SOCS3在弥漫大B细胞淋巴瘤患者外周血单个核细胞中的表达及其对OCI-LY7细胞自噬和凋亡的影响

doi:10.13481/j.1671-587X.20220121

摘要/Abstract

摘要： 目的

探讨信号传导抑制因子3（SOCS3）在弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者外周血单个核细胞中的表达及其对OCI-LY1-细胞自噬和凋亡的影响，并阐明其分子机制。

方法

收集并提取健康志愿者（对照组，50名）和DLBCL患者（DLBCL组，100例）外周血单个核细胞，同时培养人B淋巴细胞和人DLBCL 细胞（OCI-LY7细胞），实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测2组受试者外周血单个核细胞、B淋巴细胞和OCI-LY7细胞中SOCS3 mRNA表达水平。将OCI-LY7细胞分为pcDNA3.1-NC组和pcDNA3.1-SOCS3组，分别转染pcDNA3.1-NC和pcDNA3.1- SOCS3，RT-qPCR法检测2组细胞中SOCS3 mRNA表达水平，5-溴-2-脱氧尿嘧啶（EDU）实验检测2组细胞中EDU阳性细胞率，细胞免疫荧光染色法检测2组细胞中微管相关蛋白1轻链3（LC3）阳性细胞率，流式细胞术检测2组细胞凋亡率和不同细胞周期细胞百分率，Western bloting法检测2组细胞中SOCS3、磷酸化Janus激酶2（p-JAK2）及磷酸化信号转导和转录激活因子3（p-STAT3）蛋白表达水平，计算微管相关蛋白1轻链3 Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/LC3Ⅰ）比值。

结果

与对照组比较， DLBCL组患者外周血单个核细胞中SOCS3 mRNA表达水平明显降低（P<0.01）；与B淋巴细胞比较，OCI-LY7细胞中SOCS3 mRNA表达水平明显降低（P<0.01）。与pcDNA3.1-NC组比较，pcDNA3.1-SOCS3组细胞中SOCS3 mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01），EDU阳性细胞率明显降低（P<0.01），LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ和LC3阳性细胞率明显降低（P<0.01），细胞凋亡率明显升高（P<0.01），G₀/G₁期细胞百分率明显升高（P<0.01），S期细胞百分率明显降低（P<0.01），p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。

结论

SOCS3在DLBCL患者外周血单个核细胞和OCI-LY7细胞中呈低表达，过表达SOCS3可抑制OCI-LY7细胞增殖和自噬，增加细胞凋亡率，其机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。

关键词: 信号传导抑制因子3, 弥漫大B细胞淋巴瘤, 细胞自噬, 细胞凋亡, 磷酸化JAK激酶2, 磷酸化信号转导和转录激活因子3

Abstract: Objective

To explore the expression of suppressor of cytokine signaling 3 （SOCS3） in the peripheral blood mononuclear cells of the patients with diffuse large B-cell lymphoma （DLBCL） and its effect on the autophagy and apoptosis of OCI-LY1-cells， and to clarify its molecular mechanism.

Methods

The peripheral blood mononuclear cells of healthy volunteers （control group， 50 cases） and DLBCL patients （DLBCL group， 100 cases） were collected and extracted，and the human B lymphocytes and OCI-LY7 cells were cultured at the same time. The expression levels of SOCS3 mRNA in peripheral blood mononuclear cells， B lymphocytes，and OCI-LY7 cells of the subjects in two groups were detected by real-time fluorescence quantitative PCR （RT-qPCR） method. The OCI-LY7 cells were divided into pcDNA3.1-NC group and pcDNA3.1-SOCS3 group， and the cells were transfected with pcDNA3.1-NC and PCDNA3.1-SOCS3， respectively.The expression levels of SOCS3 mRNA in the cells in two groups were detected by RT-qPCR method；the EDU positive cell rates of the cells in two groups were detected by EDU experiment， and the microtubule-associated protein 1 light chain 3（LC3） positive cell rates in the cells in two groups were detected by cell immunofluorescence staining； flow cytometry was used to detect the apoptotic rates and the percentages of cells in different cell cycles in two groups，and Western blotting method was used to detect the expression levels of SOCS3， phosphorylated Janus kinase 2（p-JAK2） and phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3 （p-STAT3） proteins in the cells in two groups.The ratios of LC3Ⅱ/LC3Ⅰ was calculated.

Results

Compared with control group， the expression level of SOCS3 mRNA in peripheral blood mononuclear cells of the patients in DLBCL group was decreased （P<0.01）； compared with B lymphocyte group， the expression level of SOCS3 mRNA in the OCI-LY7 cells was decreased （P<0.01）. Compared with pcDNA3.1-NC group，the expression levels of SOCS3 mRNA and protein in the cells in pcDNA3.1-SOCS3 group were significantly increased（P<0.01）， the EDU positive cell rate of OCI-LY7 cells was significantly decreased （P<0.01）， the ratio of LC3 Ⅱ/LC3Ⅰ and the number of LC3 positive cells were decreased significantly（P<0.01），the apoptotic rate of OCI-LY7 cells was significantly increased （P<0.01）， the percentage of cells in G₀/G₁ phase was significantly increased （P<0.01）， the percentage of cells in S phase was significantly reduced （P<0.01），and the expression levels of p-JAK2 and p-STAT3 proteins were significantly reduced （P<0.01）.

Conclusion

SOCS3 is lowly expressed in the peripheral blood mononuclear cells and OCI-LY7 cells of the patients with DLBCL. Overexpression of SOCS3 can inhibit the proliferation and autophagy of OCI-LY7 cells， and enhance the apoptotic rate， and its mechanism may be related to inhibiting the JAK2/STAT3 signaling pathway.

Key words: Suppressors of cytokine signaling 3, Diffuse large B-cell lymphoma, Autophagy, Apoptosis, Phosphorylated Janus kinase 2, Phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3

中图分类号:

R733

孙文雄,李蒲. SOCS3在弥漫大B细胞淋巴瘤患者外周血单个核细胞中的表达及其对OCI-LY7细胞自噬和凋亡的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 172-179.

Wenxiong SUN,Pu LI. Expression of SOCS3 in peripheral blood mononuclear cells of patients with diffuse large B-cell lymphoma and its effect on autophagy and apoptosis of OCI-LY7 cells[J]. Journal of Jilin University(Medicine Edition), 2022, 48(1): 172-179.

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参考文献 25

1	SIEGEL R L， MILLER K D， JEMAL A. Cancer statistics， 2019［J］. CA A Cancer J Clin， 2019， 69（1）： 7-34.
2	RODGERS T D， BARAN A M， REAGAN P M，et al. Outcomes of lenalidomide in diffuse large B-cell （DLBCL） and high-grade NHL （HGBCL）： a single-center retrospective analysis［J］. J Clin Oncol， 2019， 37（15 ）： 7547.
3	PASVOLSKY O， ROZENTAL A， RAANANI P，et al. R-CHOP compared to R-CHOP + X for newly diagnosed diffuse large B-cell lymphoma： a systematic review and meta-analysis［J］. Acta Oncol， 2021， 60（6）： 744-749.
4	GISSELBRECHT C， GLASS B， MOUNIER N，et al. Salvage regimens with autologous transplantation for relapsed large B-cell lymphoma in the rituximab era［J］. J Clin Oncol， 2010， 28（27）： 4184-4190.
5	LIN X M， CHEN H， ZHAN X L. MiR-203 regulates JAK-STAT pathway in affecting pancreatic cancer cells proliferation and apoptosis by targeting SOCS3［J］. Eur Rev Med Pharmacol Sci， 2019， 23（16）： 6906-6913.
6	WANG J， GUO J， FAN H. MiR-155 regulates the proliferation and apoptosis of pancreatic cancer cells through targeting SOCS3［J］. Eur Rev Med Pharmacol Sci， 2020， 24（24）： 12625.
7	SHANG A Q， WU J， BI F， et al. Relationship between HER2 and JAK/STAT-SOCS3 signaling pathway and clinicopathological features and prognosis of ovarian cancer［J］. Cancer Biol Ther， 2017， 18（5）： 314-322.
8	ORTIZ-MUÑOZ G， MARTIN-VENTURA J L， HERNANDEZ-VARGAS P， et al. Suppressors of cytokine signaling modulate JAK/STAT-mediated cell responses during atherosclerosis［J］. Arterioscler Thromb Vasc Biol， 2009， 29（4）： 525-531.
9	汪太松，乔文礼，邢岩，等. 弥漫性大B细胞淋巴瘤预后因素研究进展［J］. 国际放射医学核医学杂志， 2020（3）： 182-188.
10	LI L J， CHAI Y， GUO X J， et al. The effects of the long non-coding RNA MALAT-1 regulated autophagy-related signaling pathway on chemotherapy resistance in diffuse large B-cell lymphoma［J］. Biomed Pharmacother， 2017， 89： 939-948.
11	YOUNES A， THIEBLEMONT C， MORSCHHAUSER F， et al. Combination of ibrutinib with rituximab， cyclophosphamide， doxorubicin， vincristine， and prednisone （R-CHOP） for treatment-naive patients with CD20-positive B-cell non-Hodgkin lymphoma： a non-randomised， phase 1b study［J］. Lancet Oncol， 2014， 15（9）： 1019-1026.
12	XU J， KE Y， ZHANG Y， et al. Role of prophylactic radiotherapy in Chinese patients with primary testicular diffuse large B-cell lymphoma： a single retrospective study［J］. J BUON， 2019， 24（2）：754-762.
13	LI S Y， YOUNG K H， MEDEIROS L J. Diffuse large B-cell lymphoma［J］. Pathology， 2018， 50（1）： 74-87.
14	LIU H， FENG XD， YANG B， et al. Dimethyl fumarate suppresses hepatocellular carcinoma progression via activating SOCS3/JAK1/STAT3 signaling pathway［J］. Am J Transl Res， 2019， 11（8）：4713-4725.
15	PIAO L， PARK J， LI Y， et al. SOCS3 and SOCS6 are required for the risperidone- mediated inhibition of insulin and leptin signaling in neuroblastoma cells［J］. Int J Mol Med， 2014， 33（5）：1364-1370.
16	CHU Q， SHEN D， HE L， et al. Prognostic significance of SOCS3 and its biological function in colorectal cancer［J］. Gene， 2017， 627： 114-122.
17	LI Y J， LEI Y H， YAO N， et al. Autophagy and multidrug resistance in cancer［J］. Chin J Cancer， 2017， 36（1）： 52.
18	ZHU H， GAN X， JIANG X， et al. ALKBH5 inhibited autophagy of epithelial ovarian cancer through miR-7 and BCL-2［J］. J Exp Clin Cancer Res， 2019， 38（1）： 163.
19	HUANG W， ZENG C， HU S B， et al. ATG3， a target of miR-431-5p， promotes proliferation and invasion of colon cancer via promoting autophagy［J］. Cancer Manag Res， 2019， 11： 10275-10285.
20	赵博欣，张志勇，黄立娟. MiR-let-7在细胞凋亡过程中作用的研究进展［J］. 国际免疫学杂志，2020， 43（1）：109-112.
21	CAO R， MENG Z， LIU T， et al. Decreased TRPM7 inhibits activities and induces apoptosis of bladder cancer cells via ERK1/2 pathway［J］.Oncotarget， 2016，7（45）： 72941-72960.
22	LI H C， XIA Z H， CHEN Y F， et al. Cantharidin inhibits the growth of triple-negative breast cancer cells by suppressing autophagy and inducing apoptosis in vitro and in vivo ［J］. Cell Physiol Biochem， 2017， 43（5）： 1829-1840.
23	张晓慧，罗建民，杨琳，等. SOCS1基因对JAK2/STAT通路介导的急性髓系白血病细胞生长抑制的作用［J］. 中国实验血液学杂志， 2020， 28（5）： 1496-1503.
24	彭玉娟，游晶，李静，等.JAK/STAT/SOCS信号通路在HBV相关肝脏疾病中的作用［J］. 临床肝胆病杂志，2021，37（6）： 1435-1439.
25	LI M， ZHENG R， YUAN F L. MiR-410 affects the proliferation and apoptosis of lung cancer A549 cells through regulation of SOCS3/JAK-STAT signaling pathway［J］.Eur Rev Med Pharmacol Sci， 2018， 22（18）：5987-5993.

