健脾化瘀祛痰法对apoA-Ⅰ/AMPK/CPT1A信号通路介导的脂肪酸β氧化改善血脂异常的调控作用及其机制

doi:10.13481/j.1671-587X.20220604

吉林大学学报(医学版) ›› 2022, Vol. 48 ›› Issue (6): 1395-1402.doi: 10.13481/j.1671-587X.20220604

健脾化瘀祛痰法对apoA-Ⅰ/AMPK/CPT1A信号通路介导的脂肪酸β氧化改善血脂异常的调控作用及其机制

张琦¹,赵秋宇¹,隋国媛¹,刘慧慧²,翟亚荣¹,于宁¹,王杰¹,裘雪莹¹,孟嘉伟¹,贾连群¹()

^1.辽宁中医药大学中医脏象理论及应用教育部重点实验室，辽宁沈阳 110847
^2.辽宁中医药大学中西医结合学院，辽宁沈阳 110847

收稿日期:2022-01-05 出版日期:2022-11-28 发布日期:2022-12-07
通讯作者: 贾连群 E-mail:jlq-8@163.com
作者简介:张琦（1997－），女，辽宁省沈阳市人，在读硕士研究生，主要从事中西医结合防治心血管疾病方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(82074145);辽宁省自然科学基金项目(2019-ZD-0436);辽宁省“兴辽英才计划”项目(XLYC1902100)

Regulatory effect of Jianpi Huayu Qutan method on dyslipidemia improved by fatty acid β oxidation mediated by apoA-Ⅰ/ AMPK/CPT1A signaling pathway and its mechanism

Qi ZHANG¹,Qiuyu ZHAO¹,Guoyuan SUI¹,Huihui LIU²,Yarong ZHAI¹,Ning YU¹,Jie WANG¹,Xueying QIU¹,Jiawei MENG¹,Lianqun JIA¹()

^1.Ministry of Education Key Laboratory of Visceral Phenomenon Theory and Application in Traditional Chinese Medicine，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110847，China
^2.College of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Shenyang 110847，China

Received:2022-01-05 Online:2022-11-28 Published:2022-12-07
Contact: Lianqun JIA E-mail:jlq-8@163.com

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨健脾化瘀祛痰法对高脂血症大鼠血脂异常的影响，基于载脂蛋白AⅠ（apoA-Ⅰ）/单磷酸腺苷激活蛋白激酶（AMPK）/ 肉毒碱棕榈酰转移酶ⅠA（CPT1A）信号通路阐明其分子机制。方法 32只大鼠随机分为空白对照组、模型组、辛伐他汀组（给予1.575 mg·kg^－1·d^－1辛伐他汀）和化瘀祛痰方（HYQTP）组（给予13.846 mg·kg^－1·d^－1化瘀祛痰方药物），每组8只。空白对照组大鼠给予正常饮食，模型组、辛伐他汀组和HYQTP组大鼠给予高脂饲料，建立高脂血症大鼠模型。8周后，辛伐他汀组和HYQTP组大鼠灌胃相应药物；空白对照组和模型组大鼠给予等体积生理盐水。全自动生化分析仪检测各组大鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）水平，HE染色观察各组大鼠肝组织病理形态表现，油红O染色观察各组大鼠肝组织脂质沉积情况，检测各组大鼠肝组织中TG水平，ELISA法检测各组大鼠肝组织中apoA-Ⅰ水平，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测各组大鼠肝组织中apoA-Ⅰ、B族Ⅰ型清道夫受体（SR-B1）和CPT1A mRNA表达水平，Western blotting法检测各组大鼠肝组织中高密度脂蛋白受体（SR-B1）、AMPK、磷酸化AMPK（p-AMPK）和CPT1A蛋白表达水平。结果与空白对照组比较，模型组大鼠血清TC、TG和LDL-c水平升高（P<0.05），HDL-c水平降低（P<0.05）；肝组织中TG水平升高（P<0.05）；肝细胞出现明显肿胀，体积增大；并且可见明显红色脂滴分布；肝组织中apoA-Ⅰ、SR-B1和CPT1A mRNA及蛋白表达水平降低（P<0.05），p-AMPK/AMPK比值降低（P<0.05）；与模型组比较，辛伐他汀组和HYQTP组大鼠血清TC、TG 和 LDL-c水平降低（P<0.05），HDL-c水平升高（P<0.05）；肝组织中TG水平降低（P<0.05）；肝细胞肿胀明显减轻，脂滴分布明显减少，肝组织中apoA-Ⅰ、SR-B1和CPT1A mRNA及蛋白表达水平升高（P<0.05），p-AMPK/AMPK比值升高（P<0.05）。结论健脾化瘀祛痰法能够改善高脂血症大鼠血脂异常，减轻肝脏损伤及脂质沉积，其作用机制可能与调控apoA-1/AMPK/CPT1A信号通路促进大鼠脂肪酸β氧化有关。

