摘要：

［摘 要］ 目的：建立检测大鼠神经激肽1(NK1)受体mRNA的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法，为检测大鼠NK1受体基因表达提供有效的手段。方法：提取大鼠中脑总RNA，扩增NK1受体基因片段，将其克隆入pMD-18T载体，制作NK1受体标准品质粒；应用SYBR Green Ⅰ双链嵌合染料，对连续稀释的标准品质粒进行实时PCR分析，评价所建立方法的检测灵敏度；对PCR产物进行溶解曲线分析评价其特异性。结果：成功构建NK1受体标准品质粒，经酶切及测序鉴定，目的片段已插入pMD-18T载体；所建立的实时定量PCR方法的最低检测限度均为每反应102个拷贝，在每反应102～109拷贝范围内，荧光信号达到设定阈值所经历的循环数（Ct值）与起始模板浓度具有良好的线性关系，r=0.999。结论：所建立的检测大鼠NK1受体mRNA的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR方法具有敏感性高、特异性强和线性范围广等特点，适用于对大鼠各种组织NK1受体的大量样本检测。

关键词: 实时定量PCR；SYBR Green Ⅰ；神经激肽；大鼠,Wistar

中图分类号: 

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