威灵仙总皂苷对类风湿关节炎大鼠外周血T淋巴细胞亚群的影响

doi:10.13481/j.1671-587x.20200621

摘要/Abstract

摘要： 目的

观察威灵仙总皂苷（TSC）对类风湿关节炎（RA）大鼠外周血T淋巴细胞亚群和血清炎性因子水平的影响，并阐明其对RA的抑制作用机制。

方法

将50只SD大鼠随机分为对照组（给予生理盐水），模型组（给予生理盐水），低、中和高剂量TSC组（给予50、100、200 mg·kg^－1 TSC）；每组10只。除对照组外，其余各组建立RA大鼠模型。连续给药6周后，测定大鼠踝关节肿胀度并计算大鼠关节炎指数，流式细胞术检测各组大鼠外周血CD4⁺T淋巴细胞和CD8⁺T淋巴细胞百分率及CD4⁺/CD8⁺T淋巴细胞比值，ELISA法检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素6（IL-6）水平，称量各组大鼠脾脏质量并计算脾脏指数。

结果

与对照组比较，模型组大鼠关节炎指数明显升高（P<0.05），CD4^＋T淋巴细胞百分率和CD4^＋/CD8^＋T淋巴细胞比值明显升高（P<0.05），CD8^＋T淋巴细胞百分率明显降低（P<0.05），血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平和脾脏指数明显升高（P<0.05）；与模型组比较，低、中和高剂量TSC组大鼠关节炎指数明显降低（P<0.05），CD4^＋T淋巴细胞百分率和CD4^＋/CD8^＋T淋巴细胞比值明显降低（P<0.05），CD8^＋T淋巴细胞百分率明显升高（P<0.05），血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平及脾脏指数明显降低（P<0.05）；与低剂量TSC组比较，中和高剂量TSC组大鼠关节炎指数明显降低（P<0.05），CD4^＋T淋巴细胞百分率和CD4^＋/CD8^＋T淋巴细胞比值明显降低（P<0.05），CD8^＋T淋巴细胞百分率明显升高（P<0.05），血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平及脾脏指数明显降低（P<0.05）；与中剂量TSC组比较，高剂量TSC组大鼠关节炎指数明显降低（P<0.05），CD4^＋T淋巴细胞百分率和CD4^＋/CD8^＋T淋巴细胞比值明显降低（P<0.05），CD8^＋T淋巴细胞百分率明显升高（P<0.05），血清TNF-α、IL-1β和IL-6水平及脾脏指数明显降低（P<0.05）。

结论

TSC可通过调节CD4⁺和CD8⁺T淋巴细胞亚群百分率，抑制炎性细胞因子分泌，对RA起到抑制作用，且呈剂量依赖性。

关键词: 威灵仙总皂苷, 类风湿关节炎, T淋巴细胞亚群, 炎性因子

Abstract: Objective

To observe the effect of total saponins of clematis （TSC） on the T lymphocyte subsets in peripheral blood and the serum levels of inflammatory factors in the rats with rheumatoid arthritis （RA）， and to illuminate its inhibitory effect on RA.

Methods

A total of 50 SD rats were randomly divided into control group （given normal saline）， model group （given normal saline）， low， medium， and high doses of TSC groups （given 50， 100， and 200 mg·kg^－1TSC）， and there were 10 rats in each group. In addition to control group， the RA rat models were established in the other groups. The swelling degrees of ankle joint of the rats in various groups were measured and the arthritis indexes were calculated after 6 weeks of administration. Flow cytometry was used to detect the percentages of CD4⁺ T lymphocytes and CD8⁺ T lymphocytes in peripheral blood of the rats in various groups；ELISA method was used to detect the levels of serum tumor necrosis factor-α（TNF-α），interleukin-1β（IL-1β）， and interleukin-6（IL-6） of the rats in various groups； the spleen weights of the rats in various groups were measured and the spleen index was calculated.

Results

Compared with control group， the arthritis index of the rats in model group was significantly increased （P<0.05）， the percentage of CD4⁺ T lymphocytes and the ratio of CD4⁺/CD8⁺T lymphocytes were significantly increased （P<0.05）， the percentage of CD8⁺ T lymphocytes was significantly decreased （P<0.05）， and the levels of serum TNF-α，IL-1β，and IL-6 and the spleen index were significantly increased （P<0.05）. Compared with model group， the arthritis indexes of the rats in low， medium and high doses of TSC groups were significantly decreased （P<0.05）， the percentages of CD4⁺ T lymphocytes and the ratioes of CD4⁺/CD8⁺T lymphocytes were significantly decreased （P<0.05）， the percentages of CD8⁺ T lymphocytes was significantly increased （P<0.05）， and the levels of serum TNF-α， IL-1β，and IL-6 and the spleen indexes were significantly decreased （P<0.05）. Compared with low dose of TSC group， the arthritis indexes of the rats in medium and high doses of TSC groups were significantly decreased （P<0.05）， the percentages of CD4⁺ T lymphocyte and the ratios of CD4⁺/CD8⁺T lymphocytes were significantly decreased （P<0.05）， the percentages of CD8⁺ T lymphocytes were significantly increased （P<0.05）， and the levels of serum TNF-α， IL-1β and IL-6 and the spleen indexes were significantly decreased （P<0.05）. Compared with medium dose of TSC group， the arthritis index of the rats in high dose of TSC group were significantly decreased （P<0.05）， the percentage of CD4⁺ T lymphocytes and the ratio of CD4⁺/CD8⁺T lymphocytes were significantly decreased （P<0.05）， the percentage of CD8⁺ T lymphocytes was significantly increased （P<0.05）， and the levels of serum TNF-α， IL-1β ，and IL-6 and the spleen index were significantly decreased （P<0.05）.

Conclusion

TSC can inhibit RA by regulating the percentages of CD4⁺and CD8⁺ T lymphocytes and inhibiting the secretion of inflammatory cytokines in a dose-dependent manner.

Key words: total saponins of clematis, rheumatoid arthritis, T lymphocyte subsets, inflammatory cytokines

中图分类号:

R593.22

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图/表 5

表1

表2

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表3

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Group	Ankle swelling degree(l/mm)		Arthritis index
Group	Pre-treatment	Post-treatment	Pre-treatment	Post-treatment
Control	0	0	0	0
Model	1.30±0.21	1.29±0.25	7.92±2.08	7.85±1.68
TSC
Low dose	1.29±0.24	0.92±0.11^*○	8.01±1.87	5.90±1.24^*○
Medium dose	1.31±0.25	0.80±0.10^*△○	7.88±1.61	5.32±0.83^*△○
High dose	1.33±0.20	0.69±0.08^*△#○	7.96±1.55	4.62±0.71^*△#○

Group	Percentage of CD4⁺T lymphocytes	Percentage of CD8⁺T lymphocytes	Ratio of CD4⁺/CD8⁺T lymphocytes
Control	36.84±0.96	24.13±1.52	1.53±0.04
Model	42.30±1.05^*	14.54±1.20^*	2.91±0.05^*
TSC
Low dose	40.20±0.73^△	16.89±1.13^△	2.38±0.07^△
Medium dose	38.84±1.17^△#	20.04±1.68^△#	1.94±0.05^△#
High dose	37.21±0.99^△#	21.53±1.53^△#	1.73±0.08^△#○

Group	TNF-α	IL-1β	IL-6
Control	0.16±0.03	0.15±0.02	0.65±0.04
Model	0.94±0.05^*	0.57±0.05^*	1.37±0.09^*
TSC
Low dose	0.53±0.06^△	0.35±0.04^△	0.97±0.05^△
Medium dose	0.38±0.05^△#	0.28±0.05^△#	0.78±0.06^△#
High dose	0.26±0.03^△#○	0.22±0.03^△#○	0.71±0.05^△#○

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