吉林大学学报(医学版) ›› 2023, Vol. 49 ›› Issue (3): 733-741.doi: 10.13481/j.1671-587X.20230323
Hui MIAO,Congxiu MIAO(),Na LI,Jing HAN
摘要:
目的 探讨子宫内膜异位症(EMT)患者子宫内膜组织中长链非编码RNAs(lncRNAs)HAND2-AS1对异位子宫内膜(EC)组织中子宫内膜基质细胞(ESCs)增殖、迁移和侵袭能力的影响,并阐明其可能机制。 方法 收集30例EMT患者(EMT组)的EC组织和30例健康育龄女性(对照组)的子宫内膜组织,分离子宫内膜组织获取ESCs。采用脂质体转染法转染EMT患者EC组织的ESCs,并将ESCs分为pcDNA组(转染pcDNA空质粒)、HAND2-AS1组(转染HAND2-AS1过表达质粒)、mimic NC组(转染mimic NC)、miR-21 mimic组(转染miR-21 mimic)、pcDNA+mimic NC组(联合转染pcDNA和mimic NC)、HAND2-AS1+mimic NC组(联合转染HAND2-AS1过表达质粒和mimic NC)、pcDNA+miR-21 mimic组(联合转染pcDNA空质粒和miR-21 mimic)和HAND2-AS1+miR-21 mimic组(联合转染HAND2-AS1过表达质粒和miR-21 mimic),另设未转染的细胞为空白对照组。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组研究对象子宫内膜组织和ESCs中HAND2-AS1 mRNA和miR-21表达水平,采用Pearson相关系数分析其相关性。采用生物信息学软件Starbase预测lncRNA HAND2-AS1与miR-21的靶向作用关系,荧光素酶基因报告实验进行验证。CCK-8法检测各组ESCs增殖活性,Transwell小室实验检测ESCs的迁移和侵袭数。 结果 2组研究对象年龄、体质量指数(BMI)和血清中卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)及催乳素(PRL)水平比较差异均无统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,EMT组患者血清中雌二醇(E2)水平升高(P<0.05),EMT组患者EC组织中HAND2-AS1 mRNA表达水平降低(P<0.05),miR-21表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,EMT组ESCs中HAND2-AS1 mRNA表达水平降低(P<0.05),miR-21表达水平明显升高(P<0.01)。Pearson相关系数分析,对照组研究对象HAND2-AS1与miR-21表达水平无明显相关性(r=0.34,P>0.05),EMT组患者ES组织中和ESCs中HAND2-AS1与miR-21表达水平呈负相关关系(r=-0.57,P<0.05)。RT-qPCR法检测,与空白对照组比较,HAND2-AS1组ESCs中HAND2-AS1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01),miR-21 mimic组ESCs中miR-21表达水平明显升高(P<0.01),HAND2-AS1+mimic NC组ESCs中miR-21表达水平降低(P<0.05),pcDNA+miR-21 mimic组ESCs中miR-21表达水平明显升高(P<0.01);与pcDNA+ miR-21 mimic组比较,HAND2-AS1+miR-21 mimic组ESCs中miR-21表达水平降低(P<0.05)。lncRNA HAND2-AS1与miR-21存在潜在结合位点;双荧光素酶基因报告实验,与mimic NC组比较,miR-21 mimic组HAND2-AS1-WT中荧光素酶活性明显降低(P<0.01)。与空白对照组比较,HAND2-AS1+mimic NC组ESCs增殖活性、迁移和侵袭数均明显降低(P<0.05或P<0.01),pcDNA+miR-21 mimic组ESCs增殖活性、迁移和侵袭数升高(P<0.05);与pcDNA+miR-21 mimic组比较,HAND2-AS1+miR-21 mimic组ESCs增殖活性、迁移和侵袭数均降低(P<0.05)。 结论 HAND2-AS1在EMT患者EC组织和ESCs中表达明显降低,其可通过靶向抑制miR-21表达下调EC组织中ESCs的增殖、迁移和侵袭,从而参与EMT的发生发展。
中图分类号: