MCM10沉默对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用及其机制

doi:10.13481/j.1671-587X.20210315

摘要/Abstract

摘要： 目的

探讨微小染色体维持蛋白10 （MCM10）基因沉默对乳腺癌细胞的增殖抑制作用，并阐明其作用机制。

方法

将人三阴性乳腺癌（TNBC）MDA-MB-231细胞分为对照组、MCM10干扰组1（shMCM10-1组）和MCM10干扰组2（shMCM10-2组）。构建MCM10慢病毒干扰载体MCM10-1和MCM10-2，分别感染shMCM10-1组和shMCM10-2组MDA-MB-231细胞，对照组MDA-MB-231细胞感染阴性对照病毒。采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法和Western blotting法检测各组MDA-MB-231细胞中MCM10 mRNA和蛋白表达水平，Cellomics计数法检测各组MDA-MB-231细胞的增殖率，流式细胞术检测各组MDA-MB-231细胞凋亡率，采用Caspase3/7活性检测试剂盒检测各组MDA-MB-231细胞中Caspase3/7活性。

结果

与对照组比较，shMCM10-1组和shMCM10-2组MDA-MB-231细胞中MCM10 mRNA表达率明显降低（P<0.01），未检测到MCM10蛋白表达；与对照组比较，shMCM10-1组和shMCM10-2组MDA-MB-231细胞相对增殖倍数明显降低（P<0.01），MDA-MB-231细胞凋亡率明显升高（P<0.01），MDA-MB-231细胞中Caspase3/7 活性明显升高（P<0.01）。

结论

MCM10基因沉默可以抑制MDA-MB-231细胞增殖，促进细胞凋亡，增加细胞中Caspase3/7 活性。

关键词: 微小染色体维持蛋白10, 慢病毒载体, 乳腺肿瘤, MDA-MB-23细胞, 细胞凋亡

Abstract: Objective

To investigate the inhibitory effect of mini-chromosome maintenance protein 10（MCM10） silencing on the proliferation of breast cancer cells，and to elucidate its mechanism.

Methods

The human triple negative breast cancer （TMBC）MDA-MB-231 cells were divided into control group，MCM10 interference group 1 （shMCM10-1 group）and MCM10 interference group 2（shMCM10-2 group）. The lentivirus interference vectors of MCM10-1 group and MCM10-2 were constructed and infected into the MDA-MB231 cells in shMCM10-1 group and shMCM10-2 group，respectively. The MDA-MB-231 cells in control group were infected with the negative control virus. The expression levels of MCM10 in the MDA-MB-231 cells in various groups were measured by Real-time fluorescence quantitative PCR（RT-qPCR） and Western blotting methods； the proliferation of the MDA-MB-231 cells in various groups was monitored by Cellomics Count assay；the apoptotic rates of the MDA-MB-231 cells in various groups were detected by Flow cytometry， and the activities of Caspase3/7 in the MDA-MB-231 cells in various groups were measured by Caspase 3/7 activity detection kit.

Results

The expression levels of MCM10 mRNA in the MDA-MB-231 cells in shMCM10-1 group and shMCM10-2 group were significantly lower than that in control group （P<0.01）， and the expression of MCM10 protein was not found.Compared with control group， the relative proliferation multiples of the MDA-MB-231 cells in shMCM10-1 group and shMCM10-2 group were significantly decreased （P<0.01），and the apoptotic rates of the MDA-MB-231 cells in shMCM10-1 group and shMCM10-2 group were significantly increased （P<0.01），and the activities of Caspase 3/7 in the MDA-MB-231 cells in shMCM10-1 group and shMCM10-2 group were significantly increased （P<0.01）.

Conclusion

MCM10 gene silencing can inhibit the proliferation of the MDA-MB-231 cells， and promote the apoptosis of the MDA-MB-231 cells and increase the activities of Caspase3/7 in the MDA-MB-231 cells.

Key words: mini-chromosome maintenance protein 10, lentivirus vector, breast neoplasm, MDA-MB-231 cells, apoptosis

中图分类号:

R730.2

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