虎杖苷对实验性哮喘小鼠气道炎症的影响及其机制

doi:10.13481/j.1671-587x.20200601

摘要/Abstract

摘要： 目的

探讨虎杖苷（PD）对卵清蛋白（OVA）诱导哮喘小鼠气道炎症的影响，阐明其可能作用机制。

方法

将 50只雌性BALB/c 小鼠随机分成对照组， OVA组和低、中、高剂量PD组，每组10只。采用OVA致敏及激发制备实验性小鼠哮喘模型。于实验第1、7和14天采用OVA+Al （ OH）₃混合液腹腔注射致敏小鼠。从第21天起，低、中和高剂量PD组小鼠分别腹腔注射15、30和45 mg·kg^－1PD治疗液，对照组和OVA组小鼠采用生理盐水代替。每次给药1 h后，OVA组和各剂量PD组小鼠连续采用3% OVA 雾化激发，对照组小鼠采用生理盐水代替。HE和PAS染色法观察各组小鼠肺组织病理形态表现，Diff-Quick法检测各组小鼠肺泡灌洗液中（BALF）细胞总数和嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数，ELISA法检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素5（IL-5）和白细胞介素13（IL-13）水平，免疫组织化学染色法观察各组小鼠肺组织中沉默信息调节因子 1 （SIRT1）及核因子κB （NF-κB） p65表达情况，Western blotting法检测各组小鼠肺组织中SIRT1和乙酰化NF-κB p65蛋白表达水平。

结果

与对照组比较，OVA组小鼠气管壁增厚，气道周围大量炎症细胞浸润，杯状细胞明显增生；与OVA组比较，各剂量PD组小鼠上述表现改善。与对照组比较，OVA组小鼠BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数明显增多（P<0.05），IL-4、IL-5和IL-13水平明显升高（P<0.05）；与OVA组比较，中和高剂量PD组小鼠BALF中细胞总数、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞减少（P<0.05），IL-4、IL-5和IL-13水平降低（P<0.05）。与对照组比较，OVA组小鼠肺组织中SIRT1和NF-κB p65及乙酰化NF-κB p65蛋白表达水平明显升高（P<0.05）；与OVA组比较，中和高剂量PD组小鼠肺组织中SIRT1乙酰化水平升高（P<0.05），NF-κB p65和乙酰化NF-κB p65蛋白表达水平降低（P<0.05）。

结论

PD能减轻哮喘小鼠气道炎症，其作用机制可能与SIRT1／NF-κB通路有关联。

关键词: 虎杖苷, 沉默信息调节因子1, 核因子-κB p65, 哮喘, 气道炎症

Abstract: Objective

To investigate the effect of polydatin（PD） on the airway inflammation in the ovalbumin（OVA）-induced asthmatic mice，and to clarify its possible mechanism.

Methods

A total of 50 female BALB / c mice were randomly divided into control group， OVA model group， low，middle and high doses of PD groups；there were 10 mice in each group.The experimental asthmatic mouse models were established by OVA induction and stimulation. The mice were sensitized by intraperitoneal injection the mixture of OVA and Al （OH）₃on the 1st， 7th and 14th days of experiment. From the 21st day， the mice in different doses of PD groups were injected with 15，30，and 45 mg·kg^－1PD， while the mice in control group and OVA group were given normal saline. HE and PAS staining were used to observe the pathomophology of lung tissue of the mice in various groups； Diff-Quick method was used to detect the total number of cells and the number of eosinophils， neutrophils and lymphocytes in bronchoalveolar lavage fluid（BALF）； the levels of IL-4， IL-5， and IL-13 in BALF of the mice in various groups were detected by ELISA method； immunohistochemistry was used to observe the expressions of SIRT1 and NF-κB p65 in lung tissue of the mice in various groups； Western blotting method was used to detect the expression levels of SIRT1 protein and acetylized NF-κB p65 protein in lung tissue of the mice in various groups.

Results

Compared with control group，the airway wall of the mice in OVA group was thickened， a large number of inflammatory cells infiltrated around the airway and the goblet cells were proliferated significantly.Compared with OVA group，the findings mentioned above in different doses of PD groups were improved. Compared with control group， the total number of cells，the number of eosinophils， neutrophils，and lymphocytes and the levels of IL-4， IL-5， and IL-13 in BALF of the mice in OVA group were increased （P<0.05）. Compared with OVA group， the total number of cells，the number of eosinophils and neutrophils， and the levels of IL-4， IL-5， and IL-13 in BALF of the mice in middle and high doses of PD groups were decreased （P<0.05）. Compared with control group， the expression levels of SIRT1， NF-κ B p65 and acetylized NF-κB p65 proteins in lung tissue of the mice in OVA group were significantly increased （P<0.05）. Compared with OVA group， the expression levels of SIRT1 protein in lung tissue of the mice in middle and high doses of PD groups were increased （P<0.05）， while the expression levels of NF-κB p65 and acetylized NF-κB p65 proteins in ling tissue of the mice in middle and high doses of PD groups were decreased （P<0.05）.

Conclusion

PD can alleviate the airway inflammation in the asthmatic mice， and its mechanism may be related to the SIRT1/NF-κB pathway.

Key words: polydatin, silent information regulator of transcription 1, nuclear factor-kappaB p65, asthma, airway inflammation

中图分类号:

R562.25

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