p21waf1基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

doi:卫生部临床学科重点科研项目资助课题，吉林

p21^waf1基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

姜艳芳¹,谭岩¹,赵平伟²,刘力华¹,方艳秋¹,许淑芬¹

1.　吉林大学第一医院中心实验室,吉林　长春130021;2. 吉林大学第四医院肝胆外科,吉林长春130011

收稿日期:2004-05-31 修回日期:1900-01-01 出版日期:2005-03-28 发布日期:2005-03-28

Cloning of p21^waf1 gene and its high expression in E.coli JM109

JIANG Yan-fang¹, TAN Yan¹, ZHAO Ping-wei², LIU Li-hua¹, FANG Yan-qiu¹, Xu Shu-fen¹

1. Department of Central Laboratory, First Hospital, Jilin University, Changchun130021, China;2 Department of Hepatobiliary Surgery, Fourth Hospital,Jilin University, Changchun 130011, China

Received:2004-05-31 Revised:1900-01-01 Online:2005-03-28 Published:2005-03-28

摘要/Abstract

摘要： 目的:构建人p21^waf1基因的原核表达载体并在大肠杆菌JM109中高效表达。方法:从人肝细胞中分离总RNA，经逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）得到p21^waf1全基因。用原核细胞表达载体构建了pBV220/p21^waf1重组质粒，经DNA测序确认后，将其转化到大肠杆菌JM109进行表达、初步纯化。结果:SDS-PAGE凝胶电泳分离显示在分子量21 000处有一诱导蛋白带，薄层扫描显示表达产物在诱导5 h时可达细菌总蛋白的38%，Western blotting证明表达产物与抗人P21^waf1单克隆抗体有特异性免疫反应。结论:成功构建出p21^waf1表达载体，诱导产生蛋白经检测证实为P21^waf1蛋白。

关键词: 克隆, 分子, 基因表达

Abstract: Objective To construct the pronucleus expression vector of human p21^waf1and express it in E.coli strain of JM109. Methods The total RNA was isolated from human hepatocytes, and p21^waf1 was cloned by RT-PCR, the PCR product was ligated with PGEM-T vector and sequenced. Then the target sequence was inserted into an temperature-sensitive expression vector pBV220 and expressed in E.coli JM109.The recombinant protein was identified by immunoblot. Results DNA sequencing confirmed that the sequence of cloned p21^waf1 was identical to the published sequence. The recombinant plasmid pBV220/p21^waf1 was transformed into E.coli JM109 and over- expressed during 42℃ induction. After induction for 5 h, the expression products showed a high expression level of recombinant protein with 21 000, and was more than 38% of the total bacterial protein. Western blotting analysis indicated that the the recombinant protein could react specifically with anti-P21^waf1 antibody. Conclusion The p21^waf1 expression vector is constructed successfully, and the induced-protein is confirmed as P21^waf1 protein by detection.

Key words: cloning, molecular, gene expression

中图分类号:

姜艳芳,谭岩,赵平伟,刘力华,方艳秋,许淑芬. p21^waf1基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达[J]. J4, 2005, 31(2): 209-212.

JIANG Yan-fang, TAN Yan, ZHAO Ping-wei, LIU Li-hua, FANG Yan-qiu, Xu Shu-fen. Cloning of p21^waf1 gene and its high expression in E.coli JM109[J]. J4, 2005, 31(2): 209-212.

[1]	陈炳鹏, 任明, 李容杭, 韩青, 王金成. 基因芯片技术检测NOB1对骨肉瘤细胞相关基因的调控作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(05): 929-934.
[2]	治丁铭, 隋殿军, 岂蕊, 苗永迪, 韩冬, 娄石磊, 邱悦, 孙聪. 基于网络药理学探讨葛根治疗高脂蛋白血症的潜在作用靶点[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(04): 724-730.
[3]	刘少伟, 姜欢, 王晓龙, 李梦红, 陈玉, 唐中元, 胡敏. 兔抗破骨细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶多克隆抗体的制备和应用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(03): 661-666.
[4]	张艳霞, 李跃辉, 张丽红, 张年萍, 闫燕艳, 杨小会, 冯湘玲. 沉默HOXA13基因对肝癌HepG₂和QGY-7703细胞恶性表型的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(02): 315-320.
[5]	田丹, 孙新, 安晓婷, 张立岩, 刘杨, 佟海滨, 李坦, 申野, 满枋霖, 颜伟群. HSA-TP5融合基因表达载体的构建及其真核表达[J]. 吉林大学学报(医学版), 2017, 43(05): 948-952.
[6]	林玉茵, 陈文生, 郭晓兰, 谭茵, 贺小松, 戴建威. 人生长激素释放激素受体剪接变异体1型对人肝癌细胞HepG2增殖的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2017, 43(03): 474-478.
[7]	崔磊华, 及昕, 李明贺, 韩明林, 张宁, 孙兰芳, 韩成敏. miR-34a在牙龈鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(06): 1099-1103.
[8]	辛桂杰, 朱海超, 李昊, 温剑平. 最低限度免疫定义基因表达的HCV多表位DNA疫苗对小鼠细胞免疫的诱导作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(06): 1071-1075.
[9]	廖蕤堃, 邓小林, 曾丹妮, 吴晓凤, 文明. SPIO-shRNA分子探针注射不同时间点荷瘤裸鼠肿瘤区域组织信号变化及MRI最佳扫描时间[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(06): 1220-1225.
[10]	刘楠楠, 李玉林, 孙立伟, 姜晶, 张继红. Smad2和Smad4蛋白在乳腺癌组织中的表达及其意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(04): 763-767.
[11]	齐玲, 王玮瑶, 郑中华, 张以忠, 赵丽微, 钟秀宏, 赵东海, 杨淑艳, 杨宁江, 任旷, 于洪泉. SUMO及SUMO化修饰蛋白在恶性胶质瘤发生中的作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(01): 7-10.
[12]	姜朋丽, 付彤, 武盼盼, 郑超, 韩冰, 范志民. 不同T分期乳腺癌患者分子分型与腋窝淋巴结转移的关系及其临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(01): 144-148.
[13]	陈为, 张葵, 张宸豪, 李强, 李妍. OX-LDL介导内皮细胞损伤及其对TLR-4和EpCAM表达的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2015, 41(06): 1144-1149.
[14]	闫琰, 张茜, 马婧, 李建宁, 张薇, 孙玉宁. 犬博卡病毒非结构基因NP1多克隆抗体的制备与鉴定[J]. 吉林大学学报(医学版), 2015, 41(04): 864-869.
[15]	杨柳, 汪小菀, 王冰瑜, 宋润敏, 李江. GST-hZimp10融合蛋白的重组及抗体制备[J]. 吉林大学学报(医学版), 2015, 41(03): 656-661.