IκB激酶相互作用蛋白在宫颈癌组织中的表达及其对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

doi:10.13481/j.1671-587X.20250208

摘要/Abstract

摘要：

目的探讨IκB激酶相互作用蛋白（IKBIP）在宫颈癌组织肿瘤细胞（TCCCT）中的表达与患者临床病理特征和预后的关系及其对宫颈癌（CC）HeLa和SiHa细胞生物学行为的影响，阐明其可能的作用机制。方法采用GENT2数据库和Kaplan-Meier（K-M）plotter数据库分析CC及正常宫颈组织中的IKBIP mRNA表达水平差异以及其表达水平与CC患者临床预后的关系。基因集富集分析（GSEA）软件中选取参考基因集为Hallmark，进行相关通路富集。采用免疫组织化学法检测IKBIP蛋白在TCCCT和正常宫颈组织上皮细胞（ECNCT）中的表达情况，分析其表达水平与CC患者临床病理特征和预后的关系；单因素和多因素Cox回归分析影响CC患者预后的危险因素。构建IKBIP敲低的CC细胞（HeLa和SiHa细胞），实验分为sh-NC组和sh-IKBIP组；采用Western blotting法评估各组细胞中IKBIP蛋白表达情况；细胞计数试剂盒8（CCK-8）和5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）法检测各组细胞增殖活性及EdU阳性细胞率，Transwell小室实验检测各组迁移细胞数和侵袭细胞数，Western blotting法检测各组细胞中E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）和Snail蛋白表达水平。结果 GENT2数据库分析，CC组织中IKBIP mRNA表达水平高于正常宫颈组织（P<0.001）。GSEA富集分析，上皮-间质转化（EMT）通路位于IKBIP高表达组的第1位。免疫组织化学法，TCCCT中IKBIP蛋白阳性表达率高于ECNCT（50.5% vs 8.0%），且其过表达与FIGO分期（2018）和肿瘤分化程度有关联（P<0.05）；单因素和多因素Cox回归分析，淋巴结转移（LNM）和IKBIP高表达是影响CC患者总生存期（OS）及无进展生存期（PFS）的独立危险因素（P<0.05）。Western blotting法，与sh-NC组比较，sh-IKBIP组细胞IKBIP蛋白表达水平明显降低（P<0.05）；CCK-8和EdU法，与sh-NC组比较，sh-IKBIP组细胞增殖活性和EdU阳性百分率均明显降低（P<0.05）；Transwell小室实验，与sh-NC组比较，sh-IKBIP组迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少（P<0.05）。Western blotting法，与sh-NC组比较，sh-IKBIP组细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高（P<0.05），N-cadherin和Snail蛋白表达水平均降低（P<0.05）。结论 IKBIP蛋白在CC细胞中高表达，且与CC患者不良预后有密切关联。下调IKBIP蛋白表达可抑制CC细胞的增殖、迁移和侵袭能力及EMT进程。

关键词: IκB激酶相互作用蛋白, 宫颈肿瘤, 细胞增殖, 细胞迁移, 上皮-间质转化

Abstract:

Objective To explore the correlation between IκB kinase-interacting protein （IKBIP） expression in tumor cells within cervical cancer tissues （TCCCT） and the clinical pathological characteristics and prognosis of patients， as well as its impact on the biological behaviors of cervical cancer （CC） cells HeLa and SiHa， and to elucidate its potential mechanism. Methods GENT2 and Kaplan-Meier plotter databases were utilized to analyze the differential expression of IKBIP mRNA in CC and normal cervical tissues， as well as its correlation with the clinical prognosis of CC patients. The Hallmark reference gene set was chosen for pathway enrichment analysis using the Gene Set Enrichment Analysis（GSEA） software. Immunohistochemistry method was used to detect the IKBIP protein expression in TCCCT and epithelial cells in normal cervical tissue （ECNCT）， and analyze the correlations between its expression level and clinicopathological characteristics and prognosis of CC patients. Furthermore， univariate and multivariate Cox regression analyses were performed to identify the risk factors impacting the prognosis of CC patients. The stably transfected cells of CC （HeLa cells and SiHa cells） with IKBIP knockdown were established for the experiment， which were divided into sh-NC group and sh-IKBIP group. The expression of IKBIP protein in various groups was assessed using Western blotting method. The cell proliferation activity and the percentage of 5-ethynyl-2'-deoxyuridine （EdU） positive cells were measured using cell counting kit-8 （CCK-8） and EdU methods， while Transwell chamber assay was employed to determine the numbers of migration and invasion cells in various groups. Additionally， the expression levels of E-cadherin， N-cadherin， and Snail proteins in the cells in various groups were analyzed by Western blotting method. Results The GENT2 database analysis revealed that the expression level of IKBIP mRNA in CC tissue was higher than that in normal cervical tissue （P<0.001）. The GSEA enrichment analysis identified the epithelial-mesenchymal transition （EMT） pathway as the top-ranked pathway in IKBIP high-expression group. The immunohistochemistry results indicated the positive expression rate of IKBIP protein in TCCCT was higher than that in ECNCT （50.5% vs 8.0%）， and its over-expression was associated with FIGO stage （2018） and differentiation grade of tumor （P<0.05）. The univariate and multivariate Cox regression analyses suggested that lymph node metastasis （LNM） and high expression of IKBIP were the risk factors affecting the overall survival （OS） and progression-free survival （PFS） of CC patients （P<0.05）. The Western blotting method results showed that compared with sh-NC group， the expression level of IKBIP protein in the cells in sh-IKBIP group was decreased （P<0.05）. The CCK-8 and EdU assay results showed that compared with sh-NC group， the proliferation activity and the percentage of EdU positive cells in sh-IKBIP group were decreased （P<0.05）. The Transwell chamber assay results showed that compared with sh-NC group， the numbers of migration and invasion cells in sh-IKBIP group were significantly decreased （P<0.05）. Additionally， the Western blotting method results indicated that compared with sh-NC group， the expression level of E-cadherin protein in sh-IKBIP group in CC cells was increased （P<0.05）， while the expression levels of N-cadherin and Snail protein were decreased （P<0.05）. Conclusion The expression of IKBIP protein is significantly up-regulated in HeLa and SiHa cells derived from CC， and it is closely correlated with poor prognosis in CC patients. Suppression of IKBIP protein expression can effectively inhibit the proliferation， invasion and migration capabilities as well as EMT process of CC cells.

Key words: I kappa B kinase-interacting protein, Cervical neoplasms, Cell proliferation, Cell invasion, Epithelial-mesenchymal transition

中图分类号:

R711.74

王妍,赵邹宇,于盼盼,杨萍. IκB激酶相互作用蛋白在宫颈癌组织中的表达及其对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2025, 51(2): 341-351.

Yan WANG,Zouyu ZHAO,Panpan YU,Ping YANG. Expression of I kappa B kinase-interacting protein in cervical cancer tissue and its effect on proliferation, migration and invasion of cervical cancer cells[J]. Journal of Jilin University(Medicine Edition), 2025, 51(2): 341-351.

