阿托伐他汀对Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ诱导的血管内皮功能紊乱的改善作用及其机制

doi:10.13481/j.1671-587X.20220207

摘要/Abstract

摘要： 目的

探讨阿托伐他汀（ATO）对氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）/β2糖蛋白Ⅰ（β2GPⅠ）/抗β2糖蛋白Ⅰ抗体（anti-β2GPⅠ）复合物引发的血管内皮细胞损伤的改善作用以及对TRAF3-相互作用蛋白2（TRAF3IP2）/Ikappa B激酶（IKK）/核因子κB（NF-κB）信号通路的影响，阐明ATO改善抗磷脂综合征（APS）背景下血管内皮细胞损伤的可能分子机制。

方法

通过给予人脐静脉内皮细胞（HUVECs） β2GPⅠ（100 mg·L^―1）、Ox-LDL（50 mg·L^―1）、β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ（100 mg·L^―1）、Ox-LDL/β2GPⅠ和Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ复合物建立血管内皮细胞损伤模型。实验分为对照组、β2GPⅠ组、Ox-LDL组、β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组、Ox-LDL/β2GPⅠ组、Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组、ATO（10 μmol·L^―1）+Ox-LDL/β2GPⅠ组和ATO+Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组。采用MTT法检测HUVECs存活率，化学荧光探针法检测各组HUVECs中活性氧（ROS）荧光强度，ELISA法检测各组HUVECs中内皮素1（ET-1）水平，Western blotting法检测各组HUVECs中TRAF3IP2、p-IKKγ和p-NF-κB p65蛋白表达水平。

结果

与对照组比较，Ox-LDL/β2GPⅠ组和Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组HUVECs存活率明显降低（P<0.01）；与Ox-LDL/β2GPⅠ组和Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组比较，ATO预处理1 h后，ATO+Ox-LDL/β2GPⅠ组和ATO+Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组HUVECs存活率明显升高（P<0.05）。与对照组比较，Ox-LDL/β2GPⅠ组和Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组HUVECs中ROS荧光强度和ET-1水平均明显升高（P<0.01），HUVECs中TRAF3IP2、IKKγ及Phospho-NF-κB p65蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）；与Ox-LDL/β2GPⅠ组和Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组比较，ATO预处理HUVECs 1 h 后，ATO+Ox-LDL/β2GPⅠ组和ATO+Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ组HUVECs中ROS荧光强度，ET-1水平，TRAF3IP2、IKKγ和Phospho-NF-κB p65蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。

结论

降血脂药物ATO可改善Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ诱导的血管内皮功能紊乱，其机制与下调TRAF3IP2/IKK/NF-κB信号通路有关。

关键词: 内皮功能紊乱, 氧化低密度脂蛋白, β2糖蛋白Ⅰ, 抗β2糖蛋白Ⅰ抗体, 活性氧, TRAF3-相互作用蛋白2, 核因子κB

Abstract: Objective

To investigate the effect of atorvastatin（ATO） on the vascular endothelial cell injury induced by oxidized low-density lipoprotein （Ox-LDL） /β2-glycoprotein Ⅰ （β2GPⅠ）/anti-β2-glycoprotein Ⅰ antibody （anti-β2GPⅠ） complex and its effect on the TRAF3 interacting protein 2 （TRAF3IP2）/ Ⅰ kappa B kinase （IKKγ）/ nuclear factor kappa-B （NF-κB） signaling pathway， and to elucidate the possible molecular mechanism of improvement effect of ATO on the endothelial cell injury in the context of antiphospholipid syndrome （APS）.

Methods

The endothelial cell injury models were established by treating the human umbilical vein endothelial cells （HUVECs） with β2GPⅠ（100 mg·L^―1），Ox-LDL（50 mg·L^―1），β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ（100 mg·L^―1），Ox-LDL/β2GPⅠ and Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ complex.The HUVECs were divided into control group，β2GPⅠ group，Ox-LDL group，β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ group，Ox-LDL/β2GPⅠ group，Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ group，ATO（10 μmol·L^―1）+ Ox-LDL/β2GPⅠ group and ATO+ Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ group. The survival rates of HUVECs in various groups were detected by MTT assay， the fluorescence intensities of intracellular reactive oxygen species （ROS） in various groups were detected by chemical fluorescence probe， and the endothelin-1（ET-1） levels in various groups were detected by ELISA. The expression levels of TRAF3IP2， p-IKKγ and p-NF-κB p65 in the HUVECs in various groups were detected by Western blotting method.

Results

Compared with control group， the survival rates of HUVECs in Ox-LDL/β2GPⅠ group and Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ group were significantly decreased （P<0.01）；compared with Ox-LDL/β2GPⅠ group and Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ group，after treatment for 1 h，the survival rates in ATO+Ox-LDL/β2GPⅠ group and ATO+Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ group were significantly increased （P<0.05）. Compared with control group， the fluorescence intensities of ROS and the levels of ET-1 in the HUVECs in Ox-LDL/β2GPⅠ group and Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ group were significantly increased （P<0.01）； the expression levels of TRAF3IP2， p-IKKγ and p-NF-κB P65 proteins in the HUVECs in were significantly increased （P<0.05）. Compared with Ox-LDL/β2GPⅠ group and Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ group，the fluorescence intensties of ROS and the levels of ET-1， and the expression levels of TRAF3IP2， p-IKKγ and p-NF-κB P65 in ATO+Ox-LDL/β2GPⅠ group and ATO Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ group were significantly decreased （P<0.05）.

Conclusion

ATO could alleviate the vascular endothelial dysfunction induced by Ox-LDL/β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ complex，and its mechanism may be related to down-regulating the TRAF3IP2/IKK/NF-κB signaling pathway.

Key words: Endothelial dysfunction, Oxidized low-density lipoprotein, β2-glycoprotein Ⅰ, anti-β2-glycoprotein Ⅰ antibody, Reactive oxygen species, TRAF3 interacting protein 2, Nuclear factor kappa-B

中图分类号:

R543.5

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图/表 4

图1

图2

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