pCMV-Myc-PIASxβ重组质粒的构建与蛋白表达

J4 ›› 2009, Vol. 35 ›› Issue (3): 415-418.

pCMV-Myc-PIASxβ重组质粒的构建与蛋白表达

李江¹|张俊芳²|甄园丽²|杨南扬²|李晓萌²

1.吉林大学口腔医院修复科|吉林长春 130041； 2东北师范大学生命科学学院|吉林长春 130024

收稿日期:2008-09-19 出版日期:2009-05-28 发布日期:2009-08-14
通讯作者: 李江 E-mail:lijiang69@yahoo.com.cn
作者简介:李江（1969-）|男|吉林省梅河口市人|副教授,医学博士|主要从事生物工程研究。
基金资助:
国家自然科学基金青年科学基金资助课题（30700827）；吉林省科技厅国际合作项目资助课题(20070719)；教育部科学技术研究重点项目资助课题（108047）；长春市国际合作专项资助课题（2007125）

Construction of recombinant plasmid pCMV-Myc-PIASx&beta|and its protein expression

LI Jiang¹,ZHANG Jun-fang²,ZHEN Yuan-li²,YANG Nan-yang²,LI Xiao-meng²

1. |Department of Prothesis,Stomatology Hospital,Jilin University|Changchun 130041,China;2. School of Life Sciences,Northeast Normal University,Changchun 130024,China

Received:2008-09-19 Online:2009-05-28 Published:2009-08-14

摘要/Abstract

摘要：

目的:通过基因重组方法构建pCMV-Myc-PIASxβ质粒，在真核细胞中高效表达重组蛋白并进行检测。方法:用SalⅠ和NotⅠ将PIASxβ片段从pGADT7载体中酶切后，利用DNA重组技术将其定向插入pCMV-Myc载体中。获得正确重组质粒后，瞬转CHO细胞系，用Western blotting检测Myc-PIASxβ重组融合蛋白表达。结果:经过酶切，片段回收，连接转化，获得重组质粒。重组pCMV-Myc-PIASxβ克隆通过酶切和测序鉴定其正确性。EcoRⅠ酶切鉴定，pCMV-Myc-PIASxβ为一条大小5 641 bp的条带；XbaⅠ酶切鉴定，pCMV-Myc-PIASXβ为2条大小分别为3 291和2 349 bp 的条带，符合预计大小。Western blotting检测证实，在相对分子质量68 000处（PIASxβ融合蛋白）有特异的蛋白表达条带，与重组质粒相符。结论：成功构建了pCMV-Myc-PIASxβ重组质粒，为深入研究PIAS家族的功能奠定良好的基础。

关键词: PIASxβ, pCMV-Myc载体, 重组质粒, 基因表达

Abstract:

Abstract:Objective To construct the recombinant plasmid pCMV-Myc-PIASXβ and express the fusion protein in mammalian cells.Methods PIASxβ fragment was digested from the original vector pGADT7 with SalⅠand NotⅠ,and then was inserted into the targeted pCMV-Myc vector by the recombinant DNA technique.After identification,the recombinant plasmid was transfected　into CHO cells.The expression of recombinant Myc-PIASxβ fusion protein was detected by Western blotting.
Results By the restriction enzyme digestion,fragment purification,ligation and transformation,the recombinant plasmid was obtained.The right recombinant plasmid pCMV-Myc-PIAS3 was identified with enzyme digestion and sequencing.By EcoRⅠ digestion analysis,pCMV-Myc-PIASxβ showed a 5641 bp band.By XbaⅠdigestion analysis,pCMV-Myc-PIASxβ showed two expected band of 3291 bp and 2349 bp.A specific protein expression band at 68 000 (PIASxβ fusion protein) was showed in Western blotting,which matched recombinant plasmid.
Conclusion The recombinant plasmid of pCMV-Myc-PIASxβ is sucssesefully constructed,which provids a good tool for further function study on PIAS family．

Key words: PIASxβ, pCMV-Myc vector, recombinant plasmid, genen expression

中图分类号:

李江, 张俊芳, 甄园丽, 杨南扬, 李晓萌. pCMV-Myc-PIASxβ重组质粒的构建与蛋白表达[J]. J4, 2009, 35(3): 415-418.

LI Jiang, ZHANG Dun-Fang, JUAN Wan-Li, YANG Na-Yang, LI Xiao-Meng. Construction of recombinant plasmid pCMV-Myc-PIASx&beta|and its protein expression[J]. J4, 2009, 35(3): 415-418.

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