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参考文献 18

1	SHARMA S， DEEP A， SHARMA A K. Current treatment for cervical cancer： an update［J］. Anticancer Agents Med Chem， 2020， 20（15）： 1768-1779.
2	SUNG H， FERLAY J， SIEGEL R L， et al. Global cancer statistics 2020： GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries［J］. CA Cancer J Clin， 2021， 71（3）： 209-249.
3	COLOMBO N， DUBOT C， LORUSSO D，et al. Pembrolizumab for persistent，recurrent，or metastatic cervical cancer ［J］. N Engl J Med， 2021， 385（20）： 1856-1867.
4	HOFER-WARBINEK R， SCHMID J A， MAYER H， et al. A highly conserved proapoptotic gene， IKIP located next to the APAF1 gene locus， is regulated by p53［J］. Cell Death Differ， 2004， 11（12）： 1317-1325.
5	吴海峰. IKIP在NF-κB介导的炎症反应中的作用及机制［D］. 济南：山东大学， 2020.
6	赵学英. IKIP通过靶向IKKβ负向调节NF-κB介导的炎性细胞因子的表达［D］. 济南：山东大学， 2013.
7	YANG Y， WANG J， XU S H， et al. IKBIP is a novel EMT-related biomarker and predicts poor survival in glioma［J］. Transl Neurosci， 2021， 12（1）： 9-19.
8	呙文静. IKIP在胶质母细胞瘤中的功能和机制研究的初步探索［D］. 武汉：华中科技大学， 2022.
9	刘秤华，陈敖峥，丘瑾，等. DNA甲基化在HPV相关宫颈癌中的研究进展［J］. 同济大学学报（医学版）， 2024， 45（4）： 600-606.
10	MAYADEV J S， KE G H， MAHANTSHETTY U， et al. Global challenges of radiotherapy for the treatment of locally advanced cervical cancer［J］. Int J Gynecol Cancer， 2022， 32（3）： 436-445.
11	LI K S， HUANG G L， WANG Z Y， et al. IKBIP， a novel glioblastoma biomarker， maintains abnormal proliferation of tumor cells by inhibiting the ubiquitination and degradation of CDK4［J］. Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis， 2023， 1869（1）： 166571.
12	LIANG J， LI X， XU J， et al. hsa_circ_0072389， hsa_circ_0072386， hsa_circ_0008621， hsa_circ_0072387， and hsa_circ_0072391 aggravate glioma via miR-338-5p/IKBIP［J］. Aging （Albany NY）， 2021， 13（23）： 25213-25240.
13	CHEN T Y， LIU Y， CHEN L， et al. Identification of the potential biomarkers in patients with glioma： a weighted gene co-expression network analysis［J］. Carcinogenesis， 2020， 41（6）： 743-750.
14	BI C Y， WANG Z， XIAO Y F， et al. I kappa B kinase interacting protein as a promising biomarker in pan-cancer： a multi-omics analysis［J］. Front Genet， 2023， 14： 1138137.
15	WU H F， LIU H S， ZHAO X Y， et al. IKIP negatively regulates NF-κB activation and inflammation through inhibition of IKKα/β phosphorylation［J］. J Immunol， 2020， 204（2）： 418-427.
16	李丹丹，谭艳，唐俊明，等. 细胞上皮间充质转化转化态异质性及可塑性的最新研究进展［J］. 湖北医药学院学报， 2023， 42（2）： 216-223.
17	刘海英，陈峰，姚嘉. 下调胰岛素样生长因子抑制miR-767-5p的表达对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间充质转化的影响［J］. 实用医学杂志， 2023， 39（22）： 2878-2884.
18	徐胜男，丛建超，吴涵宇，等. 微小RNA在宫颈癌上皮-间充质转化调控中的作用及机制［J］. 中国性科学， 2023， 32（11）： 84-88.

Tissue	n	IKBIP		χ²	P
Tissue	n	Low	High	χ²	P
Normal cervical tissue	25	23(92.0)	2(8.0)	14.849	0.001
CC tissue	101	50(49.5)	51(50.5)	14.849	0.001

Characteristics	n	IKBIP		χ²	P
Characteristics	n	Low	High	χ²	P
Age (year)				0.012	0.912
<50	45	22(48.9)	23(51.1)
≥50	56	28(50.0)	28(50.0)
FIGO stage				39.404	<0.001
≤IB1	47	39(83.0)	8(17.0)
≥IB2	54	11(20.4)	43(79.6)
Pathological type				0.939	0.333
SCC	75	35(46.7)	40(53.3)
Adenocarcinoma	26	15(57.7)	11(42.3)
Differentiation grade				20.610	<0.001
Low	23	21(91.3)	2(8.7)
High	78	29(37.2)	49(62.8)
LVSI				1.381	0.240
Negative	80	42(52.5)	38(47.5)
Positive	21	8(38.1)	13(61.9)
LNM				1.532	0.216^a
Negative	95	49(51.6)	46(48.4)
Positive	6	1(16.7)	5(83.3)

Characteristics	Univariate Cox analysis			Multivariate Cox analysis
Characteristics	HR	95%CI	P	HR	95%CI	P
Age（<50 years old vs ≥50 years old）	0.633	0.234—1.715	0.369
Differentiation grade（High vs low）	1.768	0.229—13.670	0.585
Type（SCC vs adenocarcinoma）	1.682	0.610—4.636	0.315
FIGO stage（≤IB1 vs ≥IB2）	1.998	0.534—7.474	0.304
LNM（Positive vs negative）	8.551	2.956—24.733	<0.001	4.959	1.270—19.360	0.021
LVSI（Positive vs negative）	2.713	1.010—7.287	0.048	1.165	0.332—4.092	0.811
IKBIP expression （High vs low）	5.300	1.501—18.712	0.010	3.857	1.407—14.212	0.043

