人肌红蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

doi:吉林省科技厅社会发展计划项目资助课题（20

人肌红蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

车媛媛¹,许淑芬¹,方艳秋¹,段秀梅¹,史宏博¹,刘晓林¹,刘力华¹,候巍²，谭岩¹

1.吉林大学第一医院中心实验室，吉林长春 130021；2.解放军第461医院检验科，吉林长春 130021

收稿日期:2006-05-15 修回日期:1900-01-01 出版日期:2007-03-28 发布日期:2007-03-28
通讯作者: 谭岩

Cloning, expression and purification of human myoglobin in E.coli

Received:2006-05-15 Revised:1900-01-01 Online:2007-03-28 Published:2007-03-28
Contact: TAN Yan

摘要/Abstract

摘要： 目的：构建人肌红蛋白（Mb）原核表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白pQE。方法：根据已报道的人Mb基因序列,采用RT-PCR技术从人骨骼肌组织中获得肌红蛋白cDNA序列。将所得的PCR产物插入克隆载体pGEM-Teasy中,得重组质粒，经酶切、PCR及测序鉴定正确后，将酶切目的片段插入原核表达载体pQpQEE30中并转化大肠杆菌(E.coli)M15,通过IPTG诱导表达出带有6个组氨酸的融合蛋白。经镍固定金属亲和层析纯化。结果：序列分析表明，人Mb基因成熟肽编码区含有465 bp,编码153个氨基酸;与GenBank(NM203378) 中已报道的Mb核苷酸序列有98.50 %同源性。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE 电泳和免疫印迹分析显示,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的31%,相对分子质量约为16 700，并与商品化的人Mb单抗呈特异性反应。经Ni²⁺-NTA agarose 纯化获得SDS-PAGE 电泳下单一条带。结论：在大肠杆菌中获得了人Mb的高效表达。

中图分类号:

车媛媛,许淑芬,方艳秋,段秀梅,史宏博,刘晓林,刘力华,候巍，谭岩. 人肌红蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化[J]. J4, 2007, 33(2): 369-372.

[1]	陈炳鹏, 任明, 李容杭, 韩青, 王金成. 基因芯片技术检测NOB1对骨肉瘤细胞相关基因的调控作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2018, 44(05): 929-934.
[2]	田丹, 孙新, 安晓婷, 张立岩, 刘杨, 佟海滨, 李坦, 申野, 满枋霖, 颜伟群. HSA-TP5融合基因表达载体的构建及其真核表达[J]. 吉林大学学报(医学版), 2017, 43(05): 948-952.
[3]	辛桂杰, 朱海超, 李昊, 温剑平. 最低限度免疫定义基因表达的HCV多表位DNA疫苗对小鼠细胞免疫的诱导作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(06): 1071-1075.
[4]	齐玲, 王玮瑶, 郑中华, 张以忠, 赵丽微, 钟秀宏, 赵东海, 杨淑艳, 杨宁江, 任旷, 于洪泉. SUMO及SUMO化修饰蛋白在恶性胶质瘤发生中的作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(01): 7-10.
[5]	邵敏, 王新颖, 刘星, 王燕, 周鹤峰, 葛正龙. hISO基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达及鉴定[J]. 吉林大学学报(医学版), 2016, 42(01): 59-63.
[6]	刘姝，王霁雪,吴雅臻，王淑梅. 色素上皮源性因子基因转染对巨噬细胞诱导大鼠增生性玻璃体视网膜病变的抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(6): 1181-1185.
[7]	孙晓宇，何钟勤，刘晓红，高心，钟丞，薛莹. 殊异韦荣菌sahH基因的克隆、表达和纯化[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(4): 704-709.
[8]	张雪，陈萍，毕云枫，曲宁宁，刘琼，孙鑫泽. 木糖氧化产碱菌中亚硝酸盐还原酶基因的克隆与表达[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(4): 690-693.
[9]	贾晓辉，罗建民，刘亚平，尹婉宜，张丽红. SHIP和Caspase-3 mRNA在骨髓增生异常综合征患者骨髓组织中的表达及其临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(3): 554-558.
[10]	方珍，鞠文，秦亚楠，孟日增，潘风光. 大肠杆菌O157∶H7 异硫氰酸荧光素标记抗体的制备及评价[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(1): 165-169.
[11]	贺梦子，赵银龙，刘晓冬，马淑梅，刘欣. 甲状腺乳头状癌组织中差异表达miRNA及其靶基因的筛选和预测[J]. 吉林大学学报(医学版), 2013, 39(1): 99-103.
[12]	刘金华\|史艳宇\|马路遥\|魏春艳\|邵丽筠\|王海龙. 几种常见肠道致病菌多重PCR检测的效果评价[J]. J4, 2012, 38(2): 382-385.
[13]	刘悦\|李菁华\|史红艳\|温剑平\|孙延波. 肠出血性大肠埃希菌O157噬菌体的生物学特性[J]. J4, 2012, 38(1): 79-83.
[14]	姬长合\|王靖. 酿酒酵母无机焦磷酸酶基因在大肠杆菌中的表达及其意义[J]. J4, 2012, 38(1): 70-74.
[15]	伍贤军\|缪璇\|程秀\|王妍青\|辻一郎\|李晓萌. GFP-SUMO-3融合蛋白的重组及其在LNCaP细胞中的表达和定位[J]. J4, 2011, 37(6): 1024-1027.