关键词: 血脂异常, 脂肪酸β氧化, 载脂蛋白AⅠ, 单磷酸腺苷激活蛋白激酶, 肉毒碱棕榈酰转移酶ⅠA

Abstract:

Objective To explore the effect of the Jianpi Huayu Qutan method on the dyslipidemia in the rats and to elucidate its molecular mechanism based on apolipoprotein A-Ⅰ（apoA-Ⅰ）/ adenosine monophosphate activated protein kinase （AMPK） / carnitine palmitoyltransferase Ⅰ A（CPT1A） signaling pathway. Methods A total of 32 rats were randomly divided into blank control group， model group， simvastatin group （given 1.575 mg·kg^－1·d^－1 simvastatin） and Huayu Qutan Prescription（HYQTP） group （given 13.846 mg·kg^－1·d^－1 HYQTP drug）， and there were 8 rats in each group. The rats in blank control group were given normal diet，and the rats in model group， simvastatin group and HYQTP group were given high-fat diet to establish the hyperlipidemia rat models. After 8 weeks， the rats in simvastatin group and HYQTP group were given drugs by gavage； the rats in blank control group and model group were given the same volume of normal saline. The levels of total cholesterol （TC）， triglycerides （TG）， low density lipoprotein cholesterol （LDL-c） and high density lipoprotein cholesterol （HDL-c） in serum of the rats in various groups were detected by automatic biochemical analyzer；HE staining was used to observe the pathomorphology of liver tissue of the rats in various groups； Oil red O staining was used to observe the lipid deposition in liver tissue of the rats in various group； the levels of TG in liver tissue of the rats in various groups were detected；ELISA method was used to detect the levels of apoA-Ⅰ in liver tissue of the rats in various groups；real-time fluorescence quantitative PCR （RT-qPCR） method was used to detect the expression levels of apoA-Ⅰ， scavenger receptor class B type 1 （SR-B1）， and CPT1A mRNA in liver tissue of the rats in various groups；Western blotting method was used to detect the expression levels of SR-B1， phosphorylated AMPK （p-AMPK）and CPT1A proteins in liver tissue of the rats in various groups. Results Compared with blank control group， the levels of serum TC， TG，and LDL-c of the rats in model group were increased （P<0.05）， and the level of serum HDL-c was decreased （P<0.05）； the level of TG in liver tissue of the rats was increased （P<0.05）； the hepatocytes showed obvious swelling and increased volume， and the obvious red lipid droplet distribution could be seen； the expression levels of apoA-Ⅰ，SR-B1， and CPT1A mRNA and protein were decreased （P<0.05）， and the ratio of p-AMPK/AMPK was decreased （P<0.05）；compared with model group， the levels of serum TC， TG，and LDL-c in liver tissue of the rats in simvastatin group and HYQTP group were decreased （P<0.05）， and the level of HDL-c was increased （P<0.05），the level of TG in liver tissue was decreased （P<0.05）；the swelling of hepatocytes was obviously reduced，and the distribution of lipid droplets was decreased obviously； the expression levels of apoA-Ⅰ， SR-B1， and CPT1A mRNA and proteins were increased （P<0.05）， and the ratio of p-AMPK/AMPK was increased （P<0.05）. Conclusion The Jianpi Huayu Qutan method can improve the dyslipidemia and reduce the liver damage and lipid deposition of the hyperlipidemia rats， and its mechanism may be related to regulating the apoA-Ⅰ/AMPK/CPT1A signaling pathway and promoting fatty acid β oxidation in the rats.

