小鼠LIF编码基因的克隆与真核表达载体pcDNA3.1-LIF的构建

doi:吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题（20

小鼠LIF编码基因的克隆与真核表达载体pcDNA3.1-LIF的构建

姜秋¹，艾永华¹，聂代邦²，孙宏晨¹，欧阳红生²

1.吉林大学口腔医院儿童牙病科，吉林长春 130041； 2.吉林大学畜牧兽医学院生物技术系，吉林长春 130062

收稿日期:2007-11-21 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-09-28 发布日期:2008-09-28
通讯作者: 孙宏晨

Cloning of mouse full-lenth LIF gene and construction of  eukaryotic expression vector pcDNA3.1-LIF

JIANG Qiu¹, AI Yong-hua¹, NIE Dai-bang², SUN Hong-chen¹, OUYANG Hong-sheng²

1.Department of Pedodontics，Stomatology Hospital，Jilin University，Changchun 130041，China；2. Department of Biotechnology，School of Animal Science and Veterinary Medicine，Jilin University，Changchun 130062，China

Received:2007-11-21 Revised:1900-01-01 Online:2008-09-28 Published:2008-09-28
Contact: SUN Hong-chen

摘要/Abstract

摘要： 目的：通过克隆小鼠LIF编码基因，构建pcDNA3.1-LIF真核表达载体，为下一步建立转基因动物模型奠定基础。方法：采用ICR雌性小鼠子宫组织，提取总RNA，运用RT-PCR技术，扩增出小鼠LIF基因全长编码序列，采用同源重组方法构建具有新霉素抗性的小鼠LIF真核表达载体pcDNA3.1-LIF。结果：通过PCR获得了约612 bp大小的特异性cDNA片段。经核苷酸序列分析，扩增得到的片段与小鼠LIF cDNA序列同源性为100%。经PCR及酶切鉴定筛选阳性克隆菌，表明LIF编码序列正确连入pcDNA3.1载体中。结论：成功克隆了小鼠LIF编码基因，并构建了真核表达载体pcDNA3.1-LIF。

关键词: 聚合酶链反应, 基因克隆, 真核表达载体, 小鼠, 近交ICR

Abstract: Abstract:Objective To construct an eukaryotic expression vector pcDNA3.1-LIF by cloning mouse LIF genes and provide basis for establishment of transgenic animal models. Methods Total RNA was extracted from the tissue of the ICR mouse uterus .The full-lenth LIF gene of the mouse was amplified by RT-PCR and an eukaryotic expression vector pcDNA3.1-LIF with neomycin resistant was constructed by homologous recombination.Results The　 amplfied fragments was LIF cDNA about 612 bp, it had 100% homogeneity with mouse LIF cDNA sequence by nucleotide sequence analysis. An eukaryotic expression vector pcDNA3.1-LIF with neomycin resistant of the mouse was successfully constructed by the identification of enzyme digestion.Conclusion The mouse LIF gene is successfully cloned and an eukaryotic expression vector pcDNA3.1-LIF is successfully constructed.

Key words: polymerase chain reaction, gene clone, eukaryotic expression vector, mice, inbred ICR

中图分类号:

Q782

姜秋，艾永华，聂代邦，孙宏晨，欧阳红生. 小鼠LIF编码基因的克隆与真核表达载体pcDNA3.1-LIF的构建[J]. J4, 2008, 34(5): 782-785.

JIANG Qiu, AI Yong-hua, NIE Dai-bang, SUN Hong-chen, OUYANG Hong-sheng. Cloning of mouse full-lenth LIF gene and construction of  eukaryotic expression vector pcDNA3.1-LIF[J]. J4, 2008, 34(5): 782-785.

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