吉林大学学报(医学版) ›› 2021, Vol. 47 ›› Issue (2): 360-368.doi: 10.13481/j.1671-587X.20210215
Guo HUANG1,Youquan WANG1(),Juan CHEN2
摘要: 探讨miRNA-138-5p过表达对人乳腺癌MCF-7细胞顺铂(DDP)耐药的影响,并阐明其可能机制。 采用浓度梯度递增法诱导MCF-7细胞,建立DDP耐药细胞株MCF-7/DDP,再将miR-138-5p mimics或HIF-1α过表达质粒分别或同时转染至MCF-7/DDP细胞中。将细胞分为阴性对照组(NC组,转染miR-138-5p mimics阴性对照)、miR-138-5p mimics组(转染miR-138-5p mimics)、miR-138-5p mimics+Vector组(共转染miR-138-5p mimics和空载质粒)和miR-138-5p mimics+HIF-1α组(共转染miR-138-5p mimics和HIF-1α过表达质粒),另选未经任何转染的MCF-7/DDP细胞作为空白对照组。采用不同浓度(0、10、20、40、80和100 μmol·L-1)DDP处理细胞24 h,MTT法检测细胞增殖活性,并计算半数抑制浓度(IC50)和耐药指数(RI);实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-138-5p和HIF-1α mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting法检测细胞中HIF-1α、P-gp和MRP1蛋白表达水平;采用TargetScan软件预测miR-138-5p与HIF-1α靶向结合位点,并采用双荧光素酶报告系统验证两者靶向关系。 与亲本MCF-7细胞比较,耐药细胞株MCF-7/DDP对DDP的IC50值明显升高(P<0.01),且RI值为5.72。与亲本MCF-7细胞比较,耐药细胞株MCF-7/DDP中miR-138-5p表达水平明显降低(P<0.01),而HIF-1α mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与空白对照组或NC组比较,miR-138-5p mimics组细胞中miR-138-5p表达水平和细胞凋亡率明显升高(P<0.01),HIF-1α蛋白表达水平和细胞增殖活性明显降低(P<0.01)。双荧光素酶报告系统实验,与NC组比较,miR-138-5p mimics组野生型HIF-1α细胞中荧光素酶活性明显降低(P<0.01)。与miR-138-5p mimics+ Vector组比较,miR-138-5p mimics+HIF-1α组细胞增殖活性明显升高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.01),细胞中HIF-1α、P-gp和MRP1蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。 miRNA-138-5p通过靶向抑制HIF-1α表达和下调耐药相关蛋白P-gp和MRP1表达水平,增强MCF-7/DDP细胞对DDP的敏感性。
中图分类号: