肌炎(PM)伴恶性肿瘤中的影像特点,为DM/PM的诊断提供依据。方法: 收集2009—2015年北京协和医院收治的17例DM/PM并发肿瘤的患者和39例同期未并发肿瘤患者的临床资料和¹⁸FDGPET/CT影像资料,并进行分析。结果: 56例DM/PM患者中并发肿瘤17例,包括淋巴瘤5例(其中3例为T细胞淋巴瘤),肺癌7例,甲状腺癌、乳腺癌、宫颈癌、肝脏神经内分泌肿瘤和胸腺瘤各1例,肿瘤病灶的¹⁸FDG摄取较高,最大标准摄取值(SUVmax)为1.47~22.93(7.67±6.60)。全部患者中22例患者¹⁸FDGPET/CT显像示全身肌肉弥漫性摄取升高,肌肉的SUVmax为0.71~2.93(1.43±0.68),其中9例患者(40.91%)伴有恶性病变;26例患者¹⁸FDGPET/CT显像示局部肌肉摄取升高,肌肉的SUVmax为1.06~8.74(2.62±1.65),其中6例患者(23.08%)伴有恶性病变;8例患者的¹⁸FDGPET/CT显像示全身肌肉¹⁸FDG未见摄取升高,其中3例患者(37.50%)伴有恶性病变。15例并发间质性肺炎,其中2例患者(13.33%)伴有恶性病变。结论: 肿瘤相关性DM的¹⁸FDGPET/CT影像表现有一定特征性,其中全身肌肉弥漫性摄取升高者肿瘤发病率最高;对可疑DM/PM伴恶性肿瘤患者,¹⁸FDGPET/CT可以作为有效的辅助诊断方法。

目的: 采用枕外隆凸和乳突最低点连线作为标志线定位横窦在颅骨表面的体表投影,为小脑幕上下手术入路时避免横窦损伤提供形态学基础。方法: 对80名志愿者进行CT扫描,采用CT重建技术构建颅骨3D模型以进行结构标记和测量,以枕外隆凸最高点(A)与乳突最低点(B)连线作为标志线描绘横窦沟至该标志线的距离和横窦沟宽度。结果: 横窦沟中部标志点J处横窦沟宽度d右边测量值大于左边(t=5.232,P<0.05);横窦沟标志点至连线AB的测量指标h1、h2、h3、h4、h5、s1、s2、BE、BD、BJ和BI的左右测量值比较差异无统计学意义(P>0.05);横窦沟标志点至连线AB的测量指标h1、h2、h3、h4、h5、s1、s2、d、BE、BD、BJ和BI的男女测量值比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论: 采用CT重建图像在二维平面上可精确地获得横窦沟在颅骨表面的体表投影数据,该方法简单、便捷、实用,且术中易于操作,对术中开颅保护横窦具有指导意义。

目的: 通过常规超声心动图总结静息状态下动力型左室腔流出梗阻(DIVO)心动图特征,并根据其特点设计一个新的指标R指数(狭窄处等容舒张期流速/左室主动舒张峰速度),探讨R指数定量评价DIVO的价值。方法: 选取以胸痛、胸闷就诊的DIVD患者112例(梗阻组),同时选取50名健康者作为健康对照组。采用常规二维超声心动图获取研究对象左室收缩末径(LVESD)、左室舒张末径(LVEDD)、间隔上部厚度(U-IVS)、中部厚度(M-IVS)和左室射血分数(LVEF)。彩色多普勒超声获取左室腔流速(流出道流速、左室中部流速和左室心尖部流速)。在心脏各切面观察左室心肌运动和左室腔内彩色血流,并测量收缩末期左室腔最窄处内径,于血流汇聚处获取平静呼吸及Valsalva试验下的等容舒张峰峰速、左室主动舒张峰E峰峰速及R指数,绘制受试者工作特征曲线(ROC),计算曲线下面积(AUC),根据约登指数确定R指数的诊断界点。结果: 与健康对照组比较,梗阻组患者心率偏快,血压偏高(P<0.01)。梗阻组患者二维超声心动图特征表现为左室心肌运动活跃,心腔相对偏小,且可见几何形变;DIVO患者左室腔内正常流速梯度趋势发生改变,收缩期血流频谱呈峰值后移,于等容舒张期可见等容舒张峰,且等容舒张峰速明显快于健康对照组(P<0.01),R指数明显大于健康对照组(P<0.01)。结论: DIVO患者R指数明显增大,且R指数≥1可作为静息状态下DIVO患者特异性诊断指标。

目的: 探讨正常甲状腺与甲状腺功能亢进症(Graves病)患者甲状腺腺体内血流和血管变化情况,阐明三维彩色多普勒超声定量诊断Graves病患者甲状腺血流的价值。方法: 选取55例Graves病患者作为病例组,38例健康志愿者作为对照组,全部受检者行甲状腺三维超声检查。使用QLAB软件系统对存储的图像进行三维重建,获得血管指数(VI)、血流指数(FI)和血管血流指数(VFI)参数。Pearson相关分析法分析病例组患者甲状腺VI、FI、VFI与甲状腺功能指标游离三碘甲状腺原氨酸(FT₃)、血清游离甲状腺素(FT₄)、促甲状腺激素(TSH)及24小时吸碘率最高值的相关性。结果: 病例组患者甲状腺两侧叶对应同部位VI、FI和VFI比较差异无统计学意义(P>0.05);病例组患者甲状腺同侧叶腺体对应部位VI、FI和VFI比较差异无统计学意义(P>0.05),病例组患者同侧叶甲状腺腺体VI、FI和VFI高于对照组(P<0.01);病例组患者左叶甲状腺VI、FI、VFI与FT₃呈正相关关系(r=0.65,r=0.34,r=0.65,P<0.05或P<0.01);病例组患者左叶甲状腺VI、FI、VFI与FT₄呈正相关关系(r=0.45,r=0.47,r=0.46,P<0.05);病例组患者左叶甲状腺VI、VFI与TSH呈负相关关系(r=-0.51、r=-0.54,P<0.05),FI与TSH无相关关系(r=-0.31,P>0.05);病例组患者左叶甲状腺VI、FI、VFI与24小时吸碘率最高值呈正相关关系(r=0.67,r=0.68,r=0.69,P<0.05)。结论: 三维彩色多普勒超声可直观、立体和定量地评价Graves病患者甲状腺血流变化情况,Graves病患者甲状腺腺体内血流弥漫性增多。

目的: 探讨我国部分大学生网络欺凌行为发生现状和相关影响因素,为新时代下提高学生健康网络行为、促进身心健康全面发展提供科学依据。方法: 2015年1月15日—3月5日对全国27个省、自治区和直辖市部分在校大学生进行社交网络使用情况调查,以有效调查问卷781份作为样本。社交网络使用情况问卷内容包括:一般人口学信息、社交网络使用情况、网络欺凌行为和心理学量表。根据网络欺凌行为参与及实施情况,将样本分为网络欺凌行为仅受害者组、仅施害者组和受害-施害者组。采用χ²检验分析各组大学生网络欺凌行为发生率;采用Mann-Whitney秩和检验分析不同年龄分段、登陆社交网络频率、在社交网络上的活动时间、熟人所占的比例及朋友人数等级资料各组网络欺凌发生率。结果: 研究对象781人中,306人(39.18%)参与过网络欺凌,其中53人(17.32%)实施过网络欺凌行为,111人(36.27%)受到过网络欺凌,142人(46.41%)既是受害者也是施害者。416人(53.27%)存在自我同一性危机,419人(53.65%)对生活不满意。男性、来自西部地区、社交网络登陆频率≥2次、自我同一性危机和生活满意度是网络欺凌行为发生的独立危险因素(OR=2.75,95%CI:1.97~3.83;OR=3.09,95%CI:1.88~5.07;OR=3.22,95%CI:1.14~9.08;OR=1.55,95%CI:1.11~2.16;OR=1.47,95%CI:1.05~2.06)。结论: 我国大学生网络欺凌行为发生率较高,加强大学生网络使用管理,改善其心理健康水平可能对减少网络欺凌行为发生具有重要意义。

目的: 应用脂质体介导的转染方法将pEGFP-N1转染入Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞中,并获得较佳的优化方案,阐明该优化条件在转染其他目的基因时的适用性。方法: 分别选取不同配比的质粒和脂质体,将pEGFP-N1转入Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞。转染后36h,倒置荧光显微镜和流式细胞术检测细胞中增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况和转染效率;台盼蓝染色法检测细胞存活率,以此获得优化的转染条件。同时将pEGFP-Aquaporin2、pEGFP-Aquaporin4和pEGFP-Aquaporin5分别以上述条件转染,并获取相应优化的转染条件。结果: 在质粒质量固定的条件下,随着脂质体质量的增加,其转染效率和细胞存活率升高;但是当质粒:脂质体>1:4时,转染效率和细胞存活率下降。在质粒和脂质体比例固定而质量增加时,其转染效率和细胞存活率下降;当质粒:脂质体>3.2μg:12.8μL时,转染效率降低。应用脂质体介导的方法转染pEGFP-N1和转染pEGFP-Aquaporin2、pEGFP-Aquaporin4和pEGFP-Aquaporin5时,在质粒与脂质体的配比为1:4(3.2μg:12.8μL)时,转染效率达最高。结论: 在应用脂质体介导的目的基因转染时,pEGFP-N1优化的转染条件具有较为广泛的适用性,可用作后续目的基因高效转染优化条件。

目的: 制备野菊花总黄酮(TFC)-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)缓释微球,并对制备工艺进行优化。方法: 采用复乳溶剂挥发法制备TFC-PLGA微球,观察初乳搅拌速度、聚乙烯醇(PVA)浓度和TFC与PLGA的投药比等不同因素对微球包封率(EE)的影响。显微镜观察微球大体形态;扫描电镜(SEM)观察微球表面形态和粒径大小;紫外分光光度法测量微球EE及其体外释放结果。结果: 在搅拌速度为3000r·min^-1、PVA浓度为3.0%、TFC与PLGA投药比为1:15的优化条件下,TFC-PLGA微球平均EE为(45.03±1.25)%,平均粒径大小为(102.20±1.97)μm。体外释放实验,24h时微球累积释放率为22.07%,20d时累积释放率达92.32%,TFC-PLGA微球具有明显的缓释效果。结论: 采用优化的制备工艺可以制备出粒径适宜、分散较均匀、EE较高的TFC-PLGA缓释微球。

巨噬细胞作为固有免疫和适应性免疫的重要组成成分,在全身的新陈代谢、血管形成、细胞凋亡和抗肿瘤等方面具有重要的调节作用,这与其可塑性和异质性有关联。当受到环境刺激时,巨噬细胞可分化成具有不同功能的表型(即极化)。由于巨噬细胞极化对相关疾病的发生发展具有重要影响,调控巨噬细胞极化可为一些临床疾病的治疗提供方法,因此本文就巨噬细胞极化的转录调控及其与相关疾病的关系进行综述。

经肝动脉放疗性栓塞(TARE)是经过肝动脉途径,将放射性核素微球灌注进入肝癌病灶中,通过微球所携带的核素释放电离辐射治疗肝癌,其是近年来血管内肝癌治疗研究的热点之一。本文从放射性微球的治疗原理和特点、TARE疗效评价方法和治疗时间、TARE的临床疗效分析、TARE的并发症、放射性微球研发和TARE临床研究及TARE存在问题和研究方向等方面进行简要综述。

肿瘤干细胞(CSCs)在肿瘤的生长、转移、复发和治疗抵抗中起决定性作用,靶向清除CSCs已成为肿瘤治疗的重要策略。靶向清除CSCs的效果必须通过CSCs功能性检测来验证和评估。本文总结了近年清除CSCs功能性检测中肿瘤球形成试验、小鼠异种移植试验和有限稀释试验等技术,对这些技术的意义和应用中可能出现的问题进行探讨,为提高靶向清除CSCs措施的质量提供参考。