Characteristics	Univariate Cox analysis			Multivariate Cox analysis
Characteristics	HR	95%CI	P	HR	95%CI	P
Age（<50 years old vs ≥50 years old）	0.727	0.277—1.905	0.516
Differentiation grade（High vs low）	1.890	0.245—14.565	0.541
Type（SCC vs adenocarcinoma）	1.562	0.577—4.231	0.380
FIGO stage（≤IB1 vs ≥IB2）	1.418	0.438—4.586	0.559
LNM（Positive vs negative）	10.096	3.530—28.873	<0.001	6.213	2.099—18.390	0.001
LVSI（Positive vs negative）	2.466	0.938—6.482	0.067
IKBIP（High vs low）	5.790	1.649—20.321	0.006	4.222	1.157—15.406	0.029

[1]	孙淑妍,张华坤,周紫如,李锋,崔晓宾. 食管鳞状细胞癌组织中CRNN蛋白的表达及其过表达对食管鳞状细胞癌Eca9706细胞生物学行为的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2025, 51(2): 275-283.
[2]	卢梦云,韩语诚,胡溢洪,何旻蕙,张艳群,邹先琼. 糖脂转运蛋白对胰腺癌PANC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2025, 51(2): 284-295.
[3]	邓静,王萱,石长玉,杨斯琦,邹亲玲,金明. 一叶秋碱对人结肠癌SW620细胞增殖和凋亡的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2025, 51(2): 307-316.
[4]	杨英,赵亮,由涌,许倩,杨振军. 17β-雌二醇对海马神经干细胞增殖和分化的影响及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2025, 51(2): 317-324.
[5]	赵蒙蒙,王雅璐,许宇翔,杨凯歌,曹玉文,周文虎,费晶,王雯,罗成华,胡建明. 硫化氢合成酶CBS和CSE对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2025, 51(1): 34-43.
[6]	杨露,傅家财,李凤金,齐玲. 五味子乙素对胰腺癌细胞迁移和侵袭的抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2025, 51(1): 44-50.
[7]	赵芳,李珍玲,朴丽花,韩龙哲,崔银姬,权春姬,金雪梅. Yes相关蛋白对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2025, 51(1): 68-75.
[8]	王馨,赵杰瑞,郭玉苗,陈姝彤,侯宗昊,张若文. 沉默CD147基因对姜黄素抑制前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和诱导凋亡的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2024, 50(6): 1572-1586.
[9]	赵斌,杨金叶,李支尧,毕城伟,杨李波,施致裕,李心,张建朋,施远龙,杨勇,张国颖. miR-30c-5p对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用及其机制[J]. 吉林大学学报(医学版), 2024, 50(6): 1632-1643.
[10]	娄静,赵雷,朱岩洁,袁帅强,王菲,张杭洲,徐娇娇,余晓珂,侯留法. 扶正软坚抗癌方调控Akt/MDM2/P53信号通路对肝癌HepG2细胞恶性生物学行为的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2024, 50(6): 1654-1663.
[11]	鲁艳艳,许翔博,吴亚梅,刘雨齐,王涵,杨丽娟,王振江,肖梓屾,刘艳波. 宫颈病变和宫颈癌组织中嗜酸性粒细胞浸润及其临床意义[J]. 吉林大学学报(医学版), 2024, 50(6): 1691-1702.
[12]	王飞娜,米旭光,林秀英,付建华,刘磊,于歆悦,臧欢欢,刘霖君,陈士玲,方艳秋. Wnt/β-catenin信号通路抑制剂MSAB对人子宫内膜基质细胞纤维化反应的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2024, 50(5): 1266-1274.
[13]	刘春静,杨钰杰,赵薇,刘丽晶,王娜. 沉默CDC20基因通过抑制Wnt/β-连环蛋白信号通路对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的影响[J]. 吉林大学学报(医学版), 2024, 50(5): 1305-1312.
[14]	陈华,沙娜,刘宁,李阳,胡海军. 人骨髓间充质干细胞通过YAP影响人脂肪肉瘤SW872细胞的生物学行为[J]. 吉林大学学报(医学版), 2024, 50(4): 1000-1008.
[15]	杨永净,柯天洋,刘士新,王雪,许德权,刘婷婷,赵玲. 甲磺酸阿帕替尼联合放疗对肝癌HepG2细胞的体外协同增敏作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2024, 50(4): 1009-1015.