吴 樱1,黄 鹤1*,周加文2,甘一如1
WU Ying1, HUANG He1*, ZHOU Jia-wen2, GAN Yi-ru1
摘要: 目的:探讨6聚组氨酸序列与葡激酶基因序列融合表达及其表达产物的纯化方法。 方法:将葡激酶的cDNA序列连入pET-29b质粒,转入E.coli BL21(DE3)进行表达。 应用镍金属离子螯合层析及凝胶过滤层析法纯化表达产物,采用溶圈法对纯化产物进行生物学活性测定。 结果:6聚组氨酸与葡激酶的可溶性融合蛋白在BL21(DE3)中的表达量约占菌体可溶性蛋白总量的25%;螯合层析纯化后其纯度可达90%以上;再应用Sephacryl S-200HR可使其纯度提高到98%以上;测得其比活性为5.0×104 AU•mg-1。 结论:利用pET-29b载体成功进行了重组葡激酶基因的表达及其表达产物的亲和纯化。
中图分类号: