m6A甲基化修饰结合蛋白YTHDF2在食管癌组织中的表达及其对食管癌细胞增殖和迁移的影响

doi:10.13481/j.1671-587X.20220416

吉林大学学报(医学版) ›› 2022, Vol. 48 ›› Issue (4): 962-970.doi: 10.13481/j.1671-587X.20220416

m6A甲基化修饰结合蛋白YTHDF2在食管癌组织中的表达及其对食管癌细胞增殖和迁移的影响

马琰迪¹,卢香云¹,何尚峰¹,俞雪燕¹,胡云华¹,高海霞¹,陈云昭²,禹洁²,王文洁²,李锋^1,³,崔晓宾^1,⁴()

^1.石河子大学医学院病理学系，新疆石河子 832002
^2.江苏省苏州市高新区人民医院病理科，江苏苏州 215000
^3.首都医科大学附属北京朝阳医院病理科，北京 100200
^4.南京大学医学院附属鼓楼医院病理科，江苏南京 210008

收稿日期:2021-11-24 出版日期:2022-07-28 发布日期:2022-07-26
通讯作者: 崔晓宾 E-mail:342029924@qq.com
作者简介:马琰迪（1993－），女，河南省南阳市人，在读硕士研究生，主要从事食管癌基础方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(82160542);新疆生产建设兵团科技局重点领域科技攻关计划项目(2020AB022);江苏省苏州市高新区医疗卫生科技计划项目(2018Q004);江苏省苏州市高新区人民医院科学创新基金项目(SGY2020A01);石河子大学科技项目(ZZZC202124)

Expression of m6A methylation binding protein YTHDF2 in esophageal carcinoma tissue and its effect on proliferation and migration of esophageal carcinoma cells

Yandi MA¹,Xiangyun LU¹,Shangfeng HE¹,Xueyan YU¹,Yunhua HU¹,Haixia GAO¹,Yunzhao CHEN²,Jie YU²,Wenjie WANG²,Feng LI^1,³,Xiaobin CUI^1,⁴()

^1.Department of Pathology, School of Medical Sciences, Shihezi University, Shihezi 832002, China
^2.Department of Pathology, Suzhou High Tech Zone People’s Hospital, Suzhou 215000, China
^3.Department of Pathology and Medical Research Center, Beijing Chaoyang Hospital, Capital Medical University, Beijing 100020, China
^4.Department of Pathology, Affiliated Nanjing Drum Tower Hospital, School of Medical Sciences, Nanjing University, Nanjing 210008, China

Received:2021-11-24 Online:2022-07-28 Published:2022-07-26
Contact: Xiaobin CUI E-mail:342029924@qq.com

摘要/Abstract

摘要： 目的

探讨N6-甲基腺嘌呤（m6A）甲基化修饰结合蛋白YTH结构域连接蛋白2（YTHDF2）在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中表达及其对食管癌细胞生物学行为的影响，阐明其可能的作用机制。

方法

免疫组织化学法检测113例ESCC组织和95例癌旁正常食管上皮组织中YTHDF2蛋白表达情况，分析YTHDF2蛋白表达与ESCC患者临床病理特征和预后的关系。将体外培养的食管癌Eca109和EC9706细胞分为对照组（转染si-NC）和si-YTHDF2组（分别转染si-YTHDF2#1和si-YTHDF2#2）。Western blotting法检测各组细胞中YTHDF2蛋白表达水平，CCK-8法检测各组细胞增殖能力，平板克隆实验检测各组细胞克隆形成数，Transwell小室实验检测各组细胞中迁移细胞数。

结果

YTHDF2蛋白主要表达于ESCC细胞的细胞质，少量表达于细胞核，其在ESCC组织中的表达强度明显高于癌旁正常食管上皮组织（P<0.01）。不同发病年龄和 TNM分期ESCC患者间YTHDF2蛋白表达强度比较差异有统计学意义（P=0.008，P=0.041）。Kaplan-Meier 生存分析，与YTHDF2低表达组比较，YTHDF2高表达组ESCC患者生存率明显降低（P=0.035）。CCK-8法和平板克隆实验，与对照组比较，si-YTHDF2#1组和si-YTHDF2#2组食管癌细胞的增殖活性明显降低（P<0.05），克隆形成数明显减少（P<0.01）。Transwell 小室实验，与对照组比较，si-YTHDF2#1组和si-YTHDF2#2组食管癌细胞中迁移细胞数明显减少（P<0.01）。

结论

YTHDF2在ESCC组织中的表达强度明显高于正常食管上皮组织，敲低YTHDF2表达可抑制食管癌细胞的增殖、克隆形成和迁移。

关键词: 食管肿瘤, 鳞状细胞癌, YTH结构域连接蛋白2, 细胞增殖, 细胞迁移

Abstract:

Objective To investigate the expression of N6-methyladenosine（m6A） methylation binding protein YTH domain-containing family protein 2 （YTHDF2） in the esophageal squamous cell carcinoma （ESCC） tissue and its effect on the biological behavior of esophageal carcinoma cells，and to clarify its possible mechanism.

Methods

The expressions of YTHDF2 protein in 113 cases of ESCC tissue and 95 cases of normal tissue adjacent to esophageal carcinoma were detected by immunohistochemical method. The relationships between the expression of YTHDF2 protein and the clinicopathological features and prognosis of the ESCC patients were analyzed.The Eca109 and EC9706 cells cultured in vitro were divided into control group （transfected with si-NC） and si-YTHDF2 groups （transfected with si-YTHDF2#1 and si-YTHDF2#2）. The expressions of YTHDF2 protein in the cells in various groups were detected by Western blotting method. The proliferation abilities of cells in various groups were detected by CCK-8 method， the number of colony formation in various groups was detected by colony formation experiment， and the number of migration cells in various groups were detected by Transwell chamber assay.

Results

The YTHDF2 protein mainly expressed in the cytoplasm of ESCC cells and a small amount of YTHDF2 protein expressed in the nucleus.The expression amount of YTHDF2 protein in ESCC tissue was significantly higher than that in paracancerous normal tissue （P<0.01）. There were significant differences in the expression intensities of YTHDF2 protein in the ESCC patients with different ages of onset and TNM stages （P=0.008，P=0.041）. The Kaplan-Meier survival analysis showed that compared with YTHDF2 low expression group，the survival time of the patients in YTHDF2 high expression group was significantly shortened（P<0.05）. The CCK-8 method and colony formation experiment results showed that the proliferation activities and the number of colony formation of esophageal carcinoma cells in si-YTHDF2 transfection groups were significantly lower than those in control group （P<0.01）. The Transwell chamber assay results showed that the number of migration esophageal carcinoma cells in si-YTHDF2 transfection groups was significantly lower than that in control group （P<0.01）.

Conclusion

The expression of YTHDF2 in ESCC tissue is significantly higher than that in the normal tissue. YTHDF2 knockdown contributes to inhibiting the proliferation， colony formation and migration of esophageal carcinoma cells.

Key words: Esophageal neoplasms, Squamous cell carcinoma, YTH domain-containing family protein 2, Cell proliferation, Cell migration

中图分类号:

R735.1

马琰迪,卢香云,何尚峰,俞雪燕,胡云华,高海霞,陈云昭,禹洁,王文洁,李锋,崔晓宾. m6A甲基化修饰结合蛋白YTHDF2在食管癌组织中的表达及其对食管癌细胞增殖和迁移的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(4): 962-970.

Yandi MA,Xiangyun LU,Shangfeng HE,Xueyan YU,Yunhua HU,Haixia GAO,Yunzhao CHEN,Jie YU,Wenjie WANG,Feng LI,Xiaobin CUI. Expression of m6A methylation binding protein YTHDF2 in esophageal carcinoma tissue and its effect on proliferation and migration of esophageal carcinoma cells[J]. Journal of Jilin University(Medicine Edition), 2022, 48(4): 962-970.

图/表 10

表1

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表2

表3

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表4

表5

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参考文献 20

1	BRAY F， FERLAY J， SOERJOMATARAM I， et al. Global cancer statistics 2018： GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries［J］. CA Cancer J Clin，2018，68（6）：394-424.
2	曹雅杰，包晓红，李书珍，等. 胰岛素样生长因子1受体抑制剂NVP-AEW541对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制［J］. 吉林大学学报（医学版）， 2021， 47（5）： 1131-1138.
3	CUI J， WEN Q Q， TAN X J， et al. A genomic-clinicopathologic nomogram predicts survival for patients with laryngeal squamous cell carcinoma［J］. Dis Markers， 2019， 2019： 5980567.
4	张璐瑶，汪丽钰，陈乾，等. m6A甲基化修饰与消化道恶性肿瘤关系的研究进展［J］. 医学综述， 2021， 27（9）： 1753-1758.
5	LI F， ZHAO D， WU J， et al. Structure of the YTH domain of human YTHDF2 in complex with an m6A mononucleotide reveals an aromatic cage for m6A recognition［J］. Cell Res，2014，24（12）：1490-1492.
6	牛云峰，杨阳，王欣晨，等. 食管癌组织中PTPN12的表达及其对Yes-2细胞恶性生物学行为的影响［J］. 临床与实验病理学杂志， 2021， 37（6）： 643-649.
7	ZHU J， MA S R， CHEN R， et al. Biological correlates before esophageal cancer screening and after diagnosis［J］. Sci Rep， 2021， 11（1）： 17015.
8	刘翼，祝琳，康敏. miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响及其机制［J］. 吉林大学学报（医学版）， 2019， 45（6）： 1346-1352.
9	FANG R P， CHEN X， ZHANG S C， et al. EGFR/SRC/ERK-stabilized YTHDF2 promotes cholesterol dysregulation and invasive growth of glioblastoma［J］. Nat Commun， 2021， 12（1）： 177.
10	王月帆，葛春梅，尹昊瓒，等. m6A甲基化修饰识别蛋白YTHDF2在肝癌组织中的表达及临床意义［J］. 现代生物医学进展， 2021， 21（9）： 1601-1606.
11	刘冰，汪涛，臧丽丽，等. RNA甲基化阅读器蛋白YTHDF2对卵巢癌细胞增殖的调控作用［J］. 解剖科学进展， 2021， 27（1）： 68-70， 74.
12	李子玮，罗清雅，王浩丞，等. 敲低YTH结构域N6甲基腺嘌呤（m6A）RNA结合蛋白2（YTHDF2）抑制宫颈癌细胞增殖并促进其凋亡［J］. 细胞与分子免疫学杂志，2020，36（3）：255-263.
13	赵琪，何长海，王志，等. 敲低ALKBH3对膀胱癌细胞生长、迁移与肿瘤血管生成的抑制作用及其机制［J］.吉林大学学报（医学版），2021，47（2）：397-406.
14	LI J F， XIE H Y， YING Y F， et al. YTHDF2 mediates the mRNA degradation of the tumor suppressors to induce AKT phosphorylation in N6-methyladenosine-dependent way in prostate cancer［J］. Mol Cancer， 2020， 19（1）： 152.
15	母润红，刘馨竹，林睿，等. PRDX6过表达对肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其分子机制［J］. 吉林大学学报（医学版）， 2021， 47（3）： 559-565.
16	许瀚，孟祥瑞，周悦，等.FNDC1蛋白在食管癌组织中的表达及干扰FNDC1表达对食管癌细胞生物学行为的影响［J］. 郑州大学学报（医学版），2020，55（4）： 445-450.
17	XIE H Y， LI J F， YING Y F， et al. METTL3/YTHDF2 m6A axis promotes tumorigenesis by degrading SETD7 and KLF4 mRNAs in bladder cancer［J］. J Cell Mol Med， 2020， 24（7）： 4092-4104.
18	HUANG T， LIU Z D， ZHENG Y， et al. YTHDF2 promotes spermagonial adhesion through modulating MMPs decay via m6A/mRNA pathway［J］. Cell Death Dis， 2020， 11（1）： 37.
19	LI Y， SHENG H， MA F， et al. RNA m6A reader YTHDF2 facilitates lung adenocarcinoma cell proliferation and metastasis by targeting the AXIN1/Wnt/β-catenin signaling［J］.Cell Death Dis，2021，12（5）： 479.
20	ZHANG C Z， HUANG S Z， ZHUANG H K， et al. YTHDF2 promotes the liver cancer stem cell phenotype and cancer metastasis by regulating OCT4 expression via m6A RNA methylation［J］. Oncogene， 2020， 39（23）： 4507-4518.

Group	n	YTHDF2			χ²	P
Group	n	No expression	Low expression	High expression	χ²	P
ESCC tissue	113	0	33	80	180.66	<0.01
Normal tissue	95	58	37	0	180.66	<0.01

