黄芪注射液对人角质细胞增殖和黏附功能的影响及其治疗银屑病的作用机制

doi:10.13481/j.1671-587x.20200615

摘要/Abstract

摘要： 目的

观察黄芪注射液对人角质细胞（KC）增殖与黏附因子β-连环蛋白（β-catenin）表达的影响，探讨黄芪注射液对银屑病治疗作用的可能机制。

方法

增殖功能实验，将添加不同浓度黄芪注射液的HaCaT细胞作为实验组，不添加药物的HaCaT细胞作为对照组，同时设无细胞、无药物的空白组。采用细胞计数法确定黄芪注射液作用有效浓度，2倍梯度稀释不同浓度黄芪注射液加入实验组HaCaT细胞中孵育24、48和72 h，采用CCK-8法检测各组细胞增殖率。黏附功能实验，实验组为加入1.0 g·L^-1黄芪注射液的HaCaT细胞，对照组为不加入黄芪注射液的HaCaT细胞。细胞培养24和48 h后，定量聚合酶链反应（qPCR）法检测2组细胞中β-catenin mRNA表达水平；HaCaT细胞培养48 h后，Western blotting法检测2组细胞中β-catenin蛋白表达水平。

结果

增殖功能实验，与0、0.01和0.10 g·L^－1黄芪注射液组比较，培养24和48 h后1.0 g·L^－1黄芪注射液组HaCaT细胞增殖率降低（P<0.01）；2倍浓度梯度稀释黄芪注射液（0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0和16.0 g·L^－1）与HaCaT细胞孵育24、48和72 h后，与对照组比较，作用24和48 h时1.0 g·L^－1黄芪注射液组HaCaT细胞增殖率降低（P<0.05），72 h细胞增殖率升高（P<0.05）。黏附功能实验，与0 g·L^－1黄芪注射液组比较，作用24 h后1.0 g·L^－1黄芪注射液组HaCaT细胞中β-catenin　mRNA表达水平差异无统计学意义（P>0.05），作用48 h后1.0 g·L^－1黄芪注射液组HaCaT细胞中β-catenin蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。

结论

黄芪注射液对银屑病的治疗作用机制可能与抑制人角质细胞的增殖、抑制黏附因子β-catenin蛋白表达有关联。黄芪注射液作为单一的因素可以抑制HaCaT细胞增殖并下调β-catenin蛋白表达，该抑制效应可能随时间衰减。

关键词: 黄芪注射液, 银屑病, 人角质形成细胞, β-连环蛋白, 增殖, 黏附

Abstract: Objective

To observe the effects of Astragalus Injection on the proliferation of human keratinocytes（KC） and the expression of adhesion factor β-catenin， and to explore the possible mechanism of Astragalus Injection in the treatment of psoriasis.

Methods

The HaCaT cells were collected. In the proliferation function experiment， the HaCaT cells were divided into experimental groups （added with different concentrations of Astragalus Injection） and control group （without drugs）， at the same time， blank group （without drugs and cells） was set up. The effective concentration of Astragalus Injection was determined by cell counting method.The HaCaT cells in experimental groups were incubated for 24， 48 and 72 h after adding different concentrations of Astragalus Injection with two times gradient dilution， and the proliferation rates of HaCaT cells in various groups were detected by CCK-8 method. In the adhesion function experiment， the HaCaT cells in experimental group were treated with 1.0 g·L^－1 Astragalus Injection and the HaCaT cells in control group were not treated with Astragalus Injection. After cultured for 24 and 48 h， the expression levels of β- catenin mRNA in the HaCaT cells in two groups were detected by qPCR method； after cultured for 48 h， the expression levels of β-catenin protein in the HaCaT cells in two groups were detected by Western blotting method.

Results

The proliferation function test results showed that compared with 0，0.01， and 0.10 g·L^－1 Astragalus Injection groups，the proliferation rates of the HaCaT cells in 1.0 g·L^－1 Astragalus Injection group were decreased after treated for 24 and 48 h （P<0.01）. The HaCaT cells were incubated with 2 times concentration gradient dilution of Astragalus Injection （ 0， 0.5， 1.0， 2.0， 4.0， 8.0， 16.0 g·L^－1）for 24， 48， and 72 h， compared with control group， the proliferation rates of HaCaT cells in 1.0 g·L^－1 Astragalus Injection group were decreased after treated for 24 and 48 h （P<0.05）， the proliferation rate of HaCaT cells was increased after treated for 72 h（P<0.05）. In the adhesion function experiment， compared with 0 g·L^－1 Astragalus Injection group， there was no significant difference in the expression level of β-catenin mRNA in the HaCaT cells in 1.0 g·L^－1 Astragalus Injection group after treated for 24 h （P>0.05）；after treated for 48 h， the expression level of β-catenin protein in the HaCaT cells in 1.0 g·L^－1 Astragalus Injection group was decreased significantly （P<0.01）.

Conclusion

The mechanism of Astragalus injection in the treatment of psoriasis may be related to the inhibition of proliferation of human KC and the expression of adhesion factor β-catenin. As a single factor， Astragalus Injection could inhibit the proliferation of HaCaT cells and reduce the expression of β-catenin protein，and the inhibitory effect may decrease with the prolongation of time.

Key words: Astragalus Injection, psoriasis, human keratinocytes, β-catenin, proliferation, adhesion

中图分类号:

R285.5

李晓,马振卉,王园园,田亚萍. 黄芪注射液对人角质细胞增殖和黏附功能的影响及其治疗银屑病的作用机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2020, 46(6): 1202-1207.

Xiao LI,Zhenhui MA,Yuanyuan WANG,Yaping TIAN. Effects of Astragalus Injection on proliferation and adhesion function of human keratinocytes and its mechanism in treatment of psoriasis[J]. Journal of Jilin University(Medicine Edition), 2020, 46(6): 1202-1207.

图/表 4

图1

表1

图2

图3

参考文献 28

1	中华医学会皮肤性病学分会银屑病专业委员会.中国银屑病诊疗指南（2018完整版）［J］. 中华皮肤科杂志，2019，52（10）：667-710.
2	BISSONNETTE R， NIGEN S， LANGLEY R G， et al. Increased expression of IL-17A and limited involvement of IL-23 in patients with palmo-plantar （PP） pustular psoriasis or PP pustulosis； results from a randomised controlled trial［J］. J Eur Acad Dermatol Venereol， 2014， 28（10）： 1298-1305.
3	MEASE P J， MCINNES I B， KIRKHAM B， et al. Secukinumab inhibition of interleukin-17A in patients with psoriatic arthritis［J］. N Engl J Med， 2015， 373（14）： 1329-1339.
4	AYALA-FONTÁNEZ N， SOLER D C， MCCORMICK T S. Current knowledge on psoriasis and autoimmune diseases［J］. Psoriasis （Auckl）， 2016， 6： 7-32.
5	HAMPTON P J， ROSS O K， REYNOLDS N J. Increased nuclear β-catenin in suprabasal involved psoriatic epidermis［J］. Br J Dermatol， 2007， 157（6）： 1168-1177.
6	龙剑文，皮先明，涂亚庭. 进行期寻常性银屑病皮损β-连环蛋白、VEGF和VEGFR-2的mRNA表达［J］. 中国皮肤性病学杂志， 2015， 29（1）： 29-31.
7	包七十三. 黄芪注射液联合阿维A治疗银屑病的疗效［J］. 中国冶金工业医学杂志， 2016， 33（1）： 40-41.
8	李玲. 黄芪注射液对寻常型银屑病患者微循环及氧化应激状态的影响研究［J］. 世界中西医结合杂志， 2015， 10（7）： 962-964.
9	王辉，石永强. 黄芪颗粒联合益生菌治疗溃疡性结肠炎的疗效及对IL-23、IL-17的影响［J］. 中国地方病防治杂志， 2016， 31（10）： 1171.
10	刘丹莉，刘海英，高顺利. 黄芪甲苷通过IL-23/IL-17信号通路对病毒性心肌炎的干预作用探讨［J］. 临床儿科杂志， 2014， 32（6）： 570-573.
11	GAO Y， ZHANG R R， LI J H， et al. Radix Astragali lowers kidney oxidative stress in diabetic rats treated with insulin［J］. Endocrine， 2012， 42（3）： 592-598.
12	杨凡，谭正怀，艾儒棣，等. 黄芪治疗湿疹的相关机制探讨［J］. 中国民族民间医药， 2018， 27（23）： 16-19.
13	张玉芳，甄莉. 黄芪注射液对寻常型银屑病皮损角质形成细胞增殖细胞核抗原表达的影响［J］. 中国药物与临床， 2011， 11（10）： 1150-1152， 1233.
14	何金，赵恒光，任先志，等. 黄芪注射液对Balb/c裸鼠银屑病模型的皮损程度及Caspase-14、SOCS1、STAT3水平的影响［J］. 海南医学院学报， 2019， 25（6）： 410-413.
15	沈立飞，王海英. 黄芪注射液联合阿维A、复方氟米松软膏对银屑病患者外周血细胞因子的影响［J］. 中国老年学杂志， 2016， 36（14）： 3546-3547.
16	李玲. 黄芪注射液对寻常型银屑病患者微循环及氧化应激状态的影响研究［J］. 世界中西医结合杂志， 2015， 10（7）： 962-964.
17	黄志雄. 黄芪注射液联合阿维A治疗老年银屑病的临床效果［J］. 现代诊断与治疗， 2015， 26（6）： 1274-1275.
18	闫铁夫. 黄芪注射液联合阿维A对小鼠银屑病模型的影响［J］. 重庆医科大学学报， 2013， 38（1）： 58-60.
19	闫铁夫. 黄芪注射液联合阿维A治疗银屑病的疗效［J］. 中国老年学杂志， 2012， 32（12）： 2518-2520.
20	李雪，解欣然，李宁飞，等. 凉血解毒利湿方对小鼠银屑病样皮损中过氧化物酶体增殖激活受体的影响［J］. 中医杂志， 2017， 58（23）： 2032-2038， 2073.
21	邢倩. β-catenin和Dickkopf1在银屑病皮损中的表达［D］. 重庆：重庆医科大学， 2012.
22	刘国刚，熊霞. Wnt/β-catenin信号通路与银屑病相关性研究进展［J］. 西南军医， 2012， 14（1）： 109-110.
23	吴发宝，陈希元. 黄芪药理作用研究综述［J］. 中药材， 2004， 27（3）： 232-234.
24	李炎夏，周起云，陆王景学，等. 黄芪维胺酯联合应用对银屑病甲襞微循环的影响［J］. 中国皮肤性病学杂志， 1998， 12（6）： 3-5.
25	HUH J E， NAM D W， BAEK Y H， et al. Formononetin accelerates wound repair by the regulation of early growth response factor-1 transcription factor through the phosphorylation of the ERK and p38 MAPK pathways［J］. Int Immunopharmacol， 2011， 11（1）： 46-54.
26	HAN D O， LEE H J， HAHM D H. Wound-healing activity of Astragali Radix in rats［J］. Methods Find Exp Clin Pharmacol， 2009， 31（2）： 95-100.
27	韩丹,王博,王丽娟,等.IL-22可诱导角质形成细胞双调蛋白表达促进银屑病发病[J].西安交通大学学报(医学版),2019,40(6):981-985.
28	赵春苗,楚燕芳,张冰莹,等.双重滤过血浆置换疗法治疗银屑病关节炎2例并文献复习[J].中国实用内科杂志,2019,39(12):1105-1108.