[1]	郎庆旭,牛雪霜,杨凯文,张韧,王思腾,祖米热提古丽·吾买尔null,王珍琦. 丁酸钠联合电离辐射对肺癌A549细胞凋亡的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(4): 915-921.
[2]	李官虎,郎庆旭,刘纯岩,刘沁,耿梦柔,李晓倩,王珍琦. 丙戊酸联合X射线照射对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 622-629.
[3]	曹秋婷,韩竞春,张晓飞. 沉默解旋酶BLM基因对结直肠癌细胞伊立替康化疗敏感性的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 657-667.
[4]	刘翠兰,胡凤爱,刘晶,王丹,邱长云,柳敦江,赵娣. 脂联素受体激动剂AdiopRon对胶质瘤细胞生物学行为的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 702-710.
[5]	杨明星,董文,李冀. 贝母素乙对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 711-717.
[6]	李明,王秋婷,陈山,石慧芳. p38 MAPK抑制剂通过抑制NLRP3途径介导的细胞焦亡对小鼠慢性阻塞性肺疾病损伤的改善作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 744-754.
[7]	陈素贤,谷泽慧,马炀斐,谭琦,李琪,王亚帝. 芦丁对人结肠癌SW480细胞凋亡的促进作用及其作用机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(2): 356-363.
[8]	赵智慧,白香花,何金玲,段伟琴,刘敏,张生茂. 舒芬太尼对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其作用机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(2): 364-373.
[9]	许广松,蒋海兵,盘箐,李国庆. 桦木酸对胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭的抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 122-128.
[10]	孙艳敏,胡俊攀,王冰玉,傅金英. 山姜素对来曲唑诱导的多囊卵巢综合征模型大鼠的治疗作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 129-135.
[11]	崔磊华,侯玉帛,苏畅,李明贺,聂鑫. N-乙酰半胱氨酸对尼古丁诱导的MC3T3-E1细胞凋亡的作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 26-32.
[12]	朱妤,王晶晶,吴芳. miR-150-5p在糖尿病肾病模型小鼠肾组织中的表达和对小鼠足细胞MPC5损伤的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 44-51.
[13]	万朝辉,曾良,周辉. Bax抑制因子1过表达对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 74-81.
[14]	黄代强,刘朋飞,何建斌,孙静雪,袁琳,袁静,赵雷. 小鼠孕期七氟醚暴露对后代母系行为学的影响及氢气的保护机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2021, 47(6): 1347-1352.
[15]	母润红,艾一玖,李雨澎,林睿,叶思萍,马方,郭笑. 重组人IL-17A在胃癌组织中的表达及其对胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2021, 47(6): 1510-1517.