Clinicopathological feature	n	YTHDF2		χ²	P
Clinicopathological feature	n	Low expression	High expression	χ²	P
Gender
Male	38	13	25	0.432	0.580
Female	21	9	12	0.432	0.580
Age of onset（year）
<65	41	20	21	7.590	0.008
≥65	18	2	16	7.590	0.008
Location
Up & Middle	42	14	28	0.975	0.380
Low	17	8	9	0.975	0.380
Grade
G1	19	7	12	1.148	0.563
G2	28	12	16
G3	12	3	9
Tumor
T1+T2	20	7	13	0.068	1.000
T3	39	15	24	0.068	1.000
Node
N0	26	11	15	0.501	0.590
N1	33	11	22	0.501	0.590
Metastatis
M0	52	21	31	1.797	0.240
M1	7	1	6	1.797	0.240
TNM
Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ	48	21	27	4.597	0.041
Ⅳ	11	1	10	4.597	0.041

Group	Proliferation activity
Group	(t/d) 1	2	3	4	5
Control	0.205±0.002	0.298±0.004	0.422±0.007	0.626±0.002	1.392±0.004
si-YTHDF2#1	0.200±0.005	0.277±0.001^*	0.347±0.007^*	0.442±0.013^*	0.883±0.022^*
si-YTHDF2#2	0.214±0.006	0.305±0.005	0.349±0.006^*	0.378±0.004^*	0.548±0.009^*

Group	Proliferation activity
Group	(t/d) 1	2	3	4	5
Control	0.264±0.004	0.306±0.006	0.441±0.009	0.799±0.025	1.851±0.032
si-YTHDF2#1	0.252±0.002^*	0.281±0.005^*	0.434±0.003	0.520±0.008^*	1.128±0.003^*
si-YTHDF2#2	0.216±0.002^*	0.248±0.003^*	0.365±0.004^*	0.423±0.006^*	0.694±0.022^*

[1]	王志娟,张明姝,叶丽平. 血小板衍生生长因子D通过ERK信号通路对肺癌H1299细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(4): 898-904.
[2]	李玮柏,曹娟,郭秀,林欣萍,董春玲,李波. 肿瘤相关巨噬细胞来源IL-6通过上调肿瘤细胞中LIF表达对口腔鳞状细胞癌Cal27细胞侵袭和迁移的促进作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(4): 946-953.
[3]	汪国武,姚远,张雨,徐娜,刘芳. miR-152降低低密度脂蛋白受体表达对子宫内膜癌细胞增殖和侵袭的抑制作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 591-599.
[4]	李官虎,郎庆旭,刘纯岩,刘沁,耿梦柔,李晓倩,王珍琦. 丙戊酸联合X射线照射对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 622-629.
[5]	颜培玉,张爱臣,章宏,李杨,张萌萌,洛梦泽,潘颖. 脂肪间充质干细胞对卵巢早衰模型大鼠的治疗作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 648-656.
[6]	刘翠兰,胡凤爱,刘晶,王丹,邱长云,柳敦江,赵娣. 脂联素受体激动剂AdiopRon对胶质瘤细胞生物学行为的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 702-710.
[7]	吴壮志,贺小宁,陈思祺. miR-124-3p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭的抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(3): 718-727.
[8]	李小燕,张维,何杰. REG1A通过调控Wnt/β-catenin信号通路对肺腺癌细胞增殖和迁移的促进作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(2): 444-453.
[9]	许广松,蒋海兵,盘箐,李国庆. 桦木酸对胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭的抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 122-128.
[10]	周超锋,周世繁,田青,王赛,李洪霖,马纯政. lncRNA-NORAD表达对食管癌Eca-109细胞生物学行为的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 33-43.
[11]	王泽泰,娄丹丹,彭燕,朱道琦,李爱武,宫凤英,吕英,范钦. 鼻咽癌斑马鱼移植瘤模型的构建及姜黄素对CNE-2细胞的抑制作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 9-17.
[12]	母润红,艾一玖,李雨澎,林睿,叶思萍,马方,郭笑. 重组人IL-17A在胃癌组织中的表达及其对胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2021, 47(6): 1510-1517.
[13]	唐乃高,郑根建. miR-762通过靶向调控NCOR1表达对人舌鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2021, 47(5): 1099-1107.
[14]	曹雅杰,包晓红,李书珍,耿海营,蔡曾晓瑞,代春美,李宁. 胰岛素样生长因子1受体抑制剂NVP-AEW541对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2021, 47(5): 1131-1138.
[15]	王琛,田君,程海玲. 人脐带间充质干细胞对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2021, 47(5): 1187-1193.

m6A甲基化修饰结合蛋白YTHDF2在食管癌组织中的表达及其对食管癌细胞增殖和迁移的影响

Expression of m6A methylation binding protein YTHDF2 in esophageal carcinoma tissue and its effect on proliferation and migration of esophageal carcinoma cells

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