小鼠胚胎成纤维细胞的转染与阳性细胞的初步筛选

doi:吉林省科技厅科技发展计划项目资助课题（20

小鼠胚胎成纤维细胞的转染与阳性细胞的初步筛选

姜秋¹，倪雪岩²，聂代邦³，孙宏晨¹

（1.吉林大学口腔医院儿童口腔科，吉林长春 130041；2．首都医科大学附属北京安贞医院口腔医疗中心，北京100029；3．吉林大学畜牧兽医学院生物技术系，吉林长春 130062）

收稿日期:2007-11-21 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-11-28 发布日期:2008-11-28
通讯作者: 孙宏晨

Transfer of mouse fetal fibroblasts and primary selection of positive cells

JIANG Qiu¹,NI Xue-yan², NIE Dai-bang³，SUN Hong-chen¹

（1.Department of Pedodontics，Stomatology Hospital，Jilin University，Changchun 130041，China；2. Department of Stomatology, Beijing Anzhen Hospital,Affiliated to Capital University of Medical Sciences,Beijing 100029,China;3．Department of Animal Biotechnology，School of Animal Science and Veterinary Medicine，Jilin University，Changchun 130062，China）

Received:2007-11-21 Revised:1900-01-01 Online:2008-11-28 Published:2008-11-28
Contact: SUN Hong-chen

摘要/Abstract

摘要： 目的：建立表达白血病抑制因子（LIF）的胚胎成纤维细胞的方法体系，为建立转基因动物模型提供理论依据。方法：以13.5 d ICR小鼠胚胎为材料，采用胰酶消化方法，培养小鼠原代胚胎成纤维细胞。利用脂质体介导方法，将线性化的pcDNA3.1-LIF真核表达载体转染至小鼠胚胎成纤维细胞中。经G418筛选阳性细胞，提取阳性细胞的基因组DNA并测序。结果：通过对小鼠原代胚胎成纤维细胞的分离、培养，获得原代胚胎成纤维细胞。经过转染，建立了表达LIF的胚胎成纤维细胞,并在倒置显微镜下观察到筛选得到的阳性细胞。对阳性细胞克隆质粒测序表明同源性达99%。结论：pcDNA3.1-LIF真核表达载体成功转染到小鼠胚胎成纤维细胞中。

关键词: 成纤维细胞, 转染, 小鼠

Abstract: To establish the method to express leukemia inhibitory factor(LIF) in fetal fibroblasts in order to provide theoretical foundation for establishment of transgenic animal model.Methods Using the fetal of 13.5 d ICR mouse, the primary fetal fibroblasts were cultivated by trypsin enzyme digestion.The lineared eukaryotic expression vector pcDNA3.1-LIF was transferred to the fetal fibroblasts of mouse with liposome induction.The positive cells were selected by G418,genome DNA of the positive cells was extracted and sequenced. Results The primary fetal fibroblasts of mouse were successfully obtained by isolating and culturing, and fetal fibroblasts expressing LIF were established by transferring.The sequencing result demonstrated that the homology of clone plasmid of positive cells was about 99%.Conclusion Eukaryotic expression vector pcDNA3.1-LIF is successfully transferred to the fetal fibroblasts of mouse.

Key words: fetal fibroblasts, transfer, mice

中图分类号:

姜秋，倪雪岩，聂代邦，孙宏晨. 小鼠胚胎成纤维细胞的转染与阳性细胞的初步筛选[J]. J4, 2008, 34(6): 990-993.

JIANG Qiu,NI Xue-yan, NIE Dai-bang，SUN Hong-chen. Transfer of mouse fetal fibroblasts and primary selection of positive cells[J]. J4, 2008, 34(6): 990-993.

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