Key words: Dyslipidemia, Fatty acid β oxidation, Apolipoprotein A-Ⅰ, Adenosine monophosphate activated protein kinase, Carnitine palmitoy ltransferase ⅠA

中图分类号:

R255.7

张琦,赵秋宇,隋国媛,刘慧慧,翟亚荣,于宁,王杰,裘雪莹,孟嘉伟,贾连群. 健脾化瘀祛痰法对apoA-Ⅰ/AMPK/CPT1A信号通路介导的脂肪酸β氧化改善血脂异常的调控作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(6): 1395-1402.

Qi ZHANG,Qiuyu ZHAO,Guoyuan SUI,Huihui LIU,Yarong ZHAI,Ning YU,Jie WANG,Xueying QIU,Jiawei MENG,Lianqun JIA. Regulatory effect of Jianpi Huayu Qutan method on dyslipidemia improved by fatty acid β oxidation mediated by apoA-Ⅰ/ AMPK/CPT1A signaling pathway and its mechanism[J]. Journal of Jilin University(Medicine Edition), 2022, 48(6): 1395-1402.

图/表 8

表1

表 2

图1

图2

表3

表4

图3

表5

参考文献 23

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Gene	Forward	Reverse
ApoA-Ⅰ	5'-CGAGCTTCACAAAAACGCGA-3'	5'-CATGCGGTCTCGAAACTCCT-3'
SR-B1	5'-CCTTCGTTTCCAGCCAGACA-3'	5'-CCCACAGGATCTCACCAACC-3'
CPT1A	5'-TCAAACCCATTCGTCTTCTGG-3'	5'-CTGCTTATTTTTCCCTCGTGC-3'

Group	TG	TC	LDL-c	HDL-c
Blank control	0.70±0.22	1.40±0.16	0.37±0.12	0.69±0.06
Model	1.67±0.03^*	2.08±0.42^*	0.88±0.32^*	0.37±0.01^*
Simvastatin	0.88±0.36^?	1.41±0.07^△	0.39±0.12^△	0.54±0.02^△
HYQTP	1.10±0.05^?	1.25±0.19^△	0.24±0.06^△	0.56±0.11^△

Group	TG [m_B/(mmol·g^－1)]	apoA-Ⅰ[ρ_B/(ng·L^－1)]
Blank control	0.009±0.001	8.166±0.223
Model	0.017±0.001^*	7.006±0.170^*
Simvastatin	0.011±0.002^△	7.930±0.454^△
HYQTP	0.013±0.002^△	7.747±0.183^△

Group	apoA-Ⅰ	SR-B1	CPT1A
Blank control	1.000±0.000	1.000±0.000	1.000±0.000
Model	0.540±0.141^*	0.484±0.083^*	0.488±0.010^*
Simvastatin	0.987±0.244^△	1.048±0.325^△	1.017±0.279^△
HYQTP	0.945±0.127^△	0.984±0.178^△	0.999±0.268^△

Group	SR-B1	CPT1A	p-AMPK/AMPK
Blank control	0.998±0.006	1.010±0.030	0.989±0.018
Model	0.743±0.025^*	0.746±0.055^*	0.725±0.015^*
Simvastatin	0.900±0.026^△	0.907±0.032^△	0.857±0.024^△
HYQTP	0.830±0.026^△#	0.839±0.007^△	0.896±0.040^△

健脾化瘀祛痰法对apoA-Ⅰ/AMPK/CPT1A信号通路介导的脂肪酸β氧化改善血脂异常的调控作用及其机制

Regulatory effect of Jianpi Huayu Qutan method on dyslipidemia improved by fatty acid β oxidation mediated by apoA-Ⅰ/ AMPK/CPT1A signaling pathway and its mechanism

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