人乳头瘤病毒16型E7基因原核表达载体的构建及表达

J4 ›› 2011, Vol. 37 ›› Issue (4): 661-664.

人乳头瘤病毒16型E7基因原核表达载体的构建及表达

徐丽娟¹,温剑平^2,史红艳¹,孙延波¹

1.吉林大学白求恩医学院病原生物学系,吉林长春 130021； 2.吉林大学白求恩医学院分子生物学系|
吉林长春 130021

收稿日期:2010-11-17 出版日期:2011-07-28 发布日期:2011-07-28
通讯作者: 孙延波 (Tel: 0431-85619574,E-mail: sunyb@jlu.edu.cn) E-mail:sunyb@jlu.edu.cn
作者简介:徐丽娟 (1982-),女,内蒙古自治区赤峰市人|医学硕士|主要从事病毒分子遗传学研究。
基金资助:
吉林省卫生厅重点实验室项目资助课题 (2008Z015)

Construction and expression of human papillomavirus type-16 E7 gene in prokaryotic expressing vector

XU Li-juan¹,WEN Jian-ping²,SHI Hong-yan¹,SUN Yan-bo¹

1. |Department of Pathogenobiology|Norman Bethune College of Medicine|Jilin
University, |Changchun 130021;China;2. Department of Molecular Biology,Norman Bethune College of Medicine|Jilin University|Changchun 130021,China

Received:2010-11-17 Online:2011-07-28 Published:2011-07-28

摘要/Abstract

摘要：

目的: 构建人乳头瘤病毒16型 (HPV-16) E7基因原核表达载体，观察目的基因的蛋白表达。方法:人工合成HPV16 E7基因核苷酸序列，利用特异性引物通过聚合酶链反应扩增HPV16 E7基因，并克隆至pGEX-4T1原核表达载体，构建重组表达载体pGEX-4T1-HPV16-E7。将其转化到工程菌Rosetta后，经IPTG诱导表达，进行E7-GST融合蛋白的SDS-PAGE分析和Ni2+-NTA亲和层析纯化。结果: E7基因PCR扩增产物和重组表达质粒的双酶切产物经琼脂糖
凝胶电泳，均可见300 bp的目的基因条带。表达的重组蛋白经SDS-PAGE电泳和纯化后,在相对分子质量约36 000处有特异性表达带,与预期相符。结论: 在原核系统中含E7基因的重组质粒可有效表达E7-GST融合蛋白。

关键词: 人乳头瘤病毒16型；聚合酶链式反应；原核表达载体

Abstract:

Abstract:Objective To construct prokaryotic expression vector harboring human papillomavirus-16 E7(HPV-16) gene and observe the E7 protein expression.Methods Synthetic E7 gene was amplified using polymerase chain reaction and subcloned into prokaryotic expressing vector pGEX-4T1.The recombinant plasmids,pGEX-4T1-HP
V16-E7,were transferred into engineering bacteria Rosetta,and the fusion proteins E7-GST were analyzed on SDS-PAGE and purified by　Ni2+-NTA affinity chromatography under induction with IPTG.Results The target gene fragment at a length of 300 bp was observed on the agarose gel electrophoresis pattern and PCR.SDS-PAGE analysis showed that the expressed recombinant protein,with a relative molecular mass of about 36 000,could be found.Conclusion The recombinant protein,E7-GST,is effectively expressed in prokaryotic expression system.

Key words: human papillomavirus-16；polymerase chain reaction；prokaryotic expression vector

中图分类号:

徐丽娟,温剑平,史红艳,孙延波 . 人乳头瘤病毒16型E7基因原核表达载体的构建及表达[J]. J4, 2011, 37(4): 661-664.

XU Li-juan,WEN Jian-ping,SHI Hong-yan,SUN Yan-bo. Construction and expression of human papillomavirus type-16 E7 gene in prokaryotic expressing vector[J]. J4, 2011, 37(4): 661-664.

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