幽门螺杆菌感染性慢性胃炎模型小鼠肠道各区域的菌群分布特征及其机制

doi:10.13481/j.1671-587X.20230204

吉林大学学报(医学版) ›› 2023, Vol. 49 ›› Issue (2): 289-297.doi: 10.13481/j.1671-587X.20230204

幽门螺杆菌感染性慢性胃炎模型小鼠肠道各区域的菌群分布特征及其机制

覃艳春¹,黄衍强¹,陆钢²(),黄干荣¹,唐华英¹(),戴园园¹

^1.右江民族医学院基础医学院病原生物学与免疫学教研室，广西百色 533000
^2.右江民族医学院附属医院烧伤整形与创面修复外科，广西百色 533000

收稿日期:2022-06-27 出版日期:2023-03-28 发布日期:2023-04-24
通讯作者: 陆钢,唐华英 E-mail:171192301@qq.com;345685650@qq.com
作者简介:覃艳春（1978－），女，广西壮族自治区百色市人，高级实验师，主要从事医学微生物学和免疫学方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(32060018);广西壮族自治区中医药管理局自筹项目(GXZYZ20210135);广西壮族自治区百色市科技局科学研究与技术开发计划项目(20211806);广西壮族自治区百色市科技局百色市区域多发病联合专项计划项目(20224165)

Distribution characteristics of micrflora in various regions of intestinal tract of mice with chronic gastritis infected with Helicobacter Pylori andits mechannism

Yanchun QIN¹,Yanqiang HUANG¹,Gang LU²(),Ganrong HUANG¹,Huaying TANG¹(),Yuanyuan DAI¹

^1.Department of Pathogenic Biology and Immunology，School of Basic Medical Sciences，Youjiang Medical University for Nationalities，Baise 533000，China
^2.Department of Burn Plastic and Wound Repair Surgery，Affiliated Hospital，Youjiang Medical University for Nationalities，Baise 533000，China

Received:2022-06-27 Online:2023-03-28 Published:2023-04-24
Contact: Gang LU,Huaying TANG E-mail:171192301@qq.com;345685650@qq.com

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨幽门螺杆菌（Hp）感染性慢性胃炎模型小鼠肠道各区域菌群种类、特征和菌群差异，并阐明其相关机制。方法 30只C57BL/6小鼠随机分为对照组和感染组，每组15只。对照组小鼠以生理盐水灌胃，感染组小鼠以浓度为1×10⁹CFU·mL^－1的Hp菌悬液灌胃，确认建模成功后采集2组小鼠的十二指肠、空肠和结肠内容物提取总DNA，PCR法扩增，采用高通量测序技术对样本16SrRNAV3-V4区进行测序，通过α和β多样性分析对照组和感染组小鼠肠道菌群的特征、差异和多样性。结果 2组样本聚类分析共产生的操作单元分类（OTU）数目为211个。在门水平，2组样本主要有厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门、变形菌门和疣微菌门5个优势菌门；与对照组比较，感染组小鼠十二指肠、空肠和结肠中的放线菌门丰度明显降低（P<0.05）。在属水平，2组样本主要有乳酸菌属、葡萄球菌属、梭状芽孢杆菌属ⅩⅣa菌属、Turicibacter菌属、阿克曼菌属、双歧杆菌属、Saccharibacteria-genera-incertae-sedis菌属、巴恩斯氏菌属、脱硫弧菌属、另枝菌属和支原体等21个优势菌属；与对照组比较，感染组小鼠十二指肠和结肠中的乳酸菌属及双歧杆菌属丰度明显降低（P<0.05），支原体丰度明显升高（P<0.05）。OTU主成分分析（PCA），2组间主成分比较差异无统计学意义（P>0.05）。Alpha多样性分析，shannon指数，对照组与感染组小鼠的十二指肠和空肠菌群多样性比较差异有统计学意义（P<0.01），感染组菌群多样性降低；simpson指数，对照组与感染组小鼠的十二指肠、空肠和结肠菌群多样性比较差异有统计学意义（P<0.05），感染组菌群多样性降低。Welch’s t-test分析，2组小鼠肠道各区域多数菌群丰度比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 Hp感染性慢性胃炎小鼠肠道各区域中菌群种类和特征发生改变，益生菌丰度降低，支原体丰度升高，其机制可能与Hp的定植改变肠道微环境有关。

关键词: 幽门螺杆菌, 胃炎, 肠道菌群, 小鼠，C57BL/6, 高通量测序技术

Abstract:

Objective To investigate the types， characteristics， and differences of microflora in various regions of the intestinal tract of the mice with chronic gastritisinfected with Helicobacter pylori （Hp）， and to clarify the related mechanism. Methods Thirty C57BL/6 mice were randomly divided into control group and infection group， and there were 15 mice in each group. The mice in control group were given normal saline， and the mice in infection group were given Hpsuspension with the concentration of 1×10⁹ CFU·mL^－1. After the model was successful builted， the contents of duodenum， jejunum， and colon of the mice in two groups were collected to extract the total DNA， and PCR amplification was performed； the 16SrRNAV3-V4 region was sequenced through high-throughput sequencing technique；the characteristics， differences，and diversities of the microflora in various regions of intestinal tract of the mice in control and infection group were analyzed by α and β diversity analysis. Results The total number of operational taxonomic unit（OTU） in two groups generated by cluster analysis samples was 211. At the phylum level， there were 5 dominant bacteria such as Firmicutes， Bacteroidetes， Actinomyces， proteobacteria， and Verrucomicrobia； compared with control group， the abundances of Actinobacteria in the duodenum， jejunum and colon of the mice in infection group were significantly decreased （P<0.05）.At the genus level，there were 21 dominant bacteria such as Lactobacillus， Staphylococcus， Clostridium Bacillus-ⅩⅣa， Turicibacter， Akkermansia， Bifidobacterium， Saccharibacteria-genera-incertae-sedis， Barnesia， Desulfovibrio， Alternaria， and Mycoplasma and so on； compared with control group， the abundances of Lactobacillus and Bifidobacterium in the duodenum and colon of the mice in infection group were significantly decreased （P<0.05）， and the abundance of Mycoplasma was significantly increased （P<0.05）.The OTU principal component analysis （PCA） results showed that there were no significant differences in the principal components between two groups（P>0.05）.In the Alpha diversity analysis，the shannon index analysis results showed that there were significant differences in the diversities of duodenum and jejunum microflora of the mice between control group and infection group（P<0.01），and the diversity of microflora in infection group was decreased； the simpson index analysis results showed that there were statistically significant differences in the diversities of duodenum， jejunum and colon microflora of the mice between control group and infection group （P<0.05）；and the diversity of microflora in infection group was decreased.The Welch’s t-test analysis results showed that the abundances in various regions of intestinal tract of the mice in two groups had signifricant differences（P<0.05）. Conclusion The types and characteristics of the microflora in various regions of intestinal tract of the mice with chronic gastritis infected with Hp change， the abundance of the probiotics is decreased and the abundance of Mycoplasma is increased. Its mechanism may be related with the changes of intestinal microenviroment，induced by the colonization of Hp.

Key words: Helicobacter Pylori, Gastritis, Intestinal microflora, Mice，C57BL/6, High-throughput sequencing technique

中图分类号:

R378

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图/表 10

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参考文献 23

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Sample	Number of sequence	Number of OTU
CJ1	27 366.00	302.00
CJ2	29 804.00	305.00
CJ3	24 558.00	303.00
CK1	27 111.00	275.00
CK2	47 956.00	295.00
CK3	26 171.00	268.00
CS1	24 035.00	251.00
CS2	27 812.00	247.00
CS3	35 167.00	266.00
SJ1	43 772.00	321.00
SJ2	41 618.00	314.00
SJ3	39 990.00	313.00
SK1	42 375.00	332.00
SK2	27 074.00	311.00
SK3	71 118.00	436.00
SS1	29 134.00	273.00
SS2	25 936.00	258.00
SS3	26 312.00	257.00

Number	Genus	CS	CJ	CK	SS	SJ	SK
1	Lactobacillus	37.41	18.53	34.09	33.20	17.05	11.33
2	Staphylococcus	0.24	0.17	0.19	26.84	0.20	1.56
3	Clostridium_ⅩⅣa	3.04	0.41	2.43	7.08	0.29	3.12
4	Turicibacter	0.42	6.41	0.35	0.43	1.54	1.01
5	Akkermansia	0.20	0.91	0.15	0.25	4.72	0.98
6	Bifidobacterium	0.88	0.90	1.88	0.49	0.43	1.69
7	Saccharibacteria_genera_incertae_sedis	1.20	0.74	1.44	0.29	0.44	2.11
8	Barnesiella	1.05	2.41	0.31	0.17	1.63	0.27
9	Desulfovibrio	1.23	0.16	1.58	0.15	0.18	0.56
10	Alistipes	0.03	2.00	0.02	0.03	1.46	0.07
11	Mycoplasma	0.00	0.00	0.00	1.11	0.02	1.89

Alpha	Control group	Infection group	P	P adjusted	P formaticant	P signif
Ace	CS	SS	0.27	1.00	0.27	>0.05
	CJ	SJ	0.20	1.00	0.20	>0.05
	CK	SK	0.15	1.00	0.15	>0.05
Chao	CS	SS	0.48	1.00	0.48	>0.05
	CJ	SJ	0.10	1.00	0.10	>0.05
	CK	SK	0.16	1.00	0.16	>0.05
Shannon	CS	SS	0.10	0.29	0.10	>0.05
	CJ	SJ	0.21	0.29	0.21	>0.05
	CK	SK	<0.01	0.02	<0.01	<0.01
Simpson	CS	SS	0.01	0.05	0.01	<0.01
	CJ	SJ	0.01	0.05	0.01	<0.05
	CK	SK	<0.01	<0.01	<0.01	<0.01

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