Group	Number of HaCaT cells
Group	(t/h) 24	48	72
Astragalus Injection 0	（g·L^-1）2.62±0.08	3.33±0.14	6.90±0.04
0.5	2.31±0.06^*?	3.12±0.07^*?	6.47±0.03^*
1.0	2.21±0.02^*	2.92±0.03^*	6.50±0.02^*
2.0	2.25±0.04^*	3.43±0.09^*?	6.91±0.04^?
4.0	2.24±0.03^*	3.98±0.02^*#	6.90±0.05^?
8.0	2.25±0.02^*	3.78±0.02^*?	6.50±0.02^*
16.0	2.24±0.03^*	3.06±0.02^*?	6.89±0.02^?

[1]	王志娟,张明姝,叶丽平. 血小板衍生生长因子D通过ERK信号通路对肺癌H1299细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(4): 898-904.
[2]	马琰迪,卢香云,何尚峰,俞雪燕,胡云华,高海霞,陈云昭,禹洁,王文洁,李锋,崔晓宾. m6A甲基化修饰结合蛋白YTHDF2在食管癌组织中的表达及其对食管癌细胞增殖和迁移的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(4): 962-970.
[3]	汪国武,姚远,张雨,徐娜,刘芳. miR-152降低低密度脂蛋白受体表达对子宫内膜癌细胞增殖和侵袭的抑制作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 591-599.
[4]	李官虎,郎庆旭,刘纯岩,刘沁,耿梦柔,李晓倩,王珍琦. 丙戊酸联合X射线照射对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 622-629.
[5]	颜培玉,张爱臣,章宏,李杨,张萌萌,洛梦泽,潘颖. 脂肪间充质干细胞对卵巢早衰模型大鼠的治疗作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 648-656.
[6]	刘翠兰,胡凤爱,刘晶,王丹,邱长云,柳敦江,赵娣. 脂联素受体激动剂AdiopRon对胶质瘤细胞生物学行为的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 702-710.
[7]	吴壮志,贺小宁,陈思祺. miR-124-3p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 718-727.
[8]	潘延斌,苏家光,谭美乐,杨猛,覃文飞,黄榆秀,蒙世豪,黄耀辉,梁坚强,苏雪芳,黄姿婵,李建民. 沉默DNMT3a表达对银屑病样细胞周期进展和细胞增殖的抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 773-782.
[9]	李小燕,张维,何杰. REG1A通过调控Wnt/β-catenin信号通路对肺腺癌细胞增殖和迁移的促进作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(2): 444-453.
[10]	许广松,蒋海兵,盘箐,李国庆. 桦木酸对胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭的抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 122-128.
[11]	于秀艳,李铤,丛占杰,王文龙,张晓伟,吴雪峰. 乳腺癌患者外周血中hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA联合检测及其临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 195-202.
[12]	周超锋,周世繁,田青,王赛,李洪霖,马纯政. lncRNA-NORAD表达对食管癌Eca-109细胞生物学行为的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 33-43.
[13]	王泽泰,娄丹丹,彭燕,朱道琦,李爱武,宫凤英,吕英,范钦. 鼻咽癌斑马鱼移植瘤模型的构建及姜黄素对CNE-2细胞的抑制作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 9-17.
[14]	张新,巨朝娟,金鑫,熊朝晖,赵燕. 外源性神经生长因子对形觉剥夺性近视豚鼠巩膜组织的保护作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2021, 47(6): 1455-1461.
[15]	于秀艳,田春迎,张晓伟,吴雪峰. 血清SBEM、hMAM和CEACAM19水平在乳腺癌早期诊断中的临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2021, 47(6): 1518-1525.